一种同时检测氟比洛芬酯异构体和氟比洛芬异构体的检测方法与流程

本发明属于药物分析，具体涉及一种对不同构型氟比洛芬酯异构体和氟比洛芬异构体进行分离定量的方法。

背景技术：

1、氟比洛芬酯(flurbiprofen axetil)，化学名称为2-氟-α-甲基-(1,1'-联苯)-4-乙酸1-(乙酰氧基)乙基酯，其分子式为c19h19fo4，分子量为330.36，其结构式如下：

2、

3、氟比洛芬酯是氟比洛芬的前体药物，用于手术后及各种癌症的镇痛。氟比洛芬酯注射液是一种非甾体类靶向镇痛药，通过在脊髓和外周抑制环氧化酶(cox)减少前列腺素的合成，降低手术创伤引起的痛觉过敏状态。脂微球制剂药效更强，起效更迅速，持续时间更长，且不易引起胃黏膜损伤等不良反应。其用于术后镇痛，优点在于没有中枢抑制作用，不影响处于麻醉状态患者的苏醒，可在术后立即使用。

4、研究发现，氟比洛芬酯的活性来源主要是其s构型的氟比洛芬酯(亦叫艾氟洛芬酯)，此外消旋体的胃肠毒副作用由于r构型氟比洛芬酯的存在而增加。因此理论而言，与消旋的氟比洛芬酯相比较，半量的s构型氟比洛芬酯就可以达到相同的治疗效果，而且可以降低由于使用消旋体中的r构型氟比洛芬酯带来的毒副反应。

5、cn 113834882a中国专利中，虽然也可以检测不同构型氟比洛芬酯异构体，但是其出峰顺序为：氟比洛芬酯r构型的第一个峰、氟比洛芬酯s构型的第一个峰、氟比洛芬酯r构型的第二个峰、氟比洛芬酯s构型的第二个峰，由于r构型与s构型的峰为交叉出现，任意两峰之间的分离度均需符合要求方可满足氟比洛芬酯r构型与s构型之间的检测，造成实际检测应用过程中的方法耐用性较差，易受到流动相或色谱条件的常规波动的影响。

技术实现思路

1、本发明的目的是在现有技术的基础上，提供一种同时检测不同构型氟比洛芬酯异构体和氟比洛芬异构体的检测方法，检测方法灵敏度高、专属性好，各峰之间的分离度好，对研究的各异构体峰均能有效分离，能满足任意构型氟比洛芬酯和氟比洛芬产品检测的需求。

2、本发明的技术方案如下：

3、一种同时检测氟比洛芬酯异构体和氟比洛芬异构体的检测方法，其检测方法采用高效液相色谱法，色谱条件为：

4、色谱柱：直链淀粉-三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)为填充剂的色谱柱；

5、检测波长：220-260nm；

6、柱温：20-40℃；

7、流速：0.8～1.2ml/min；

8、流动相：正己烷、异丙醇和乙醇的混合溶液；

9、洗脱方式为等度洗脱。

10、本发明所述的流动相选自正己烷、异丙醇和乙醇的混合溶液，在某些实施例中所述的流动相为正己烷-异丙醇-乙醇，其体积比为97：1：2；在另一些实施例中所述的流动相的混合溶液中还包括甲醇，更具体的为正己烷：异丙醇：甲醇：乙醇的混合溶液，在一些实施例中，正己烷：异丙醇：甲醇：乙醇的体积比为(96～98)：(0.5～1)：0.5：(1～2)；优选其体积比96.5：1：0.5：2。

11、本发明所述的同时检测氟比洛芬酯异构体和氟比洛芬异构体的检测方法中，对照品和供试品配制为0.1～1.0mg/ml；配制所用的溶液为流动相。

12、在一些实例中，本发明所述的色谱柱选择chiralpak ad-h的分离效果更佳，优选的色谱柱的长度为250mm，直径为4.6mm，填料粒径为5μm。

13、本发明所使用的流速为0.8～1.2ml/min，在某些实施例中所使用的流速为1.0ml/min。

14、对于本发明而言，柱温选择20-40℃，具体柱温可以但不局限于20℃、25℃、30℃、35℃、40℃，为了获得更好的分离效果，优选柱温为25-35℃，更优选为30℃。

15、本发明所使用的检测波长为220-260nm，优选为254nm。

16、本发明所使用的进样量为1-20μl，可以但不局限于5μl、10μl、15μl、20μl，优选为5μl。

17、采用本发明的技术方案，优势如下：

18、(1)本发明所述的氟比洛芬酯异构体和氟比洛芬异构体的检测方法，依次洗脱出6个色谱峰：氟比洛芬酯r构型的第一个峰、氟比洛芬酯s构型的第一个峰、氟比洛芬酯s构型的第二个峰、氟比洛芬酯r构型的第二个峰、氟比洛芬r构型峰、氟比洛芬s构型峰，其中氟比洛芬酯s构型的两个峰相邻，检测时可以无需要求氟比洛芬酯s构型两个峰的分离度，只需要求其与r构型的色谱峰分开即可，使得分析方法的耐用性更强，流动相或色谱条件的常规波动均不影响各异构体的分离和检测。

19、(2)在常规质量研究工作中，常需关注氟比洛芬酯或氟比洛芬中的不同异构体，本发明所述的的方法可以将二者的异构体进行很好的分离和检测，各峰的出峰顺序依次为：氟比洛芬酯r构型的第一个峰、氟比洛芬酯s构型的第一个峰、氟比洛芬酯s构型的第二个峰、氟比洛芬酯r构型的第二个峰、氟比洛芬r构型峰、氟比洛芬s构型峰，上述各异构体均可有效分离，适用性更广。

20、(3)采用本发明的流动相和特定的洗脱过程，溶剂易得，在其他条件的配合下，检测效率高，各个异构体峰灵敏度高，专属性好，耐用性强，并且能快速、有效、准确的监控不同构型氟比洛芬酯或氟比洛芬的含量，各峰之间的分离度均不小于1.5；各峰的理论板数不小于5000，各峰之间的分离度好，对研究的各个氟比洛芬异构体峰均能有效分离，能满足任意构型氟比洛芬酯产品的异构体检测需求。

技术特征：

1.一种同时检测氟比洛芬酯异构体和氟比洛芬异构体的检测方法，其特征在于，该检测方法采用高效液相色谱法，其色谱条件包括：采用直链淀粉-三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)为填充剂的色谱柱；采用正己烷、异丙醇和乙醇的混合溶液作为流动相。

2.根据权利要求1所述的同时检测氟比洛芬酯异构体和氟比洛芬异构体的检测方法，其特征在于，流动相中正己烷：异丙醇：乙醇的体积比为97：1：2。

3.根据权利要求1所述的同时检测氟比洛芬酯异构体和氟比洛芬异构体的检测方法，其特征在于，流动相的混合溶液中还包括甲醇，为正己烷、异丙醇、甲醇和乙醇的混合溶液，优选的正己烷：异丙醇：甲醇：乙醇的体积比为(96～98)：(0.5～1)：(0～0.5)：

4.根据权利要求1～3任一项所述的同时检测氟比洛芬酯异构体和氟比洛芬异构体的检测方法，其特征在于，色谱柱为chiralpak ad-h，优选的色谱柱的的长度为250mm，直径为4.6mm，填料粒径为5μm；优选的洗脱方式为等度洗脱。

5.根据权利要求1～3任一项所述的同时检测氟比洛芬酯异构体和氟比洛芬异构体的检测方法，其特征在于，所述色谱条件包括：柱温为20～40℃，优选为25-35℃，更优选为30℃。

6.根据权利要求1～3任一项所述的同时检测氟比洛芬酯异构体和氟比洛芬异构体的检测方法，其特征在于，所述色谱条件包括：检测波长为220-260nm，优选为254nm。

7.根据权利要求1～3任一项所述的同时检测氟比洛芬酯异构体和氟比洛芬异构体的检测方法，其特征在于，所述色谱条件包括：流速为0.5～1.5ml/min，优选为0.8～1.2ml/min，更优选为1.0ml/min。

8.根据权利要求1～3任一项所述的同时检测氟比洛芬酯异构体和氟比洛芬异构体的检测方法，其特征在于，进样量为1-20μl，优选为5μl-10μl，更优选为5μl。

9.根据权利要求1～3任一项所述的同时检测氟比洛芬酯异构体和氟比洛芬异构体的检测方法，其特征在于，对照品和供试品配制为0.1～1.0mg/ml的溶液。

10.权利要求9所述的同时检测氟比洛芬酯异构体和氟比洛芬异构体的检测方法，其特征在于，对照品和供试品配制所用的溶剂为流动相。

技术总结
本发明涉及一种氟比洛芬酯和氟比洛芬酯异构体的检测方法，选择包含正己烷、异丙醇、乙醇、甲醇中的3种或4种流动相混合作为流动相进行等度洗脱，检测方法的灵敏度高、专属性好，各峰之间的分离度好，对研究的各个氟比洛芬酯异构体峰均能有效分离，能满足任意构型氟比洛芬酯、氟比洛芬产品的异构体检测需求。

技术研发人员：张恒,刘晓,方文慧,辛妮
受保护的技术使用者：南京一诺医药科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/27