一种超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪同时检测白酒中6种甜味剂的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种白酒中甜味剂的检测方法，具体地说是一种超高效液相色谱-三 重四极杆串联质谱仪同时检测白酒中6种甜味剂的方法，属于酒类分析技术领域。
【背景技术】
[0002] 白酒是中国传统产品，有着上千年的历史，散发的醇甜感深受消费者的喜爱。但 是，不少酒类企业从自身利益出发，在酒中添加甜味剂以改善口感，也有部分企业因原材料 进货把关不严，使用含有甜味剂的酒用香精香料，造成白酒产品中甜味剂超标。媒体中关于 此现象的报道频出，引起市场上消费者的恐慌。研宄表明，摄入高剂量的甜味剂会对人体的 肝脏和神经系统造成伤害，甚至引发癌症，因此甜味剂的分析检测不仅关系到产品的质量， 更与广大消费者的健康、安全密不可分。
[0003] 在现代食品工业中广泛使用的人工合成甜味剂主要包括安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、 阿斯巴甜、三氯蔗糖、纽甜、阿力甜、苯甲酸、山梨酸等。其在日常食品中应用范围越来越广， 使用量越来越大，同时，人工合成甜味剂的安全性问题一直是各国争论和相关科研机构所 关注的热点。为保护我国传统产品，国家出台了食品添加剂使用标准（GB2760-2011)，明确 规定，酒类产品中除配制酒种可限量添加外，其他酒种不得使用甜味剂。然而由于适用于白 酒中甜味剂的检测方法较少，给相关检验部门造成检验困难。因此针对白酒中甜味剂建立 合理、有效的分析方法迫在眉睫。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪同时检测 白酒中6种甜味剂的方法。本发明不但可以同时定性、定量的检测安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、 阿斯巴甜、三氯蔗糖和纽甜6种甜味剂，而且快速、简便、灵敏度高。
[0005] 本发明解决技术问题，采用如下技术方案：
[0006] 本发明超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪同时检测白酒中6种甜味剂的方 法，其特点在于：
[0007] 所用仪器为超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪UPLC-MS/MS，包括超高效液 相色谱仪UPLC和三重四极杆串联质谱仪MS/MS ;
[0008] 所述方法是按如下步骤进行：
[0009] (1)待测白酒的前处理
[0010] 移取5mL待测白酒于比色管中，用氮吹仪进行处理，去除待测白酒中的醇类物质， 直至待测白酒剩余1~2mL，用超纯水定容至5mL，经0. 22 μ m水系滤膜过滤后获得待测样 品；
[0011] (2)所用仪器的条件设定
[0012] 设定所述超高效液相色谱仪UPLC的条件为：
[0013] 色谱柱为BEH C18色谱柱；
[0014] 色谱柱温为30~40 °C ;
[0015] 流动相：A相为甲醇；B相为0. 5~2mM乙酸铵水溶液，在所述乙酸铵水溶液中含体 积浓度为〇. 1 %~〇. 3 %的乙酸；
[0016] 流速为 0· 2 ~0· 3mL/min ；
[0017] 洗脱方式为梯度洗脱：初始至4min时流动相A体积占0~10 %，流动相B的体 积占90~100 % ;4min~6min时流动相A的体积为30~40 %，流动相B的体积为60~ 70% ;6min~8min时流动相A的体积为90~100%，流动相B的体积为0~10% ;8min~ 8. Imin时流动相A的体积为80~100%，流动相B的体积为0~20% ;8. Imin以后流动相 A的体积为0~10%，流动相B的体积为90~100%。
[0018] 进样量为2yL;
[0019] 检测所用时间为IOmin ;
[0020] 设定所述三重四极杆串联质谱仪MS/MS的条件为：
[0021] 离子化模式为电喷雾离子源；
[0022] 扫描方式为负离子模式；
[0023] 脱溶剂气温度为400~500 °C ;
[0024] 锥孔气流量为40~50L/H ;
[0025] 脱溶剂气流量为500~1000L/H ;
[0026] 毛细管电压为I. 0~3. OkV ;
[0027] 锥孔电压为3~5V;
[0028] (3)各甜味剂保留时间和监测离子的确定
[0029] 分别取安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、三氯鹿糖和纽甜配制浓度为300ng/mL 的单标工作溶液，将各单标工作溶液通过三重四极杆串联质谱仪进行母离子的扫描，确定 各甜味剂的监测离子和定量离子对，然后将各单标工作溶液进行UPLC-MS/MS检测，确定各 甜味剂的保留时间；
[0030] (4) 6种甜味剂标准曲线的绘制
[0031] 取安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、三氯蔗糖和纽甜配制质量浓度范围在50~ 1000ng/mL的混合系列标准工作溶液，然后按照（2)所设定的仪器的条件取混合系列标准 工作溶液进样，分别进样2 μ L，作UPLC-MS/MS检测，以各甜味剂的峰面积对其所相应的质 量浓度进行线性回归，获得6种甜味剂的线性回归方程，各线性回归方程所对应的曲线，即 为相应甜味剂的标准曲线；
[0032] 所述的6种甜味剂对应的线性回归方程及相关系数r2见表1，方程中Y即为相应 甜味剂所对应的峰面积，X即为甜味剂的质量浓度；
[0033] 表1 :6种甜味剂的线性回归方程、相关系数、检出限、定量限
[0034]
【主权项】
1. 一种超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪同时检测白酒中6种甜味剂的方法， 其特征在于： 所述6种甜味剂为安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、三氯蔗糖和纽甜； 所用仪器为超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪UPLC-MS/MS，包括超高效液相色 谱仪UPLC和三重四极杆串联质谱仪MS/MS ; 所述方法是按如下步骤进行： (1) 待测白酒的前处理 移取5mL待测白酒于比色管中，用氮吹仪进行处理，去除待测白酒中的醇类物质，直至 待测白酒剩余1~2mL，用超纯水定容至5mL，经0. 22 μ m水系滤膜过滤后获得待测样品； (2) 所用仪器的条件设定 设定所述超高效液相色谱仪UPLC的条件为： 色谱柱为BEH C18色谱柱； 色谱柱温为30~40 °C ; 流动相：A相为甲醇；B相为0. 5~2mM乙酸铵水溶液，在所述乙酸铵水溶液中含体积浓 度为0. 1 %~0.3%的乙酸； 流速为 〇· 2 ~0· 3mL/min ； 洗脱方式为梯度洗脱； 进样量为2μΜ 检测所用时间为IOmin ; 设定所述三重四极杆串联质谱仪MS/MS的条件为： 离子化模式为电喷雾离子源； 扫描方式为负尚子模式； 脱溶剂气温度为400~500 °C ; 锥孔气流量为40~50L/H ; 脱溶剂气流量为500~1000L/H ; 毛细管电压为I. 〇~3. OkV ; 锥孔电压为3~5V ; (3) 各甜味剂保留时间和监测离子的确定 分别取安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、三氯蔗糖和纽甜配制浓度为300ng/mL的单 标工作溶液，将各单标工作溶液通过三重四极杆串联质谱仪进行母离子的扫描，确定各甜 味剂的监测离子和定量离子对，然后将各单标工作溶液进行UPLC-MS/MS检测，确定各甜味 剂的保留时间； (4) 6种甜味剂标准曲线的绘制 取安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、三氯蔗糖和纽甜配制质量浓度范围在50~ 1000ng/mL的混合系列标准工作溶液，然后按照（2)所设定的仪器的条件取混合系列标准 工作溶液进样，分别进样2 μ L，作UPLC-MS/MS检测，以各甜味剂的峰面积对其所相应的质 量浓度进行线性回归，获得6种甜味剂的线性回归方程，各线性回归方程所对应的曲线，即 为相应甜味剂的标准曲线； (5) 待测样品的测试 取待测样品进样，进样体积为2 μ L，作UPLC-MS/MS检测，获得待测样品的质谱图和色 谱图，根据保留时间和6种甜味剂的监测离子对待测样品进行定性分析，根据6种甜味剂的 标准曲线对待测样品进行定量分析。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于： 梯度洗脱的方法为：初始至4min时流动相A体积为O~10%，流动相B的体积为90~ 100 % ;4min~6min时流动相A的体积为30~40 %，流动相B的体积为60~70 % ;6min~ 8min时流动相A的体积为90~100 %，流动相B的体积为0~10% ;8min~8. Imin时流 动相A的体积为80~100 %，流动相B的体积为0~20% ;8. Imin~IOmin流动相A的体 积为〇~10%，流动相B的体积为90~100%。
【专利摘要】本发明公开了一种超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪同时检测白酒中6种甜味剂(安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、三氯蔗糖、纽甜)的方法，是将酒样氮吹除醇，经超高效液相色谱仪分离后，采用三重四级杆串联质谱仪进行多反应离子监测模式检测。本发明6种甜味剂在50～1000ng/mL范围内线性关系好，相关系数r2均大于0.993，样品的平均回收率在90～120％，检出限在2.69～5.16ng/mL，本发明方法准确可靠、简单快捷，可用于同时检测白酒中6种甜味剂。
【IPC分类】G01N30-02
【公开号】CN104634895
【申请号】CN201510073792
【发明人】刘国英, 汤有宏, 王银辉, 李亭亭, 李安军, 马雷
【申请人】安徽古井贡酒股份有限公司, 安徽瑞思威尔科技有限公司
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年2月11日