液质联用法测定4种类苯胺类衍生物特定迁移量的方法
【专利摘要】本发明提供一种液质联用法测定4种苯胺类衍生物特定迁移量的方法，所述的4种类苯胺类衍生物特定来自于塑料类食品包装材料及容器中，分别为间苯二甲胺、N?(4?羟基苯基)乙酰胺、4,4?二氨基二苯砜和1,3?二苯基?2?硫脲。本发明通过高效液相色谱?串联质谱法，可以高效、简便、快速的同时测定间苯二甲胺、N?(4?羟基苯基)乙酰胺、4,4?二氨基二苯砜和1,3?二苯基?2?硫脲4种类苯胺类衍生物特定迁移量，色谱分离和线性关系好，回收率和准确度高，完全满足欧盟法规的限量要求。本发明方法涉及合理，具有灵敏、准确、快速、简便的特点，解决了塑料类食品包装材料及容器中有害的4种类苯胺类衍生物特定迁移量检测的难题。
【专利说明】
液质联用法测定4种类苯胺类衍生物特定迁移量的方法
技术领域
[0001] 本发明属于化学物检测领域，涉及食品接触材料中类苯胺类衍生物的测定，尤其 涉及一种液质联用法测定4种类苯胺类衍生物特定迀移量的方法，所述4种类苯胺类衍生物 为间苯二甲胺(cas: 1477-55-0)、N-(4-羟基苯基）乙酰胺(cas: 103-90-2)、4，4_二氨基二苯 砜(cas: 80-08-0)和1,3-二苯基-2-硫脲(cas: 102-08-9)。 技术背景
[0002] 间苯二甲胺(cas: 1477-55-0)、N-(4_羟基苯基）乙酰胺(cas: 103-90-2)、4,4_二氨 基二苯砜(cas: 80-08-0)和1，3-二苯基-2-硫脲(cas: 102-08-9)这4种类苯胺类衍生物常作 为树脂原料、热稳定剂、固化剂类功能助剂，广泛应用于聚胺酯、二甲苯尼龙树脂、环氧树 月旨、聚氯乙烯等塑料的生产。塑料类食品接触材料相关制品中残留或降解出来的苯胺类衍 生物，在使用的过程中也会迀移到食物中，直接危害人体健康。间苯二甲胺、N-(4-羟基苯 基）乙酰胺、4,4_二氨基二苯砜和1，3_二苯基-2-硫脲这四种苯胺类衍生物为低毒类化合 物，部分能强烈刺激皮肤和粘膜，能致敏。由于这4种苯胺类衍生物的毒副作用，欧盟在2011 年发布的（EU)N010/2011法规，将这4种苯胺类衍生物的特定迀移量限定在0.05、3或5mg/ kg〇
[0003] 目前，国内外有关间苯二甲胺、N-(4_羟基苯基）乙酰胺、4,4_二氨基二苯砜和1，3_ 二苯基-2-硫脲这4种苯胺类衍生物的研究主要集中在这4种化合物的合成、生产及应用领 域，而有关间苯二甲胺、N_(4_羟基苯基）乙酰胺、4，4_二氨基二苯讽和1，3-二苯基_2_硫脈 这4种苯胺类衍生物特定迀移量的检测，未见相关研究报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种液质(HPLC-MS/MS)联用法测定4种类苯胺类衍生物特定 迀移量的方法，该方法具有灵敏、准确、快速、简便的特点，解决了塑料类食品包装材料及容 器中有害间苯二甲胺、N-(4-羟基苯基）乙酰胺、4,4_二氨基二苯砜和1，3_二苯基-2-硫脲这 4种类苯胺类衍生物特定迀移量检测的难题。
[0005] 本发明的检测方法，通过以下步骤实现：
[0006] -、迀移试验
[0007] ①食品模拟物:根据(EU)NO 10/2011法规规定，食品模拟物A: 10%乙醇水溶液(v/ v)，用于模拟pH>4.5的水性食品；食品模拟物B: 3%乙酸水溶液(w/v)，用于模拟pH<4.5的 酸性食品；食品模拟物C:20%乙醇水溶液(v/v)，用于模拟含酒精且酒精含量不超过20%的 食品；食品模拟物D1: 50%乙醇水溶液(v/v)，用于模拟含酒精且酒精含量大于20 %的食品 以及油水乳化液;食品模拟物D2:植物油，用于模拟表面含有游离脂肪的食品。
[0008] ②迀移条件:按下表1所示根据产品实际用途选择合适的迀移试验条件。
[0009] 表 1
[0011] ③表面积体积比：对于<500mL，> 10L容器类塑料制品或不可盛装的扁平制品，
[0012] 将塑料制品剪切好放入干净的玻璃器皿中，以6dm2食品接触面的表面积对应1L食 品模拟物的比例;对于>500mL，<10L的容器类塑料制品，则将食品模拟物注入至距容器边 缘4/5处。
[0013] ④迀移:根据食品接触塑料制品的实际用途，按照"③表面积体积比"将选用的"① 食品模拟物"注入到塑料制品或玻璃器皿中，在器皿口或容器口以表面皿或铝箱纸进行密 封后，在烘箱或培养箱中按"②迀移条件"设定迀移温度和时间进行迀移试验。完毕后冷却 至室温，将其中的食品模拟物转移到干净玻璃器皿中待后续处理。
[0014] 二、食品模拟试液的处理
[0015] ①食品模拟物A、B、C、D1试液的处理:将各试液充分混匀后，用注射器取水基食品 模拟物1~2mL，经亲水性聚四氟乙烯针式过滤器过滤至进样瓶中，待测；
[0016]②食品模拟物D2试液的处理:称取橄榄油模拟物10g(精确至O.lg)于50mL具塞玻 璃离心管中，分别加入10.OmL正庚烧和4.OOmL含50%甲醇(v/v)的20mM磷酸二氢钾水溶液， 旋紧塞子，置于分液漏斗振荡器上300rpm震荡10min，再静置20min，用2mL注射器吸取下层 水溶液1~2mL，过0.45wii亲水性聚四氟乙烯针式过滤器至进样瓶中，盖紧盖子，混匀后，待 测 。
[0017] 三、空白试验
[0018]按照二中①、②方法处理没有与待测样品接触的食品模拟试液。
[0019]四、高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定
[0020]按确定的仪器条件以空白样品、校准曲线点、空白样品、待测样品的顺序分别依次 进样。校准曲线点的进样顺序为:4种化合物混标中的间苯二甲胺和N-(4-羟基苯基）乙酰胺 以 25 ? 0、50 ? 0、100 ? 0、200 ? 0、400 ? 0、600 ? Oyg/L 或 yg/kg 的浓度顺序依次进样，4，4-二氨基二 苯砜、1，3-二苯基-2-硫脲以250、500、1000、2000、4000、6000yg/L或yg/kg的浓度顺序依次 进样。以各种间苯二甲胺、N_(4_羟基苯基）乙酰胺、4，4-二氨基二苯讽和1，3-二苯基_2_硫 脲色谱峰面积对浓度作线性回归，校准曲线外标法定量；
[0021] 测定条件如下：
[0022] 色谱柱:Waters Xbridge Cis色谱柱（250X4.6mm，5iim)或相当者；
[0023] 流动相A: 50mM碳酸氢铵水溶液；
[0024] 流动相B:甲醇；
[0025]梯度洗脱程序：〇~5min，5~40%B;5~7min，40 ~62%B;7 ~8min，62~95%B;8~ llmin，95%B;ll~12min，95%~5%B;12~15min，5%B;
[0026]进样量：lyL;
[0027]流速：1 .OmL/min;
[0028]电喷雾离子源工作模式:正离子；
[0029] 数据采集模式:多反应监测(MRM);
[0030] 帘气：40.0yL/min;
[0031] 碰撞气：中等(Medium);
[0032] 电喷雾离子源电压：5500V;
[0033]温度（TEM):70(TC;
[0034] 离子源气体 l:70.0yL/min;
[0035] 离子源气体 2:70.0yL/min。
[0036]作为进一步的改进，上述的步骤二、①中用亲水性聚四氟乙烯针头过滤器过滤。 [0037]作为进一步的改进，上述的步骤二、②食品模拟物D2试液植物油称取的量为10g; 脱酯溶剂正庚烷、提取溶剂50%甲醇(v/v)的20mM磷酸二氢钾水溶液加入的量分别为10mL 和4mL;震荡提取的速度为300rpm;震荡提取时间为lOmin;静置分层时间为20min;下层水溶 液过针头过滤器的类型为聚四氟乙烯针头过滤器。
[0038]作为进一步的改进，上述步骤四中高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法的测定 条件见表2。
[0039]表 2
[0041 ]间苯二甲胺、N_(4_羟基苯基）乙酰胺、4,4-二氨基二苯讽和1，3-二苯基-2-硫脈的 保留时间及在多反应监测模式下的母离子、子离子、碰撞能和去簇电压参数见表3。
[0042]表 3
[0044]本发明由于采用了上述的技术方案，食品模拟物A、B、C、D1采用亲水性聚四氟乙烯 针头过滤器过滤，食品模拟物D2采用含50%甲醇(v/v)的20mM磷酸二氢钾和正庚烷液液分 配去除甘油酯，可以高效、简便、快速的测定塑料类食品包装材料及容器中间苯二甲胺、N-(4-羟基苯基）乙酰胺、4，4_二氨基二苯讽和1，3-二苯基_2_硫脈的特定迁移量。本发明对间 苯二甲胺、N_( 4-羟基苯基）乙酰胺、4，4-二氨基二苯讽和1，3-二苯基-2-硫脈的测定低限如 下表4所示。
[0045]表 4
[0047] 本发明提供的一种液质联用法测定4种苯胺类衍生物特定迀移量的方法，可以高 效、简便、快速的同时测定间苯二甲胺(cas: 1477-55-0)、N-(4-羟基苯基）乙酰胺(cas: 103-90-2)、4,4-二氨基二苯砜(cas:80-08-0)和1,3-二苯基-2-硫脲(cas: 102-08-9)4种类苯胺 类衍生物特定迀移量，色谱分离和线性关系好，回收率和准确度高，完全满足欧盟法规的限 量要求。本发明方法涉及合理，具有灵敏、准确、快速、简便的特点，解决了塑料类食品包装 材料及容器中有害的4种类苯胺类衍生物特定迀移量检测的难题。
【具体实施方式】
[0048] 下面通过具体实施例对本发明做进一步的说明。
[0049] 实施例1
[0050]本发明的高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定塑料类食品包装材料及容 器中间苯二甲胺、N-(4-羟基苯基）乙酰胺、4,4_二氨基二苯砜和1，3_二苯基-2-硫脲这4种 类苯胺类衍生物特定迀移量的检测方法，通过以下的步骤实现：
[00511 一、样品前处理方法 [0052] 1、迀移试验
[0053] 1.1食品模拟物：根据(EU)NO 10/2011法规规定，食品模拟物A: 10 %乙醇水溶液 (v/v)，用于模拟pH>4.5的水性食品；食品模拟物B: 3 %乙酸水溶液(w/v)，用于模拟pH< 4.5的酸性食品；食品模拟物C:20%乙醇水溶液(v/v)，用于模拟含酒精且酒精含量不超过 20%的食品；食品模拟物Dl:50%乙醇水溶液(v/v)，用于模拟含酒精且酒精含量大于20% 的食品以及油水乳化液;食品模拟物D2:植物油，用于模拟表面含有游离脂肪的食品。
[0054] 1.2迀移条件:按下表5所示根据产品实际用途选择合适的迀移试验条件。
[0055]表 5
[0057] 1.3表面积体积比：对于<500mL，>10L容器类塑料制品或不可盛装的扁平制品， 将塑料制品剪切好放入干净的玻璃器皿中，以6dm2食品接触面的表面积对应1L食品模拟物 的比例;对于>500mL，<10L的容器类塑料制品，则将食品模拟物注入至距容器边缘4/5处。
[0058] 1.4迀移:根据食品接触塑料制品的实际用途，按照"③表面积体积比"将选用的 "①食品模拟物"注入到塑料制品或玻璃器皿中，在器皿口或容器口以表面皿或铝箱纸进行 密封后，在烘箱或培养箱中按"②迀移条件"设定迀移温度和时间进行迀移试验。完毕后冷 却至室温，将其中的食品模拟物转移到干净玻璃器皿中待后续处理。
[0059] 2、食品模拟试液的处理
[0060] 2.1食品模拟物A、B、C、D1试液的处理:将各试液充分混匀后，用注射器取水基食品 模拟物1~2mL，经亲水性聚四氟乙烯针式过滤器过滤至进样瓶中，待测；
[00611 2.2食品模拟物D2食品模拟物试液的处理:称取模拟物试液(植物油:橄榄油）10g (精确至0. lg)于50mL具塞玻璃离心管中，分别加入10.0 mL正庚烷和4. OOmL含50 %甲醇(v/ v)的20mM磷酸二氢钾水溶液，旋紧塞子，置于分液漏斗振荡器上300rpm震荡lOmin，再静置 20min，用2mL注射器吸取下层水溶液1~2mL，过0.45M1聚四氟乙烯针式过滤器至进样瓶中， 盖紧盖子，混匀后，待测。
[0062] 3、空白试验
[0063]按照二中2.1、2.2方法处理没有与待测样品接触的食品模拟试液。
[0064]二、液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定条件：
[0065]高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法液相色谱条件和部分质谱条件参数见表 6〇
[0066]表6液相色谱条件和部分质谱条件
[0068] 间苯二甲胺、N_(4_羟基苯基）乙酰胺、4,4_二氨基二苯讽和1，3_二苯基_2_硫脈在 多反应监测模式下的母离子、子离子、碰撞能和去簇电压见表7。
[0069] 表7多反应监测模式下的母离子、子离子、碰撞能和去簇电压
[0072]三、线性关系和测定低限 [0073]本方法的测定低限见表8。
[0074]表8方法的测定低限
[0076] 取不同浓度的间苯二甲胺、N-(4_羟基苯基）乙酰胺、4,4_二氨基二苯砜和1，3_二 苯基-2-硫脲混合标准溶液(见表9)，按本方法所确定的仪器条件以及低浓度至高浓度的顺 序分别依次进样，以各种间苯二甲胺、N-(4-羟基苯基）乙酰胺、4,4_二氨基二苯砜和1，3_二 苯基-2-硫脲色谱峰面积对浓度作线性回归，其浓度与色谱峰面积线性关系良好，相关系数 r>0.99809,结果见表 10。
[0077]表9标准溶液系列浓度单位:yg/L或yg/kga
[0079] a橄榄油食品模拟物
[0080]表10线性范围、校准曲线、相关系数
[0081]
[0082]四、回收率和精密度试验
[0083]实际样品中分别添加三个不同浓度水平的间苯二甲胺、N-(4_羟基苯基）乙酰胺、 4,4_二氨基二苯砜和1，3_二苯基-2-硫脲混合标准溶液，六次重复试验的平均加标回收率 和精密度数据见表11。
[0084]表11五种食品模拟物中的平均加标回收率和精密度(n = 6)
【主权项】
1. 一种液质联用法测定4种类苯胺类衍生物特定迀移量的方法，所述的4种类苯胺类衍 生物特定来自于塑料类食品包装材料及容器中，分别为间苯二甲胺、N-(4-羟基苯基）乙酰 胺、4，4-二氨基二苯砜和1，3-二苯基-2-硫脲，其特征在于，通过以下步骤实现： 一、 迀移试验 根据食品接触塑料制品的实际用途，按照表面积体积比将选用的食品模拟物注入到塑 料制品或玻璃器皿中，在器皿口或容器口以表面皿或铝箱纸进行密封后，在烘箱或培养箱 中按迀移条件设定迀移温度和时间进行迀移试验，完毕后冷却至室温，将其中的食品模拟 物试液转移到干净玻璃器皿中待后续处理;其中食品模拟物分为食品模拟物A、B、C、D1、D2; 二、 食品模拟试液的处理 (1) 食品模拟物A、B、C、D1试液的处理:将各试液充分混匀后，用注射器取水基食品模拟 物1~2mL，经亲水性聚四氟乙烯针式过滤器过滤至进样瓶中，待测； (2) 食品模拟物D2试液的处理:称取模拟物试液I Og于50mL具塞玻璃离心管中，分别加 入10.0 mL正庚烷和4. OOmL含50%甲醇的20mM磷酸二氢钾水溶液，旋紧塞子，置于分液漏斗 振荡器上300rpm震荡lOmin，再静置20min，用2mL注射器吸取下层水溶液1~2mL，过0.45μπι 亲水性聚四氟乙烯针式过滤器至进样瓶中，盖紧盖子，混匀后，上样； 三、 空白试验 按照步骤二中（1 )、（2)的方法处理未与待测样品接触的食品模拟试液； 四、 液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定 按确定的仪器条件以空白样品、校准曲线点、空白样品、待测样品的顺序分别依次进 样，校准曲线点进样顺序为:4种化合物混标中的间苯二甲胺和Ν-(4-羟基苯基）乙酰胺以 25 · 0、50.0、100 · 0、200 · 0、400 · 0、600.0 yg/L 或 yg/kg 的浓度顺序依次进样，4，4-二氨基二苯 砜、1，3-二苯基-2-硫脲以250、500、1000、2000、4000、6000yg/L或yg/kg的浓度顺序依次进 样，以各种间苯二甲胺、N-(4_羟基苯基）乙酰胺、4，4_二氨基二苯讽和1，3-二苯基_2_硫脈 色谱峰面积对浓度作线性回归，校准曲线外标法定量； 测定条件如下： 色谱柱:Waters Xbridge Cis色谱柱(250X4.6mm，5ym)或相当者； 流动相A: 50mM碳酸氢铵水溶液； 流动相B:甲醇； 梯度洗脱程序：〇~5min，5~40%B;5~7min，40~62%B;7~8min，62~95%B;8~ llmin，95%B;ll~12min，95%~5%B;12~15min，5%B; 进样量：lyL; 流速：I .OmL/min; 电喷雾离子源工作模式:正离子； 数据采集模式:多反应监测(MRM); 帘气:40.0yL/min; 碰撞气：中等(Medium); 电喷雾离子源电压:5500V; 温度(TEM): 700 °C; 离子源气体1:70.0 yL/min; 离子源气体2:70.0yL/min。2. 根据权利要求1所述的一种液质联用法测定4种类苯胺类衍生物特定迀移量的方法， 其特征在于，食品模拟物A: 10%乙醇水溶液，食品模拟物B: 3%乙酸水溶液，食品模拟物C: 20 %乙醇水溶液，食品模拟物D1:50 %乙醇水溶液，食品模拟物D2:植物油。3. 根据权利要求1所述的一种液质联用法测定4种类苯胺类衍生物特定迀移量的方法， 其特征在于，步骤一所述的表面积体积比：对于<500mL，> IOL容器类塑料制品或不可盛装 的扁平制品，将塑料制品剪切好放入干净的玻璃器皿中，以6dm2食品接触面的表面积对应 IL食品模拟物的比例;对于>500mL，<10L的容器类塑料制品，则将食品模拟物注入至距容 器边缘4/5处。4. 根据权利要求1所述的一种液质联用法测定4种类苯胺类衍生物特定迀移量的方法， 其特征在于，步骤二(1)中使用的针头过滤器类型为亲水性聚四氟乙烯针头过滤器。5. 根据权利要求1所述的一种液质联用法测定4种类苯胺类衍生物特定迀移量的方法， 其特征在于，步骤二(2)中食品模拟物D2试液称取的量为10g，脱酯溶剂正庚烷、提取溶剂含 5 0 %甲醇的2 OmM磷酸二氢钾水溶液，加入的量分别为I OmL和4mL，震荡提取的速度为 300rpm，震荡提取时间为lOmin，静置分层时间为20min，下层水溶液过针头过滤器的类型为 聚四氟乙烯针头过滤器。
【文档编号】G01N30/06GK105911189SQ201610260981
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年4月25日
【发明人】肖晓峰, 王建玲, 刘艇飞, 陈彤, 杨娟娟, 王佳, 邓弘毅
【申请人】中华人民共和国台州出入境检验检疫局