专利名称：基于供体器官衍生的分析物测定或检测在异体移植后供体器官损坏的方法
技术领域：
本发明涉及测定或检测在异体移植后生物学液体中存在的指示供体器官损坏的供体器官衍生的分析物的方法。
背景技术：
目前在世界范围内存在用于同种异体移植的供体器官(例如肝脏，肾脏和心脏)的短缺并且已经有人建议和证明通过在常位的移植外科手术之前使用动物器官能够克服该问题，尽管是暂时的。Chari，R．S．，等人(“新英国医学杂志”(1994)；第33卷，第4期，第234-237页)用体外猪肝脏灌注液，随后用常位的肝脏移植治疗肝脏的衰退。将一个病人稳定10天，随后成功地进行了常位的肝脏移植。但是，以前的器官种间移植(异体移植)尝试还没有成功，因为在植入受体后几个小时内已知称为超急性排斥的现象使刚移植的器官被宿主的免疫系统制服并且被排斥。最近在分子遗传学领域内取得的进展已经能够研制转基因动物(主要是猪)，其器官进行了遗传工程操作，当转移到不同的种(即人／非人灵长类)时几乎没有免疫原性(“移植信息”(1995)；第5卷，第9期)。在该报告中，假定通过在转基因器官中表达人“衰退加速因子”基因获得了免疫忍受性，所述因子具有抑制宿主对补体成分(例如，Cb3复合物)的激活作用，并且因此使超急性排斥降低到最小。但是，正如种内器官移植(同种异体移植)的情况，异种移植排斥仍然是争论，移植医师必需与这种争论斗争和进一步被明显的事实困扰来自于不同种类的组织存在于移植受体。
常规的肝功能测试不能区分供体和受体(例如猪和人)器官衍生的分析物。例如，血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)／天冬氨酸氨基转移酶(AST)的测定没有辨认出人和猪酶，由此提供的识别移植后酶的来源的尝试是无效的。类似的情形存在于肾脏异体移植分析。事实上，目前没有通常被接受的肾脏完整性的蛋白质标记。
谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)包括主要由α(αGST)，μ(μGST)，π(πGST)和θ-类(θGST)同种型(由等电点定义的)组成的蛋白质的多个基因家族，并且主要借助于与谷胱甘肽的共轭，负责各种各样的生物异源物质的脱毒(Beckett，G．J．和Hayes，J．D．“临床化学进展”(1993)；第30期，281-380页)。在人中，αGST在肝脏的均一分布以及其相对高的肝脏水平和短的血浆半衰期(约1小时)是指作为移植后肝脏情形和药物诱导的肝脏损坏的指示剂该酶比氨基转移酶更灵敏。
EP-A 0640145公开了帮助在肝脏移植受体中早期诊断排斥的方法，该方法包括在血浆或血清转氨酶先前没有或有变化的情况下，测定受体的血浆或血清αGST的增加。
π谷胱甘肽S-转移酶定位于肝脏内的胆管上皮细胞的细胞质，并且被认为仅以同种二聚体形式存在。这种异种的肝脏内GST分布暗示不同的同工酶在不同的肝脏区域具有独特的体内功能，因此可以总结出血浆或胆的GST水平的测量有助于对于个体的肝脏情形的监控。在肾脏组织中也存在类似的独特分布，其中αGST定位于肾单位的近端的小管区域，πGST定位于远端小管区域(Campbell，J．A．H．等人，“癌症”(Philadelphia)(1991)；第67期，1608-1613页)。在最近的报告中，有人建议，由于各自的组织损害的位点特异性特性，同时检测人尿中α／πGST可用于分别区分环孢菌素A肾中毒性和移植排斥(Sundberg，A．G．M．等人，“肾单位”(1994)第67期，308-316页)。
因此，需要作为检测移植器官损坏的手段的区别宿主和移植物衍生的分析物的方法，或的确用于区分宿主和／或移植器官损坏的方法。发明内容本发明提供了测定或检测在异体移植后生物学液体中存在的指示供体器官损坏的供体器官衍生的分析物的方法，由此能够识别所述受体中异种移植器官的损坏，所述方法包括由抗体捕获所述分析物和直接或间接测定供体器官衍生的分析物，所述抗体是a)特异于供体器官衍生的分析物；或b)能够与所述供体器官衍生的分析物发生交叉反应。
因此，本发明的方法能够区分宿主衍生的和供体衍生的分析物，从而能够指示异种移植情形和可能的排斥，以致于尽可能快地可以进行正确的治疗，这样受体的生物学液体中供体器官衍生的分析物被识别，如在下文中更详细证明的情况。
本文中所述的生物学液体是指例如体液如胆汁，血浆，血清和尿以及组织支撑介质和灌注液。本文中所述的生物学液体通常也涉及基质。
本文中所述的供体器官衍生的是指器官本身和组织和细胞，所述组织和细胞是器官的组成部分和是由其衍生的。
同样本文中所述的供体材料是指器官本身和组织和细胞，所述组织和细胞是器官的组成部分和是由其衍生的。
因此，作为具体的例子，供体材料可以是肝脏，肝脏的一部分例如肝叶或肝细胞。通常，对于肝细胞的情况，使用肝细胞药筒。
通常，受体是人类或非人灵长类。
因此，优选的是供体材料是来自于非人灵长类或动物例如猪，所述动物具有与人类相似的生理学和生物化学特性。
供体动物可以是转基因动物。
异体移植可以是体内或体外。
被移植的器官合适的是心脏，肾脏或肝脏。
优选的是，供体器官衍生的分析物是蛋白质，更具体的是酶。
优选的是，供体器官衍生的分析物将是供体特异性的。在存在相应的受体分析物的情况下，优选的是受体分析物与所述的供体器官衍生的分析物具有低度的同源性。但是，供体器官衍生的分析物可以与相应的受体分析物具有高度的同源性(例如同源性大于80％)，并且根据下文描述的本发明，供体器官衍生的分析物也是可检测的。
优选的酶是谷胱甘肽S-转移酶，更具体地说αGST。
再者，优选的是，通过免疫测定方法对捕获的供体器官衍生的分析物进行测定。合适的免疫测定方法包括酶免疫测定。
因此，对于人生物学液体中的猪αGST，采用直接或间接结合到固相的IgG(抗-猪αGST)，或另一种可选的方法，采用显示交叉反应性的IgG(抗-人αGST)能够捕获猪αGST。
我们已经制备了兔多克隆IgG(抗-猪αGST)，它具有与猪αGST高度特异性。对于例如在高浓度的人αGST存在下，该抗体也显示与人αGST的小程度(约5-10％)的交叉反应性的情况下，那么可以单独地测定人αGST，并且按照下文描述，正确计算猪αGST的量。
我们已经识别了与猪αGST具有几乎100％交叉反应性的单克隆抗-人αGST，如下文实施例3描述的。
酶免疫测定可以是一种夹层方法或半竞争性酶免疫测定，如下文实施例1和2分别描述的。
在本发明的再一方面，在异体移植之前测试供体材料的存活力。
因此，本发明通过测定生物学液体中供体器官衍生的分析物也可以测试供体材料的存活力，通过应用上文定义的方法，所述生物学液体灌注该供体材料。
在本发明所述方面，根据除本发明以外的已知的方法能够检测分析物。例如，如果器官衍生的分析物是酶，那么可以利用基于酶底物的应用的酶测定检测所述的器官衍生的分析物。
本发明也提供了含有一个或多个成分的测试试剂盒或试剂包，用于实施上文描述的本发明的方法。附图简述在附图中
图1是实施例1的夹层酶免疫测定的示意图；图2是在450／630nm处的吸收值相对于在实施例1的猪αGST的夹层免疫测量的酶免疫测定中的αGST浓度(微克／升)的绘制图；图3是实施例2的半竞争性酶免疫测定的示意图；
图4是在450／630nm处的吸收值相对于在实施例1的猪αGST的竞争性免疫测量的酶免疫测定中的αGST浓度(微克／升)的绘制图；图5是人和猪αGST的SDS-PAGE分析图；图6是利用IgG(抗-人αGST)和山羊IgG(抗-兔αGST)-HRP共轭物进行的人和猪αGST的免疫印迹分析图；图7是利用IgG(抗-猪αGST)和山羊IgG(抗-兔αGST)-HRP共轭物进行的人和猪αGST的免疫印迹分析图；和图8是利用IgG(抗-人αGST)和山羊IgG(抗-鼠αGST)-HRP共轭物进行的人和猪αGST的免疫印迹分析图。
实施本发明的模式根据下面的实施例进一步描述本发明。
预备实施例A猪αGST的纯化通过亲和层析和层析聚焦(pH9．5-6．0)从猪肝脏纯化αGST。精确的详细的纯化方案如下a．利用Waring(Waring是商标名)捣碎机，以一份肝脏3份缓冲液的比例，将30克的猪肝脏在匀浆缓冲液中匀浆2分钟。匀浆缓冲液具有下面的组分10mM Tris-HCl250mM蔗糖5mM EDTA pH 7．82微克／毫升亮抑蛋白酶肽2微克／毫升胃酶抑制剂b．以10000g将肝脏匀浆液离心60分钟。
c．然后将上清液载样到先前于10mM Tris pH9．1中平衡的谷胱甘肽(GSH)-Sepharose亲和柱上。重新应用平衡缓冲液洗脱未结合的蛋白质。最后利用含有5mM的GST的50mM Tris pH9．1从亲和柱洗脱结合的GST。
d．然后将洗脱的物质在25mM乙醇胺pH9．5中透析，并且应用到层析聚焦柱(由Pharmacia供应的PBE94)。洗脱缓冲液是根据制造商的说明制备的Polybuffer 96(Polybuffer 96是商标名)。
预备实施例B抗体生产和纯化按照下文给定的时间表将纯化的猪αGST从皮下(s．c．)注射到新西兰白兔，并且评估血清的抗αGST反应性。一旦通过半定量点印迹分析测定IgG(抗-猪αGST)效价足够高时，给该动物放血，收集血清。通过蛋白质A亲和层析从兔血清纯化总IgG，用于包被微滴板(半竞争性EIA-实施例2)和生物素化(夹层EIA-实施例1)。从荷兰Nijmegen的医科大学获得单克隆IgG(抗-人αGST)，如腹水液并且在使用之前不进一步纯化。免疫接种时间表(常规)第1天从兔的耳朵放出5毫升的预血清的血样，然后将0．5毫升的猪αGST抗原(100微克)与等体积的弗氏完全佐剂混合。将抗原和佐剂匀浆化以确保获得良好的乳化液。然后将该混合液皮下注射到兔背的多个位点，所述兔子先前已经剃掉了毛。
第28天从兔的耳朵放出5毫升血清的血样，然后将0．5毫升的抗原(100微克)与等体积的弗氏完全佐剂混合。将抗原和佐剂匀浆化以确保获得良好的乳化液。然后将该混合液皮下注射到兔背的多个位点。
第42天从兔子的耳朵获取10毫升血液的测试血液。
第56天按照第28天时的描述，给兔子进行第二次加强。
第70天从兔子的耳朵获取10毫升血液的测试血样。当效价足够高时，杀死兔子，收集尽可能多的血液。
预备实施例C免疫印迹法借助于下面的免疫印迹组合分别检测用于下面实施例的所有多克隆和单克隆IgGs与人和猪αGST的反应性和交叉反应性(a)将兔子IgG(抗-人αGST)用于探测含有免疫固定化的人和猪αGST的硝酸纤维素膜。
(b)将兔子IgG(抗-猪αGST)用于探测含有免疫固定化的人和猪αGST的硝酸纤维素膜。
(c)将鼠IgG(抗-人αGST)用于探测含有免疫固定化的人和猪αGST的硝酸纤维素膜。
用于免疫印迹检测的方法如下1．将人和猪αGST(0．5微克／泳道)在15％SDS-PAGE上电泳，并且包括分子量标记物。
2．在电泳之后，切下聚丙烯酰胺凝胶，将一半凝胶进行蛋白质染色，而其余的用于电泳转移到硝酸纤维素膜。
3．在电泳转移之后，在含有0．05％(w／v)吐温-20(PBST)封闭缓冲液的磷酸缓冲的盐水中用5％(w／v)Marvel(Marvel是商标名)封闭硝酸纤维素膜1小时。
4．然后制备下面的溶液(i)溶于PBST的1％(w／v)Marvel中的兔子IgG(抗-人αGST)。
(ii)溶于PBST的1％(w／v)Marvel中的兔子IgG(抗-猪αGST)。
(iii)溶于PBST的1％(w／v)Marvel中的鼠IgG(抗-人αGST)。并且一旦滗去封闭缓冲液，将该溶液加入到所述膜。
5．然后在PBST中清洗硝酸纤维素膜(2次，每次5分钟)。
6．然后在溶于PBST的1％(w／v)Marvel中制备抗兔子IgG-HRP共轭物(1／1000)并且加入到上述4(i)和(ii)。还制备抗鼠IgG-HRP共轭物(1／1000)并且加入到上述4(iii)。从Bio-Rad实验室有限公司获得用于免疫检测的抗-种类(兔子／鼠)共轭物。
7．在用抗-种类共轭物保温1小时之后，滗去反应剂并且如上述5所述清洗膜。
8．然后制备二氨基联苯胺底物并且加入到所述膜。在硝酸纤维素膜上的棕色沉淀指示阳性反应。
预备实施例D猪αGST-辣根过氧化物酶(HRP)共轭物的合成利用硫醚共轭方法合成αGST-HRP共轭物。利用SMCC(琥珀酰亚胺4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸盐)将反应性马来酰亚胺基团导入到αGST分子并且将掩饰的巯基基团连接到HRP(Duncan，R．J．S．，等人(1983)；“生物化学分析”132期，68-73页)。在脱掩饰步骤以产生反应性巯基基团之后，将马来酰亚胺激活的αGST和HRP-SH-起混合并且允许反应4．5小时。将由硫醚共价键形成的最后的αGST-HRP共轭物置于50％(v／v)甘油并且储存于-20℃，以用于实施例2的半竞争性EIA。
预备实施例EIgG(抗-猪αGST)的生物素化通过在碱性条件下，将纯化的多克隆IgG(抗-猪αGST)偶合到N-羟基琥珀酰亚胺-生物素(NHS-生物素)制备生物素化的IgG(抗-猪αGST)，其中多克隆IgG(抗-猪αGST)是先前通过用纯化的αGST免疫接种兔子产生的(如在预备实施例B中描述的)。然后通过广泛的透析去除未反应的NHS-生物素并且将生物素化的IgG等份并且冷冻储存于-20℃，直到需要使用时。
实施例1夹层酶免疫测定所使用的程序图解描述于附图1。
a．用鼠单克隆IgG(抗-人αGST)(参照预备实施例B)包被NuncMaxisorp(Nunc Maxisorp是商品名称)微滴板，所述单克隆抗体借助于山羊F(ab)2片段(抗-鼠IgG)固定。所述抗体包被方法具有确定Mab结合位点的位置的作用并且也通过将吸附降低到最小-诱导捕获抗体的变性而改善了测定的灵敏性。用蛋白质／蔗糖溶液封闭微滴板。
b．从如预备实施例A中描述的，在死亡后立即获得的并且储存于2-8℃或-20℃的肝脏纯化的猪αGST用作为测定试验的校正器。
c．将生物素化的IgG(抗-猪αGST)共轭物用于辅助捕获的／固定化的αGST的检测。
d．然后结合使用四甲基联苯胺底物(TMB)，将抗生蛋白链菌素-辣根过氧化物酶(HRP)共轭物用于检测完整的抗原夹层复合物。
e．通过加入1N硫酸终止酶反应，利用630nn作为参照波长在450nm处测定吸收值。颜色强度与αGST浓度成正比例，在绘制A450／630nm相对于浓度(微克／升)图之后，测定未知样品的浓度(参见附图2)。总测试时间低于3．5小时。
实施例2半竞争性酶免疫测定所使用的程序图解描述于附图3。
a．在本例子中，用借助于蛋白质A固定的多克隆IgG(抗-猪αGST)包被Nunc Maxisorp微滴板，因为发现多克隆IgG的直接包被不能促进αGST的捕获，可能是由于结合到微滴板上的IgG的变性。
b．将用HRP标记的αGST用作为本例子的共轭物，并且随后加入到微孔中的未标记的校正器／样品。以这种方式，在HRP-标记的和未标记的αGST之间设置竞争型反应。
c．在合适的保温期间通常60分钟之后，清洗微滴板并且加入TMB底物。
d．通过加入1N硫酸终止酶反应，利用630nm作为参照波长在450nm处测定吸收值。颜色强度与猪αGST浓度成反比，在绘制A450／630nm相对于浓度(微克／升)图之后，获得了对未知样品的定量测定(参见附图4)。
实施例3免疫测定反应剂的纯度的评估根据在预备实施例C中描述的程序进行免疫印迹法。结果描述于附图5-8。
附图5-8泳道的要点泳道1分子量标记物。
泳道2人αGST(0．5微克)泳道3猪αGST(0．5微克)附图5描述了在免疫接种兔子之前的人和猪αGST的纯度(由各种情况下的单个谱带指示的)并且证实了没有任何其它的人或猪衍生的蛋白质存在，所述蛋白质可能引起降低的测定特异性。抗体反应性的免疫印迹分析显示IgG(抗-人αGST)与人αGST具有高度特异性，并且没有显示与猪αGST具有显著的交叉反应性(附图6)，正如相对于猪αGST的弱信号强度，人αGST具有强信号强度指示的。根据猪αGST(αGST)p在人αGST(αGST)h-特异性酶免疫测定中没有显示反应性支持了该结论，所述人αGST(αGST)h-特异性酶免疫测定是由Biotrin InternationalLimited-Mount Merrion，County Dublin，Ireland出售的名称为HEPKIT。结果显示于表1，它代表了在Biotrin HEPKIT中αGSTp的反应性的评估。显然当在HEPKIT中分析αGSTp时没有出现交叉反应性。
表1(αGST)h(微克／升)A450／630nm0．00 0．0691．25 0．1562．50 0．3325．00 0．62710．0 1．08820．0 1．49540．0 1．762PC 0．839(6．9微克／升)(αGST)p(微克／升) A450／630nm8 0．012400．010200 0．0121000 0．014PC=阳性对照。
该事实的意义是极重要的，因为意味着人αGST定量的酶免疫测定与人αGST检测具有特异性。因此，可以特异性地检测存在于样品中的任何人αGST，没有来自猪抗原的交叉污染，所述样品中的猪αGST也可以被测定。在人αGST酶免疫测定中没有交叉反应性以及在IgG(抗-猪αGST)和人αGST之间显示有约5-10％的交叉反应性(附图7)的结果，如由相对于猪αGST的强信号强度，人αGST具有弱信号强度指示的，意味着可以使用在HEPKIT酶免疫测定中人αGST和在猪(αGST酶免疫测定中猪αGST的同时定量测定以校正猪αGST免疫测定中人αGST的分配。
例如，如果样品给出下列读数测定αGST(微克／升)猪EIA(猪αGST)10000Hepkit EIA(人αGST)1000那么在猪EIA中确保人αGST的约7％的交叉反应性意味着人αGST给猪αGST的读数提供了10010×7=70]]>微克／升。
因此，存在10000-70=9930微克／升的猪αGST。
此外，如上文提到的，在附图8中明显地显示鼠IgG(抗-人αGST)和猪αGST之间的广泛的交叉反应性，如由相应的谱带／信号的相当的强度指示的。这种现象的优点是将实施例1的用于猪αGST的夹层免疫测定的该抗体用作为“捕获”或包被平板的抗体。
实施例4测定特异性由于实施例1和2的测定的主要用于检测非猪生物学液体中猪αGST，因此利用存在于下列基质中的猪αGST评估测定的灵敏性和特异性是必要的-人尿-人血清-人血浆-人胆汁-组织支撑介质为了完成所述分析，将猪αGST固定到所有上述基质并且随后在实施例1和2的免疫测定中进行测试。除了定量的αGST检测，还评估测试的线性度(平行论)作为测试灵敏度。再者，测试特异性有助于仅检测猪αGST和任何人αGST在免疫测定中不引起显著的干扰也是必要的。为了到达该目的，通过用不同量的人αGST掺入含有猪αGST的样品以评估潜在的交叉反应性，调查人αGST的检测反应性。假定两个同工酶之间存在这样的显著的序列同源性(这不是一个经常出现的问题)，仅可以通过广泛地分析与人αGST具有潜在的交叉反应性的抗血清(抗-猪αGST)来克服。
正如通过夹层和半竞争性酶免疫测定确定的，在各种样品的基质中猪αGST定量测定的结果显示于表2。
表2在夹层和半竞争性猪αGST测定中固定的样品的回收
要点1．Sand夹层酶免疫测定。
2．Comp半竞争性酶免疫测定。
3．用于竞争性测定的稀释1／5的样品范围(0-1000微克／升)，然后进一步稀释到1／100，用于夹层测试(范围0-40微克／升)。
4．MEM和TC-100组织支撑介质。
从表2可以清楚地看到，在所有测试的基质中可以定量回收猪αGST。显然，分别在人血浆和尿中可检测到αGST是必要的，以便有助于异种移植的肝脏和肾脏的情形，的确就是这种情况。但是，可以注意到血浆基质似乎与半竞争性免疫测定方式不相容，可能是由于IgG与固定化的蛋白质A相互作用，导致异常的读数。除此以外，所有的其它液体显示与两种测定方式具有相容性。特别有趣的是能够在组织支撑介质中检测到猪αGST，这应该有助于对移植前异种移植进行评估或分离的猪肝细胞的存活力的分析(存在于药筒)，因为这些系统通常保持于常规的支撑介质中。另外，所述基质／样品的相容性应该大大地有助于检测在用于维持体外供体器官的培养基中的αGST，从而将供体器官(例如肝脏)在肉体外保持与培养基接触。
实施例5在猪αGST夹层酶免疫测定中人αGST干扰的评估对实施例1的猪αGST夹层酶免疫测定中人αGST的干扰进行评估。如由增加的吸收值测定的，在微滴板孔的浓度低于25微克／升时没有证明干扰(以1／5稀释的样品稀释液中相等于125微克／升的样品浓度)。结果显示于表3。表3
要点αGSTp -猪αGSTαGSTh -人αGST显示于表3的结果证明用于检测猪αGST的免疫测定的特异性。从这些数据可以证明，甚至在样品浓度高达125微克／升(25微克／升×5)时人αGST没有干扰所述的酶免疫测定，这分别代表15和6倍的人血清和尿的αGST的正常的上限值。在人αGST的更高水平时(＞250微克／升；50微克／升×5)，显然出现了某些干扰，已经计算出在人αGST和IgG(抗-猪αGST)之间约5-10％的交叉反应性。但是，在定量免疫测定中共测定人和猪αGST的水平时应该计算出所存在的人αGST的精确的量，因此在对人生物学液体中定量测定猪αGST期间应该考虑。
进一步应该注意到，本发明的免疫测定也可用于检测猪衍生的生物学液体中猪αGST，如涉及猪或猪器官的体外或体内毒理研究的情况。该结果是有重要意义的，因为已知猪和人生理学／生物化学是非常类似的，因此猪经常用作为预测对人的药物毒性的动物模型。
权利要求
1．测定或检测在异体移植后生物学液体中存在的指示供体器官损坏的供体器官衍生的分析物的方法，由此能够识别受体中异种移植器官的损坏，所述方法包括由抗体捕获所述分析物和直接或间接测定供体器官衍生的分析物，所述抗体是a)特异于供体器官衍生的分析物；或b)能够与所述供体器官衍生的分析物发生交叉反应。
2．根据权利要求1所述的方法，其中受体是人。
3．根据权利要求1所述的方法，其中受体是非人灵长类。
4．根据权利要求1-3任一项所述的方法，其中供体器官来源于猪。
5．根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中供体器官是肾脏。
6．根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中供体器官是肝脏。
7．根据前面任一项权利要求所述的方法，其中供体器官衍生的分析物是蛋白质。
8．根据权利要求7所述的方法，其中供体器官衍生的分析物是酶。
9．根据权利要求8所述的方法，其中酶是谷胱甘肽S-转移酶(GST)。
10．根据权利要求9所述的方法，其中酶是αGST。
11．根据前面任一项权利要求所述的方法，当从属于权利要求4时，其中抗体是抗-猪αGST。
12．根据权利要求1-10任一项所述的方法，当从属于权利要求2时，其中抗体是抗-人αGST，它基本上显示与猪αGST具有100％的交叉反应性。
13．根据前面任一项权利要求所述的方法，其中在异体移植之前测试供体材料的存活力。
14．含有一个或多个成份的测试试剂盒或试剂包，用于实施权利要求1-13任一项所述的方法。
全文摘要
本发明提供了测定或检测在异体移植后生物学液体中存在的指示供体器官损坏的供体器官衍生的分析物的方法,由此能够识别所述受体中异种移植器官的损坏,所述方法包括由抗体捕获所述分析物和直接或间接测定供体器官衍生的分析物,所述抗体是:a)特异于供体器官衍生的分析物;或b)能够与所述供体器官衍生的分析物发生交叉反应。因此,本发明的方法能够区分宿主衍生的和供体衍生的分析物,从而能够指示异种移植情形和可能的排斥,以致于当供体器官衍生的分析物被识别时便尽可能快地进行正确的治疗,该方法适用于体内和体外异体移植。
文档编号G01N33/53GK1205081SQ95197996
公开日1999年1月13日 申请日期1995年12月8日 优先权日1995年12月8日
发明者约翰·马丁·多伊尔, 科马克·杰勒德·基尔蒂 申请人:拜奥特恩知识产权有限公司