胞也可以用于嗜碱性粒细胞活化检测。使用本发明的试剂盒时，向流式管中加入全血标 本过程中，应确保流式管的侧壁以及顶部不残留全血标本；裂解红细胞过程中，得到的细胞 悬液如不能及时检测，需于2~8°C避光保存，24小时内检测。
[0019] 采用流式细胞仪检测与数据分析过程中，按流式常规检测方法，在流式细胞仪上 进行多参数识别嗜碱性粒细胞，并用流式分析软件如Flowjo、FloMax和CellQuest等进行 数据分析。优选地，上述步骤（4)按下述两种方法计算嗜碱性粒细胞活化百分比与活化程 度：①以高表达⑶203c为活化标记：活化百分比=(高表达⑶203c的嗜碱性粒细胞/表达 ⑶203c的嗜碱性粒细胞）X 100%，活化程度=高表达⑶203c的嗜碱性粒细胞表达⑶203c 的平均荧光信号强度；②以表达CD63为活化标记：活化百分比=(表达CD63的嗜碱性粒 细胞/表达⑶203c的嗜碱性粒细胞）X 100%，活化程度=表达⑶63的嗜碱性粒细胞表达 ⑶63的平均荧光信号强度。其中，表达⑶203c包括高表达⑶203c和低表达⑶203c，高表 达CD203c表示为CD203c +high，低表达CD203c表示为CD203c+，表达CD63表示为CD63+。 [0020] 作为本发明所述嗜碱性粒细胞活化的检测试剂盒的使用方法的优选实施方式，所 述步骤（2)中，每支流式管中所加入的洗涤液、刺激物对照品、全血标本、带有荧光标记的 嗜碱性粒细胞识别抗体、抗体染色液的体积比为：50:25:25:1:9。
[0021] 作为本发明所述嗜碱性粒细胞活化的检测试剂盒的使用方法的优选实施方式， 所述步骤（2)中，带有焚光标记的嗜碱性粒细胞识别抗体为FITC-anti human⑶lib、 PerCP-anti human CD123、PE-anti human CD203c 和 APC-anti human CD63〇
[0022] 作为本发明所述嗜碱性粒细胞活化的检测试剂盒的使用方法的优选实施方式，所 述步骤（3)中，裂解红细胞时，向步骤（2)孵育后的各流式管中加入红细胞裂解液，混匀，室 温避光孵育5~20分钟；孵育完后，以300~500Xg的离心力离心5~20分钟，倒出上清 液，用洗涤液重悬细胞并进行轻微涡旋，得到细胞悬液。
[0023] 本发明的有益效果为：本发明建立了嗜碱性粒细胞活化检测的标准化试剂，开发 了检测活化嗜碱性粒细胞的新试剂盒。本发明嗜碱性粒细胞活化检测的方法采用多参数 (anti human CDllb、anti human CD123、anti human CD63 和 anti human CD203c)联合识 别嗜碱性粒细胞，可准确、全面的识别嗜碱性粒细胞，避免漏检和多检；该检测方法通过双 指标（CD63和CD203C)联合检测嗜碱性粒细胞活化情况，可准确、全面的检测嗜碱性粒细胞 的活化情况，避免漏检不同的活化途径；并且，本发明所用的试剂和操作过程（所用的试剂 盒操作过程基于我们的大量前期研宄工作和文献报道）可规避目前已知的影响嗜碱性粒 细胞活化检测的因素，能更好地服务于临床或科研上活化嗜碱性粒细胞的检测。此外，本发 明还提出检测相关的注意事项，以期改进嗜碱性粒细胞活化检测试验的不足之处。
【附图说明】
[0024] 图1为本发明采用流式细胞术检测嗜碱性粒细胞活化的过程图。
【具体实施方式】
[0025] 为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面结合具体实施例对本发明作 进一步说明。
[0026] 在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术 人员所通常理解的含义。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的解释。
[0027] PBS :phosphate buffer saline，磷酸盐缓冲液；
[0028] FITC :Fluorescein isothiocyanate，异硫氛酸焚光素；
[0029] PerCP :Peridinin-Chlorophyll-P;rotein，多甲藻叶绿素蛋白
[0030] PE :P_phycoerythrin，藻红蛋白；
[0031] fMLP :N-formylmethionyl-leucyl-phenyl-alanine，N-甲酰-L-甲硫氨酰-L-亮 氨酰-L-苯丙氨酸三肽，fMLP是一种趋化性肽；
[0032] ProClin300 :ProClin300 是一种防腐剂；
[0033] BSA :牛血清白蛋白；
[0034] SLE :Systemic Lupus Erythematosus，系统性红斑狼疮；
[0035] RA :Rheumatoid Arthritis，类风湿关节炎。
[0036] 实施例中，洗涤液为IX PBS，且下述IX PBS均按以下方法配制，即每IL PBS种含 8. 5 ~42. 5g NaCl、0. 2 ~1.0 g KC1、0. 1 ~0· 5g CaCl2、0. 1 ~0· 5g MgCl2. 6Η20、1· 42 ~ 7· Ig Na2HPO4. 2Η20、0· 2 ~1.0 g ΚΗ2Ρ04。
[0037] 实施例中，采用流式细胞术检测嗜碱性粒细胞活化的过程如图1所示，具体方法 为：在流式细胞仪上检测，根据散点图（图1①），首先进行圈出Anti human CDllb+/Anti human CD123+双阳性的细胞（图1②），再圈出的细胞即为嗜碱性粒细胞（图1③），根据表 达⑶203c强度不同分为低表达⑶203c (即⑶203c+)的嗜碱性粒细胞和高表达⑶203c (即 CD203c+high)的嗜碱性粒细胞（图1③），分析高表达CD203c (即CD203c+high)的嗜碱性粒细 胞表达 CD203c 的平均焚光强度（Median Fluorescence Intensity，MFI)(图 1④）；同时， 将嗜碱性粒细胞（图1③）根据是否表达CD63,分为不表达CD63的嗜碱性粒细胞和表达 ⑶63的嗜碱性粒细胞（图1⑤），最后分析表达⑶63的嗜碱性粒细胞表达⑶63的平均荧 光强度（Median Fluorescence Intensity, MFI)(图 1 ⑥）〇
[0038] 实施例中，CD203c+high表示高表达CD203c，CD203c +表示低表达CD203c，CD63 +表示 表达CD63。
[0039] 实施例1 :检测花粉过敏患者嗜碱性粒细胞活化情况
[0040] 本发明嗜碱性粒细胞活化的检测试剂盒的一种实施例，本实施例所述嗜碱性粒细 胞活化的检测试剂盒包括洗涤液、刺激物对照品、带有荧光标记的嗜碱性粒细胞识别抗体、 红细胞裂解液、抗体染色液。其中，洗涤液为1XPBS，每IL洗涤液中含：42. 5g NaCl、l. Og KCl、0· 3g CaCl2、0. 3g MgCl2. 6H20、I. 42gNa2HP04. 2Η20、0· 2g KH2PO4;
[0041] 刺激物对照品包括阳性对照品I、阳性对照品II、过敏原和阴性对照品；阳性对照 品I为0· 05ng/mL的anti-human Fc ε R I α抗体，阳性对照品II为lnmol/L的fMLP，过敏 原为花粉过敏原原提取液（由华南地区常见的重阳木、椰子、刺苋、木麻黄、红花羊蹄甲和 苦楝的花粉浸提物组成），阴性对照品为IXPBS ;
[0042] 带有焚光标记的嗜碱性粒细胞识别抗体为FITC-anti human 0)1 lb、PerCP-anti human CD123、PE-anti human CD203c 和 APC-anti human CD63;
[0043] 红细胞裂解液含有以下浓度的组分：50mmol/L NH4Cl、5mmol/L NaHCOjP IOmmol/ L EDTA ；
[0044] 抗体染色液为含有质量百分比浓度为0.1 %的牛血清白蛋白（BSA)、并含有 0.02% (w/v)NaN3的 1XPBS。
[0045] 本实施例的红细胞裂解液中还可含5% (v/v)的甲醛和50% (v/v)的二甘醇。
[0046] 本实施例所述嗜碱性粒细胞活化的检测试剂盒的使用方法包括以