一种同时测定液体保健食品中非法添加的多种化学药物的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种医药非法添加品的测定，具体地说，是涉及一种同时测定液体保 健食品中非法添加的多种化学药物的方法，属于医药检测技术领域。
【背景技术】
[0002] 目前我国已批准的保健食品的保健功能有减肥、缓解体力疲劳、辅助降血脂、辅助 降血压、辅助降血糖、辅助改善记忆力等27种，近年来，随着社会竞争压力的不断增大和老 年化社会的扩大，辅助改善记忆力类保健品正步入人们的学习、工作和生活中，常见功能有 改善记忆力、补充大脑营养等。"辅助改善记忆"的保健功能主要通过补充大脑正常运行所 必须的物质、增加大脑细胞对氧气的利用、提供能够促进脑部新陈代谢排出的物质等功效。 然而不法商家为了使保健品起效快，以达到增加销售量目的，会在保健品中非法添加化学 药物，但化学药物的副作用往往会严重影响人们的身体健康。
[0003] 目前用于辅助改善记忆力类保健食品非法添加的筛查方法较少，同时检测多种非 法添加药物的方法更是少之又少。因此，针对此类保健食品中潜在的、可能添加化学药物建 立一种有效的、准确的检测方法，预防辅助改善记忆类保健食品进入市场后导致的不良事 件发生，确保其安全性。本研宄依据相关发明通过对17种促智类化学药品（多奈哌齐、石杉 碱甲、依达拉奉、倍他司汀、烟酸占替诺、吡拉西坦、加兰他敏、咖啡因、茴拉西坦、氟马西尼、 雌三醇、氟桂利嗪、萘普生、己烯雌酚、尼莫地平、阿米三嗪、双氯芬酸钠）建立高效液相色 谱分析方法，应用于改善记忆力类保健食品中非法添加化学药物的筛查。
【发明内容】
[0004] 针对上述问题，本发明的目的是提供一种同时测定液体保健食品中非法添加的多 种化学药物的方法，该方法操作简便、准确、快速检测液体保健食品中17种非法添加化学 物，可用于辅助改善记忆类保健食品中非法添加化学药品的定性筛查和定量检测。
[0005] 本发明提供的技术方案是这样的：
[0006] 一种同时测定液体保健食品中非法添加的多种化学药物的方法，依次包括下述步 骤：
[0007] 1)标准溶液的制备
[0008] 分别精密称取17种标准物质适量，加80%乙醇水溶液使成浓度为0.lmg/mL，检测 17种化学药物单标色谱和混标色谱图；
[0009] 2)标准工作曲线
[0010] 取标准溶液适量加80%乙醇水溶液，分别配制成100yg/mL、200yg/mL、300yg/mL、400yg/mL、500yg/mL，作为标准工作曲线溶；
[0011] 3)样品前处理
[0012] 取相当于一次口服剂量，置于50mL容量瓶中，加10mL80%乙醇水溶液，超声处理 20分钟，用乙醇-水溶液定容至刻度，摇匀，过滤，滤液待用；
[0013] 称取相当于一次口服剂量，置于100mL锥形瓶中，精密加入50mL80%乙醇水溶 液，称其重量，超声提取20分钟，冷却，用乙醇-水溶液补足重量，过滤，滤液待用；
[0014] 4)净化
[0015] 精密量取上述滤液lmL以约lmL/min流速通过C18-SPE柱，用3mL乙醇-水洗脱， 合并流出液与洗脱液，用0. 22ym有机滤膜过滤即得待测样品。
[0016] 与现有技术相比，本发明提供的技术方案建立了使用同一种色谱条件同时测定辅 助改善记忆类保健食品中可能添加的17种化学药物含量的高效液相方法，在20min内完成 了对各化合物的分析测定，在保证分离度的情况下，实现了快速有效的高通量分析，可为监 测辅助改善记忆类保健食品非法添加药物提供强有力的技术支持。
【具体实施方式】
[0017] 下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不构成对本发明的任何限制，任 何人在本发明的权利要求范围内所做的有限次的修改仍在本发明的权利要求范围内。
[0018] 实施例1
[0019] 1材料与方法
[0020] 1. 1 材料
[0021] LL1样品来源
[0022] 辅助改善记忆力类保健食品来源于市场销售样品。
[0023] 1. 1. 2主要仪器与试剂
[0024] Agilent1260高效液相色谱仪（二极管阵列检测器，美国Agilent)，XA20OTU电 子分析天平（瑞士梅特勒公司），ClassicUVF超纯水器（英国ELGA公司），P300H超声 波清洗器（德国Elma公司），Sigma3K15高速离心机（德国赛多利斯公司），C18-SPE柱 (60mg/3mL,天津博纳艾杰尔科技有限公司）。
[0025] 多奈哌齐、石杉碱甲、依达拉奉、倍他司汀、烟酸占替诺、吡拉西坦、加兰他敏、咖啡 因、茴拉西坦、氟马西尼、雌三醇、氟桂利嗪、萘普生、己烯雌酚、尼莫地平、阿米三嗪、双氯 芬酸钠对照品均购于中国食品药品检定研宄院，纯度均多98. 5% ;甲醇和乙腈（液质级， B&J)，其它试剂均为分析纯。实验用水为经ELGAPURELABClassicUVF净化系过滤的去离 子水。
[0026] 1. 2 方法
[0027] 1. 2. 1标准溶液的制备
[0028] 1. 2. 1. 1标准溶液：分别精密称取17种标准物质适量，加80%乙醇水溶液使成浓 度为 0?lmg/mL。
[0029] 1. 2. 1. 2标准工作曲线：取标准溶液适量加80%乙醇水溶液，分别配制成100yg/ mL、200yg/mL、300yg/mL、400yg/mL、500yg/mL，作为标准工作曲线溶液。
[0030] 1.2. 2样品前处理
[0031] 称取相当于一次口服剂量，置于100mL锥形瓶中，精密加入50mL80%乙醇水溶 液，称其重量，超声提取20分钟，冷却，用乙醇-水溶液补足重量，过滤，滤液待用。
[0032] 1. 2. 2. 4净化：精密量取上述滤液lmL以约lmL/min流速通过C18-SPE柱（使用 前分别以3mL甲醇，水活化），用3mL乙醇-水洗脱，合并流出液与洗脱液，用0. 22ym有机 滤膜过滤即得待测样品。
[0033] 1. 2. 3色谱条件
[0034] 色谱柱：ThermoAccliaimTMMixed-ModeWCX-1 柱（150mm2. 1mm，3ym);流动 相：A:水；B:800mmol/L醋酸一醋酸钠缓冲液，pH6. 0 ;C:乙腈；梯度洗脱程序：0~lOmin， 15%~45%A、10%B、5%~45%C;10~12min，45%A、10%B、45%C;12~15min， 45%~31%A、10%~14%B、45%C;15 ~15.lmin，31%~0%A、14%~50%B、50%C; 15.1~17min，0%A、50%B、50%C;17~17.1min，0%~85%A、50%~10%B、50%~5% C;17. 1 ~20min，85%A、10%B、5%C;在 85%A、10%B、5%C下平衡 3min。流速：0? 8mL/ min;柱温：45°C;进样量：2y1 ;检测波长：220nm为主要检测波长；254nm、280nm辅助定性； 各化合物的最大吸收波长（见表1)。
[0035] 2.结果与讨论
[0036] 2. 1色谱条件的选择
[0037] 2. 1. 1色谱柱的选择
[0038] 选用美国Thermo公司的三种液相色谱柱进行比较，分别为syncronis C18-AQ4.6X250mm，5ym)、Hilic-10(2.1X150mm，3ym)以及AcclaimTMMixed-Mode WCX-1 (2. 1X150mm，3um)，由于17种待测物，大多为碱性物质，也有少部分酸性物质，C18色 谱柱与Hilic柱未能实现17种化合物一次性分离，而离子混合型WCX色谱柱作分离，则能 实现一次进样对所有物质进行分离。
[0039] 2. 1. 2流动相的选择
[0040] 由于待分析的化合物种类较多，极性差别较大，选用离子混合型WCX色谱柱的同 时，流动相pH的变化会直接影响各物质的出峰时间，本发明提供的技术方案正是通过三种 溶剂的梯度变化洗脱，从而改变分析时的pH变化，达到17种物质能在WCX色谱柱上分离， 但缓冲盐的pH应为6. 3~6. 5,否则吡拉西坦、萘普生和咖啡因难以分离。
[0041] 2. 1. 3检测波长的选择
[0042] 因17种化学药物最大吸收波长在210~280nm不等，吡拉西坦在此范围更无最 大吸收波长，故本发明采用二极管阵列检测器，选用220nm为主要检测波长，254nm、280nm 辅助定性；可同时检测到17种化学药物，结果只需将254nm、280nm波长响应值与220nm响 应值做比值对比，可实现辅助定性。
[0043] 2. 2标准储备溶液的稳定性
[0044] 对标准储备溶液分别在0小时、1小时、8小时、12小时与24小时进针，考察溶液的 稳定性。研宄表明，对照溶液有效使用在8小时内的有吡拉西坦，12小时内的有加兰他敏、 倍他司汀、己烯雌酚、阿米三嗪、多奈哌齐、氟桂利嗪，24小时以内的有萘普生、咖啡因、依达 拉奉、双氯芬酸钠、茴拉西坦、氟马西尼、烟酸占替诺、雌三醇、石杉碱甲、尼莫地平。
[0045] 2. 3线性关系、检出限、回收率试验
[0046] 2. 3. 1线性关系、检出限
[0047] 取标准工作曲线按1. 2的色谱条件进样分析，以峰面积Y对标准品的浓度X(mg/L) 进行回归分析，按照S/N:3计算检出限（LOD)、S/N:10计算检出限（L0Q)、17种化学药物的 回归方程、线性范围、相关系数、检出限及定量限。（见表1)
[0048] 表1 17种化学药物检测数据
[0049]
【主权项】
1. 一种同时测定液体保健食品中非法添加的多种化学药物的方法，其特征在于，依次 包括下述步骤： 1) 标准溶液的制备 分别精密称取17种标准物质适量，加80 %乙醇水溶液使成浓度为0.lmg/mL，检测17 种化学药物单标色谱和混标色谱图； 2) 标准工作曲线 取标准溶液适量加80 %乙醇水溶液，分别配制成100yg/mL、200yg/mL、300yg/mL、 400yg/mL、500yg/mL，作为标准工作曲线溶； 3) 样品前处理 取相当于一次口服剂量，置于50mL容量瓶中，加IOmL80%乙醇水溶液，超声处理20分 钟，用乙醇-水溶液定容至刻度，摇匀，过滤，滤液待用； 4) 净化 精密量取上述滤液ImL以约lmL/min流速通过C18-SPE柱，用3mL乙醇-水洗脱，合并 流出液与洗脱液，用0. 22ym有机滤膜过滤即得待测样品。
【专利摘要】本发明公开了一种同时测定液体保健食品中非法添加的多种化学药物的方法旨在提供一种操作简便、准确、快速，能实现液体保健食品中17种非法添加化学物的同时分析，可用于辅助改善记忆类保健食品中非法添加化学药品的定性筛查和定量检测；其技术方案是这样的：该方法依次包括下述步骤：1)标准溶液的制备；2)标准工作曲线；3)样品前处理；4)净化；属于医药检测技术领域。
【IPC分类】G01N30-88
【公开号】CN104820058
【申请号】CN201510242808
【发明人】陈学松, 罗达龙, 刘慧妍
【申请人】广西壮族自治区梧州食品药品检验所
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年5月12日