专利名称：药品、保健食品中掺杂吡唑酮类物质的快速测定方法
技术领域：
本发明涉及一种吡唑酮类化学成分氨基比林及其类似物的检测方法，具体是检 测药品和保健食品中，尤其是用于检测抗风湿类中药制剂和保健食品中是否添加氨基比 林、安替比林及安乃近成分的方法。
背景技术：
吡唑酮类化学成分氨基比林及其结构类似物解热镇痛作用较强，缓慢而持久， 消炎抗风湿作用与阿司匹林相似。通过抑制下视丘前列腺素的合成和释放，恢复体温调 节中枢感受神经元的反应性而起退热作用；通过抑制环氧化酶，选择性抑制下丘脑体温 调节中枢前列腺素的合成，导致外周血管扩张、出汗而达到解热的作用；通过抑制前列 腺素等的合成和释放，提高痛阈而起到镇痛作用，属于外周性镇痛药。氨基比林因能 引起骨髓抑制以及能形成亚硝胺致癌物质，故单用制剂已淘汰，临床常用的是其复方制 剂。
目前临床常用的含氨基比林及其结构类似物的复方制剂多为处方药，患者需要 在医生的指导下方能服用，国家相关部门对此类药品的生产、经营及使用进行了严格的 规定，对于氨基比林引起的药物不良反应如恶心、呕吐、过敏性皮炎等也曾有过报道。 但近年来，一些抗风湿类中成药和保健食品中非法添加氨基比林的情况却日趋严重，各 相关机构也为此加大了监察力度，打击非法添加氨基比林的样品。但非法添加氨基比林 的中药制剂和保健食品主要在广大的农村和经济欠发达的中小城市销售，由于这些地区 技术监管能力薄弱，缺少必要的检验仪器和技术，导致非法添加药品的滥用，给人民群 众的用药安全带来隐患。
检验药品和保健食品中非法添加氨基比林及其结构类似物的方法主要有如下三 种
1、薄层色谱法
样品中的待测成分用三氯甲烷提取，所得的供试品溶液和对照品溶液点在同一 块薄层板上(薄层板通常由硅胶制成)，用展开剂展开，晾干后，薄层板在紫外灯下检 示。不同物质在薄层色谱板不同的位置上以斑点的形式出现(原因是不同的物质有不同 的迁移速度，常以色谱迁移值表示展开后斑点到原点之间的距离)，根据待测样品是否在 与对照品相应位置上出现斑点这一实验所得现象来判断待测样品中是否含有目标成分。 氨基比林对照品溶液和样品提取所得的供试品溶液在同一块薄层色谱板上点样，展开剂 展开，晾干后，薄层色谱板在紫外灯下检示，如果供试品溶液薄层色谱图在与氨基比林 对照品相应的位置上出现斑点，则提示样品中可能含有氨基比林。
方法取氨基比林及其结构类似物适量，以三氯甲烷溶解配制成lOmg/ml 的溶液，吸取ΙΟμΙ，点于硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-乙醚-丙酮-氨水 (9:6:1: 0.01)为展开剂，展距为15.5cm。展开后，晾干，置紫外灯下Q54nm)检 视，Rf= 0.57。
薄层色谱法的优点是不需要使用昂贵的分析仪器。该方法缺点是(1)色谱分 辨率较低，中药制剂成分复杂，干扰因素较多，易将某些成分误判为氨基比林，某些共 存成分如果量较大且色谱迁移值与氨基比林接近则会干扰目标成分的检出。( 色谱展开 和晾干的时间长，不能满足快速测定的要求。( 薄层色谱板需要干燥存放，环境的温 度和湿度对分离效果的影响大。(4)要求实验人员有较好的经验。(5)需要有固定的场 所，不适合做流动性大的现场检测。
2、高效液相色谱法
高效液相色谱是现代常用的分析方法。在相同的色谱条件下，不同的物质有不 同的色谱保留时间。在相同的色谱条件下氨基比林对照品溶液和样品提取所得的供试品 溶液分别进样，根据色谱保留时间可判断待测样品中是否含有氨基比林。
色谱条件色谱柱C18O50mmX4.6mm，5μ m)
流动相甲醇-1%醋酸溶液(以二乙胺调节pH至3.7) 66
流速l.Oml/min
检测波长260nm
柱温30°C
进样体积20 μ 1
理论塔板数11458
保留时间13.35min
高效液相色谱法的优点是色谱分离效率高，灵敏度高。缺点是(1)仪器价格 昂贵，样品前处理时间长，色谱柱易受污染，分析成本高。( 当共存成分的色谱保留时 间与氨基比林的色谱保留时间接近时容易作出错误的判断。(3)仪器对使用环境要求高， 需要固定摆放，不适合做流动性大的现场检测。
3、高效液相色谱-质谱联用法
高效液相色谱-质谱联用法是一种分析成本比高效液相色谱法更高，操作比高 效液相色谱法更复杂的分析方法。以高效液相色谱仪作为分离器，质谱仪作为分析器的 高效液相色谱-质谱联用法适用于分析成分复杂、背景干扰严重的样品，可提高检测结 果的可靠性。
液质联用条件使用十八烷基键合硅胶为填充剂的液相色谱柱(柱头加装相同 规格填料的预色谱柱)，以含有0.02mol/L乙酸铵-0.1%乙酸水溶液/乙腈(30 70)为 流动相，检测波长为280nm，进样量ΙΟμΙ，理论塔板数不小于1000，柱温25°C，质谱 装配电喷雾电离源(E^D，源电压5kV，毛细管温度275°C，毛细管电压15V，鞘气流速 40arb,正离子检测，扫描方式采用全扫描一级质谱、全扫描二级质谱(MS/MS)，质量 采集范围100 1000。
高效液相色谱-质谱联用法的缺点是仪器对使用环境的要求更高，需要固定摆 放，不适合做流动性大的现场检测。
目前在实际检测中采用的主要方法是高效液相色谱法和高效液相色谱-质谱联 用法。这两种方法的分辨率和灵敏度均较高，但由于所需仪器价格昂贵，实验操作复 杂，且仪器对使用环境的要求高等原因并不适合于快速筛查及流动性大的现场检测。发明内容
本发明的目的在于提供一种克服现有检测技术的缺陷，分析成本低、不需要使 用贵重分析仪器、专属性强、灵敏度高、适用于现场检验药品和保健食品中是否添加氨 基比林及其类似物的快速检验方法。
本发明的另一目的在于提供上述方法在制备氨基比林及其类似物快速试验试剂 盒的应用。
本发明的另一目的在于提供上述方法在检验药品、保健食品中是否添加氨基比 林及其类似物的筛查检验中的应用。
本发明药品、保健食品中掺杂氨基比林及其类似物的快速测定方法，依次由以 下步骤组成
(1)提取药品和保健食品中的氨基比林及其类似物成分，得到提取液；
(2)进一步用溶剂萃取所述提取液，分别收集萃取液及萃取后的溶液，作为供试 品溶液；
(3)分别向所述供试品溶液中加入显色剂。
其中，步骤(1)中用水提取药品和保健食品中的氨基比林及其类似物成分；步 骤(2)中用乙酸乙酯萃取提取液；步骤( 中收集的萃取液经浓缩后进一步用水溶解，作 为供试品溶液；步骤(3)中的显色剂为硫酸高铁铵。
氨基比林及其类似物安替比林、安乃近在常温下即能被硫酸高铁铵氧化进而生 成有色产物。
针对目前市场上的大多数药品或保健食品，推荐取样量如下
权利要求
1.一种药品、保健食品中掺杂氨基比林及其类似物的快速测定方法，依次由以下步 骤组成(1)提取药品和保健食品中的氨基比林及其类似物成分，得到提取液；(2)进一步用溶剂萃取所述提取液，分别收集萃取液及萃取后的溶液，作为供试品溶液；(3)分别向所述供试品溶液中加入显色剂。
2.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(1)中用水提取药品和保健 食品中的氨基比林及其类似物成分。
3.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(2)中的萃取溶剂为乙酸乙
4.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(2)中收集的萃取液经浓缩 后进一步用水溶解，作为供试品溶液。
5.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(3)中的显色剂为硫酸高铁铵。
6.如权利要求5所述的测定方法，其特征在于，所述硫酸高铁铵溶液的浓度为 3 % 。
7.如权利要求1所述的测定方法，依次由以下步骤组成(1)取药品或保健食品，加水溶解，振摇使分散，静置片刻，过滤除去不溶物，收集 滤液；(2)用乙酸乙酯萃取所述滤液，振摇后静置片刻，分别收集乙酸乙酯萃取液及萃取后 的水层溶液；将乙酸乙酯萃取液浓缩得残渣后进一步用水溶解，与所述萃取后的水层溶 液分别作为供试品溶液；(3)分别向所述供试品溶液中滴入硫酸高铁铵溶液。
8.如权利要求7所述的测定方法，其特征在于，所述硫酸高铁铵溶液的浓度为 3 % 。
9.权利要求1所述的测定方法在制备氨基比林及其类似物快速检验试剂盒中的应用。
10.权利要求1所述的测定方法在药品和保健食品是否掺入氨基比林及其类似物的筛 查检验中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种药品、保健食品中掺杂氨基比林及其类似物的快速测定方法。该方法由以下步骤组成(1)提取药品和保健食品中的氨基比林及其类似物成分，得到提取液；(2)进一步用溶剂萃取所述提取液，分别收集萃取液及萃取后的溶液，作为供试品溶液；(3)分别向所述供试品溶液中加入显色剂。本发明检验方法快速、简便，专属性强、准确率高，反应灵敏，适用范围广，适用于现场检验药品、保健食品是否掺入了氨基比林及其类似物。根据本发明制成氨基比林及其类似物的快速检验试剂盒，将能满足广大农村地区和检验技术条件落后的中小城市开展药品、保健食品监督检验的需要。
文档编号G01N1/28GK102023157SQ20101022647
公开日2011年4月20日 申请日期2010年7月13日 优先权日2010年7月13日
发明者宋曼铜, 王珏, 王铁杰, 肖丽和, 赵承兵, 钟敏, 鲁艺 申请人:深圳市药品检验所