天山雪莲破壁饮片的指纹图谱共有模式构建及其质量检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药饮片的质量检测方法，尤其是天山雪莲破壁饮片的指纹图谱共有 模式构建及其质量检测方法。
【背景技术】
[0002] 天山雪莲又名新疆雪莲花、大苞雪莲花，是菊科凤毛菊属植物天山雪莲 Saussureainvolucratea (Kar. etKir. ·) Sch. Bip.的干燥地上部分。主要含有黄酮类、生 物碱类、苯丙素类、倍半萜类、挥发油类和多糖类成分。其中，黄酮类主要包括芦丁、槲皮 素-3-0-a -L鼠李糖苷、金合欢素、高车前素、槲皮素和芹菜素等；苯丙素类主要包括紫丁 香苷、绿原酸及一些香豆素成分；生物碱类主要包括大苞雪莲碱；倍半萜类成分主要为大 苞雪莲内酯类成分。
[0003] 李燕等采用HPLC-DAD法测定天山雪莲中紫丁香苷的含量。色谱条件为：Agilent Zorbax SB-C18 柱（250_Χ4· 6mm，5 μ m)，柱温为 25°C，流动相为乙腈-水（10:90)，流速 lml/min，检测波长为220nm。黄毅等采用HPLC法测定天山雪莲中不同部位芦丁的含量。色 谱条件为：CLC-ODS 柱（250mmX 4. 6mm，5 μ m)，柱温为 35°C，流速 lml/min，流动相为 0· 5 % 甲酸-乙腈梯度洗脱。吕瑞凰等以芦丁、紫丁香苷、绿原酸为对照，采用HPLC法测定10批 不同产地天山雪莲色谱图。色谱条件为：YMC-Pack ODS-A色谱柱（250mmX4. 6mm，5 μπι)，乙 腈-1%醋酸梯度洗脱（0~30~60min，乙腈为10%~20%~20% )，流速0· 8ml/min，柱 温30°C，检测波长270nm，结果标示出12个特征指纹峰，样品相似度均在0. 9以上。但采用 上述方法分析天山雪莲破壁饮片时，发现上述方法均不完全适合天山雪莲破壁饮片的指纹 图谱分析，无法将天山雪莲破壁饮片中的特征峰分离开。
[0004] 中药破壁饮片是利用现代超微粉碎技术将传统饮片进行破细胞壁粉碎成粒度分 布D90小于45 μ m的微细颗粒，再制成30~100目的颗粒。相对于传统饮片具有色泽一致， 质量均一，稳定性好的特点，为创新型中药饮片。由于中药破壁饮片不具传统中药饮片的形 态特征，破壁后会带来有效成分或指标成分等化学成分的溶出度变化，使传统饮片的鉴别、 质量检测方法不能完全适用。因此，必须针对中药破壁饮片建立专属性强，全面反映中药破 壁饮片质量状况的检测方法。而建立一项新的质量检测方法并非易事，例如检测条件、对照 品的选择和供试品的制备方法等均需要研宄考量并进行验证。虽然现有技术中有涉及中药 指纹图谱的检测方法，但并无针对形态特殊的中药破壁饮片的方法，且存在专属性、稳定 性、重现性和精密度差缺陷，不能完全反应饮片的质量情况的缺陷。
【发明内容】
[0005] 为解决以上问题本发明提供了一种天山雪莲破壁饮片的指纹图谱共有模式构建 方法，在此基础上，进一步公开其质量检测方法。
[0006] 本发明的指纹图谱共有模式构建方法包括以下步骤：
[0007] (1)供试品溶液的制备：取天山雪莲破壁饮片约I. 000g，加入70%甲醇50ml，水 浴加热回流提取45分钟，用70%甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；
[0008] (2)对照品配制：取芦丁对照品，加70 %甲醇溶解配制成浓度为0· 0555mg/ml的 对照品溶液；
[0009] (3)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱， 以甲醇为流动相4，以0.5%冰醋酸溶液为流动相匕梯度洗脱 ：〇1^11-6〇1^11，流动相4变化 20% -65% ;柱温为40°C ;检测波长为285nm ;流速：1. OmL/min ;进样量：10ul ;
[0010] (4)按上述供试品溶液及对照品的制备方法及和色谱条件对10批以上的天山雪 莲破壁饮片样品进行HPLC分析，得到相应指纹图谱；以芦丁峰为参照峰，计算各指纹图谱 中主要色谱峰的相对保留时间及相对峰面积；输入指纹图谱分析软件，对各批次样品指纹 图谱进行相似度比较，以平均谱图为共有模式，计算相似度，建立天山雪莲破壁饮片指纹图 谱共有模式标准图谱，包括12个特征峰。
[0011] 质量检测方法包括以下步骤：
[0012] (1)按上述指纹图谱共有模式构建方法中步骤（1)和步骤（2)分别制备待测样 品供试品溶液和对照品溶液，按步骤（3)的色谱条件，精密吸取待测样品溶液、对照品溶液 IOul，注入HPLC色谱仪，测定，记录色谱。
[0013] (2)合格指标的建立及指定图谱、判断方法：
[0014] 供试品色谱中，应呈现12个与天山雪莲破壁饮片HPLC指纹图谱共有模式标准图 谱相对应的特征峰；按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，供试品指纹图谱与对照指 纹图谱的相似度不得低于0. 9 ;以芦丁峰为对照峰，其余11个共有特征峰相对保留时间分 别为：0· 248、0· 313、0· 426、0· 884、0· 908、0· 933、0· 974、1· 111、1· 841、1· 901、2· 054,各峰相 对保留时间RSD < ±5%，为合格。
[0015] 本发明是首次针对天山雪莲破壁饮片质量控制所构建的HPLC指纹图谱共有模式 标准图谱及质量检测方法。该方法克服了现有技术不能完全适用天山雪莲破壁饮片质量控 制的缺陷。该图谱较全面涵盖了天山雪莲破壁饮片主要活性成分的图谱信息，专属性明显 优于现有的同类指纹图谱方法。经试验验证该方法的稳定性、重现性和精密度均达到法定 要求，且操作简单，检测快速准确；并能有效控制天山雪莲药材、破壁粉体、破壁饮片整体质 量及鉴别伪品。
【附图说明】
[0016] 图1是不同的提取溶剂的比较图谱。
[0017] 图2是不同浓度甲醇提取效果比较图谱。
[0018] 图3是主成分色谱峰的指认中绿原酸对照品与天山雪莲破壁饮片色谱图。
[0019] 图4是主成分色谱峰的指认中天山雪莲破壁饮片与紫丁香苷对照品色谱图。
[0020] 图5是主成分色谱峰的指认中天山雪莲破壁饮片与芦丁对照品色谱图。
[0021] 图6是天山雪莲破壁饮片指纹图谱专属性考察图谱。
[0022] 图7是天山雪莲破壁饮片共有指纹图谱（8号峰为芦丁峰）。
[0023] 图8是天山雪莲原药材-破壁粉体-破壁饮片成品相关性分析谱图。
【具体实施方式】
[0024] 1仪器与试样
[0025] I. 1仪器：安捷伦1200RRLC快速液相色谱仪（配有G1315C型号DAD检测器、 G4218A的ELSD蒸发光检测器、G1312B二元泵、G1329B自动进样器、G1322A脱气机、G1316B 柱温箱，Agilent Chemstation色谱工作站；
[0026] 1. 2 试药：
[0027] 试剂：甲醇（瑞典进口 Oceanpak色谱溶剂），乙腈，色谱纯（安徽时联特种溶剂有 限公司），双蒸水、磷酸、甲醇（分析纯）。芦丁、紫丁香苷，绿原酸对照品购于中国药品生物 制品检定所。
[0028] 供试品：天山雪莲破壁饮片、天山雪莲破壁粉体、天山雪莲原药材（均由中山中智 药业集团提供）
[0029] 2实验方法
[0030] 2. 1预试验
[0031] 初步设置天山雪莲破壁