一种检测血样离子钙含量的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及钙离子检测领域，具体是一种检测血样离子钙含量的方法。
【背景技术】
[0002]血钙几乎全部存在于血浆中，可分为扩散钙和非扩散钙两大类。非扩散钙是指与蛋白质(主要是白蛋白)结合的钙，约占血浆总钙的40%。60%为可扩散钙。这两类钙以三种形式存在:①扩散性离子钙，为具有生理活性的部分。②扩散性非离子钙(约占血清总钙量的15% )为与枸橼酸、重碳酸根结合而成复合钙。③非扩散钙为与血浆白蛋白结合的钙，其含量和血浆白蛋白浓度有关，这部分钙不易透过血管壁，亦无生理活性，如血浆白蛋白明显下降，非扩散性钙也减少，以致血清总钙量下降，但因游离钙不减少，所以临床上不出现缺钙症状。非扩散性钙和扩散性非离子钙为结合性钙，非扩散性钙和离子钙之间可以互相转变，呈动态平衡，当游离钙浓度降低时，非扩散性钙可以逐渐释放成游离钙。血钙的测定方法很多，一般可分为总钙测定和离子钙测定法。前者包括同位素稀释质谱法(isotopediluting mass spectrometry)、原子吸收光谱法(atomic absorpt1n spectroscopy,AAS)、分光光度法(spectrophotography)和络合滴定法(chelating titrat1n)等。AAS是最常用的准确测定血浆总钙含量的参考方法，但费用昂贵，不适于常规工作；分光光度法中以甲基百里香酸蓝比色法(methyl thymol blue colorimetry)和偶氮胂III比色法(Arsenazo III colorimetry)最常用。络合滴定法简便易行，但判断终点受主观因素影响，有被淘汰趋势，但不少基层实验室仍延用。国际临床化学联合会(IFCC)推荐同位素稀释质谱法(IDMS)为决定性方法，原子吸收分光光度法为参考方法。世界卫生组织(WHO)推荐的一般实验室常规测定方法为邻甲酚酞络合铜法(OCPC)。离子选择电极法测定离子钙已在临床应用，虽然电极法测定过程无化学污染、快速方便，但相对其他方法来说稳定性和特异性较差。CN102735736B公开一种用于钙离子选择电极的感应膜，该膜的选择性有待提高，其离子选择性载体为月桂酸酯。发明专利CN102507696B公开了一种基于石墨烯电极的离子选择性电极，包括电极基体和涂敷在电极基体表面的离子选择性聚合物膜，所述的电极基体为电极中掺杂有石墨稀或通过电沉积在电极表面修饰有石墨稀膜的电极。
【发明内容】
[0003]本发明针对现有技术存在的不足，提供一种检测血样离子钙含量的方法，该方法快速方便、稳定性和特异性好。
[0004]为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现:
[0005]一种检测血样离子钙含量的方法，具体步骤包括:
[0006]⑴自制钙离子选择电极:将按质量百分比计的聚四氟乙烯33-35%、合成植物酯62-65%、四苯硼钠0.5-1.0 %、月桂酸酯1-1.5 %、N- 丁基吡啶六氟磷酸钙1-1.5 %、N，N，N'，N'-四环己基-3-氧杂戊二酰胺0-0.5%作为溶质，与溶剂四氢呋喃混合搅拌均匀，其中溶剂质量是溶质的4-8倍，在常温下混合搅拌16h，然后挥发60h后制得膜厚为0.4-0.6mm感应膜，将感应膜装入玻碳电极基体上，得到1?离子选择电极；
[0007]⑵配制钙离子标准系列溶液，在室温下，通过钙离子选择性电极及参比电极建立两电极体系，具体包括指示电极和饱和甘汞电极，钙离子选择性电极连接到指示电极上，饱和甘汞电极做参比电极，测量不同浓度的钙离子在含有氯化钠和Tris-NaAc缓冲溶液的测量液中的电位响应值，绘制浓度_电位响应值工作曲线，在测量液中，氯化钠的摩尔浓度为
0.10mol/L，Tris-NaAc 缓冲溶液的 pH = 7.4 ；
[0008]⑶测量待测血样钙离子的电位响应值，将电位响应值代入浓度_电位响应值工作曲线，得到待测血样钙离子浓度。
[0009]与现有技术相比，本发明的有益效果:能快速测出血样中的钙离子含量，测量精度高，稳定性好，特异性高，测量步骤简单，测试成本低。
【具体实施方式】
[0010]下面实施例用于进一步说明本发明，但并不以任何形式限制本发明涉及的内容。
[0011]实施例
[0012]一种检测血样离子钙含量的方法，具体步骤包括:
[0013]⑴自制钙离子选择电极:将按质量百分比计的聚四氟乙烯33.5%、合成植物酯63%、四苯硼钠0.8%、月桂酸酯1.2%、N-丁基吡啶六氟磷酸钙1.2%、N，N，f , Nr -四环己基-3-氧杂戊二酰胺0.3%作为溶质，与溶剂四氢呋喃混合搅拌均匀，其中溶剂质量是溶质的6倍，在常温下混合搅拌16h，然后挥发60h后制得膜厚为0.5_感应膜，将感应膜装入玻碳电极基体上，得到钙离子选择电极；
[0014]⑵配制钙离子标准系列溶液，在室温下，通过钙离子选择性电极及参比电极建立两电极体系，具体包括指示电极和饱和甘汞电极，钙离子选择性电极连接到指示电极上，饱和甘汞电极做参比电极，测量不同浓度的钙离子在含有氯化钠和Tris-NaAc缓冲溶液的测量液中的电位响应值，绘制浓度_电位响应值工作曲线，在测量液中，氯化钠的摩尔浓度为
0.10mol/L，Tris-NaAc 缓冲溶液的 pH = 7.4 ；
[0015]⑶测量待测血样钙离子的电位响应值，将电位响应值代入浓度-电位响应值工作曲线，得到待测血样钙离子浓度。
[0016]经测定，本实施例的钙离子选择性电极的电极电位达到平衡稳定的响应时间不超过25s，其中钙离子在摩尔浓度为1.00X10_5-1.00X10_2mol/L的范围内呈现能斯特响应。
[0017]按实施例的方法对无任何急慢性疾病的正常人血浆进行20次重复性检测，结果显示，血样离子钙平均为1.18mmol/Lo
[0018]进行加标回收实验，测得平均回收率为99.6%。
[0019]以上所述的实施例为本发明的较佳实施例，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
【主权项】
1.一种检测血样离子钙含量的方法，其特征在于:具体步骤包括: ⑴自制钙离子选择电极:将按质量百分比计的聚四氟乙烯33-35 %、合成植物酯。62-65%、四苯硼钠0.5-1.0 %、月桂酸酯1-1.5 %、N- 丁基吡啶六氟磷酸钙1-1.5 %、N，N，N'，N'-四环己基-3-氧杂戊二酰胺0-0.5%作为溶质，与溶剂四氢呋喃混合搅拌均匀，其中溶剂质量是溶质的4-8倍，在常温下混合搅拌16h，然后挥发60h后制得膜厚为。0.4-0.6mm感应膜，将感应膜装入玻碳电极基体上，得到妈离子选择电极； ⑵配制钙离子标准系列溶液，在室温下，通过钙离子选择性电极及参比电极建立两电极体系，具体包括指示电极和饱和甘汞电极，钙离子选择性电极连接到指示电极上，饱和甘汞电极做参比电极，测量不同浓度的钙离子在含有氯化钠和Tris-NaAc缓冲溶液的测量液中的电位响应值，绘制浓度-电位响应值工作曲线，在测量液中，氯化钠的摩尔浓度为。0.10mol/L，Tris-NaAc 缓冲溶液的 pH = 7.4 ； ⑶测量待测血样钙离子的电位响应值，将电位响应值代入浓度-电位响应值工作曲线，得到待测血样钙离子浓度。
【专利摘要】本发明公开一种检测血样离子钙含量的方法，属于钙离子检测领域。本发明利用聚四氟乙烯、合成植物酯、四苯硼钠、月桂酸酯、N-丁基吡啶六氟磷酸钙、N，N，N′，N′-四环己基-3-氧杂戊二酰胺作为溶质，与溶剂四氢呋喃制成钙离子感应膜，装入玻碳电极基体上，得到钙离子选择电极；使用自制钙离子选择电极用离子选择电极法测定血样离子钙。本发明能快速测出血样中的钙离子含量，测量精度高，稳定性好，特异性高，测量步骤简单，测试成本低。
【IPC分类】G01N33-49, G01N27-333
【公开号】CN104849335
【申请号】CN201510289961
【发明人】李宏奎, 巩晓东, 赵斌, 赵喜平, 贾继芳
【申请人】李宏奎
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年5月29日