一种羊绒与羊毛的鉴别方法、用于该方法的标志物肽段的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及纺织品检测技术领域，具体涉及一种羊绒与羊毛的鉴别方法、用于该 方法的标志物肽段。
【背景技术】
[0002] 山羊绒属于稀有的特种动物纤维，素有"纤维钻石"和"软黄金"之称。中国是世 界最大的羊绒生产国，羊绒产量占世界总量的75%左右。中国也是世界第一大羊绒输出国， 羊绒及其制品年出口总额超过15亿美元，同时国内的羊绒制品市场也十分广阔。
[0003] 在巨大的经济利益驱使下，行业内掺杂使假和假冒伪劣等现象反复出现，这些都 严重妨碍了羊绒产业的健康、良性、可持续性发展。现今市场上对羊绒类纺织纤维产品的混 合掺假多为以羊毛等低价值原料掺入珍稀的山羊绒原料中，制成的织物在形貌和手感上都 极难分辨。
[0004] 目前对羊绒产品的质量检验方法以物理性的显微观察法为主，由检验人员对纤维 的细度、异型纤维率、含杂率、长度、强度、伸长度等进行检验（参见《关于山羊绒国家质量 标准的制定意见》）。这类检测方法需要检验人员接触过大量的羊绒样品，积累数十年的实 践经验，主观性强。除了最常用的光学显微镜检测法，国外研宄者也尝试过使用扫描电镜观 察纺织纤维的表面形态和精细结构，但这种方法实验成本高、操作繁琐，而且无法区分与羊 绒纤维形、结构非常近似的其他种类纤维，其中就以羊毛的混淆作用最为突出。另外，研宄 者也通过分析纤维材料中的脂质分子、DNA序列差异或者制备特异性识别羊绒的抗体来鉴 别羊绒成分，这类探索性的方法往往受到生产过程中多种化学处理（比如漂白、染色）的干 扰，使得结果出现偏差。因而行业内亟需一种科学、客观、准确的羊绒类纺织纤维产品成分 鉴别分析新技术。
【发明内容】
[0005] 本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种羊绒与羊毛的鉴别方法、用于该 方法的标志物肽段，用以解决现有技术中缺乏一种用以区分羊绒与羊毛的、简便、快速且准 确的鉴别方法的技术缺陷。
[0006] 本发明解决的另一技术问题是提供一种以标志性氨基酸序列为检测、鉴定依据的 羊绒、羊毛鉴别方法。
[0007] 本发明解决的再一技术问题是提供一种专用于上述方法的羊绒标志性肽段；
[0008] 本发明解决的又一技术问题是提供一种专用于上述方法的羊毛标志性肽段。
[0009] 为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：
[0010] 一种羊绒与羊毛的鉴别方法，其特征在于包括以下步骤：
[0011] 1)自待测样品中提取总蛋白质；
[0012] 2)检测步骤1)所述的总蛋白质中是否含有：序列为YEEEVALR的羊毛标志性肽段 或序列为QCCESNLEPLFSGYIETLR的羊绒标志性肽段。
[0013] 针对该方法优选的，步骤1)包括以下步骤：将待测样品分别通过乙醇、氯仿-甲醇 溶液浸泡；收集固形物干燥，加入蛋白提取溶液提取；弃沉淀、取上清液待用。
[0014] 针对该方法优选的，步骤2)所述检测是氨基酸序列测定；在此基础上进一步优选 的，步骤2)包括以下步骤：对步骤1)得到的总蛋白进行胰酶酶解；而后通过生物质谱分析 酶解产物中是否含有：序列为YEEEVALR的羊毛标志性肽段或序列为QCCESNLEPLFSGYIETLR 的羊绒标志性肽段；进一步优选的，步骤2)所述胰酶酶解包括以下步骤：将步骤1)得到的 总蛋白洛解后加-硫键还原剂!桴育，而后加入疏基封闭试剂，最后加入膜蛋白酶于35~ 39°C下孵育，将酶解后的蛋白脱盐、干燥，即得到酶解产物；其中，所述二硫键还原剂可以优 选为苏糖醇；所述巯基封闭试剂可以优选为碘乙酰胺。
[0015] 针对该方法优选的，步骤2)所述生物质谱分析是通过色谱-生物质谱联用系统检 测实现的。
[0016] 本发明还提供了一种用于以上方法的肽段，该肽段作为羊毛的标志性肽段具有如 下的氨基酸序列：YEEEVALR。
[0017] 本发明还提供了一种用于以上方法的肽段，该肽段作为羊绒的标志性肽段具有如 下的氨基酸序列：QCCESNLEPLFSGYIETLR。
[0018] 在利用以上方法对待测样品执行检测后，若检测结果显示待测样品总蛋白中含有 序列为YEEEVALR的肽段则判定该样品中含有羊毛成分，反之则不含有羊毛成分；若检测结 果显示待测样品总蛋白中含有序列为QCCESNLEPLFSGYIETLR的肽段则判定该样品中含有 羊绒成分，反之则不含有羊绒成分。依据该鉴别原则形成鉴别结论。
[0019] 本发明是一种针对特定蛋白质分子标志物的检测技术，该标志物本身特异性强、 稳定性好、灵敏度高，不会因生产过程中受到的理化处理（比如漂白、染色）所干扰，因此 该标志对羊绒和羊毛的指向性稳定、可靠，利用该方法对羊绒和羊毛执行鉴别、检测有效性 强。利用该技术我们能够快速、准确、客观的判断毛绒类纺织产品中是否含有羊绒、羊毛，为 该类产品的质量检验提供科学、可靠的检测手段。
【附图说明】
[0020] 图1是本发明实施例1中标准羊绒纤维的液相色谱-生物质谱检测结果图；
[0021] 图2是本发明实施例1中标准羊毛纤维的液相色谱-生物质谱检测结果图；
[0022] 图3是本发明实施例1中标准羊绒纤维与标准羊毛纤维混合物的液相色谱-生物 质谱检测结果图；
[0023] 图4是本发明实施例1中标准羊绒纤维与标准牦牛毛纤维混合物的液相色谱-生 物质谱检测结果图；
[0024] 图5是本发明实施例1中标准羊毛纤维与标准牦牛毛纤维混合物的液相色谱-生 物质谱检测结果图；
[0025] 图6是本发明实施例2中含有5%标准羊绒纤维的羊绒-牦牛毛纤维混合样品的 液相色谱-生物质谱检测结果图；
[0026] 图7是本发明实施例2中含有5%标准羊毛纤维的羊毛-牦牛毛纤维混合样品的 液相色谱-生物质谱检测结果图；
[0027] 图8是本发明实施例3中代号为S1的样品的液相色谱-生物质谱检测结果图；
[0028] 图9是本发明实施例3中代号为S2的样品的液相色谱-生物质谱检测结果图；
[0029] 在以上附图1~9中，所有可检出的标准肽段均标注在谱图中，未标注表示该标准 肽段未被检出。
【具体实施方式】
[0030] 以下将对本发明的【具体实施方式】进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在 以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。
[0031] 以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情 况下可允许数量有一定的变动。因此，用"大约"、"左右"等语言所修正的数值不限于该准 确数值本身。在一些实施例中，"大约"表示允许其修正的数值在正负百分之十（10%)的 范围内变化，比如，"大约100"表示的可以是90到110之间的任何数值。此外，在"大约第 一数值到第二数值"的表述中，大约同时修正第一和第二数值两个数值。在某些情况下，近 似性语言可能与测量仪器的精度有关。
[0032] 除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人 员普遍理解的相同含义。
[0033] 实施例1 (羊绒、羊毛组成鉴别方法的特异性实验）
[0034] 一、材料
[0035] 标准羊绒纤维样品、标准羊毛纤维样品及标准牦牛毛纤维由天津纺织工程研宄院 提供。
[0036] 二、方法
[0037] 分别取羊绒纤维标准品、羊毛纤维标准品、牦牛毛纤维进行两两混合。将上述混 合样品及标准羊绒纤维样品、标准羊毛纤维样品、标准牦牛毛纤维样品作为受试物，提取 总蛋白质并采用生物质谱分析技术检测标志性肽段QCCESNLEPLFSGYIETLR及标志性肽段 YEEEVALR。
[0038] (1)自纺织纤维样品中提取蛋白：
[0039] 将纺织纤维样品剪碎，乙醇浸泡，氯仿_甲醇溶液浸泡。滤去浸泡溶液后干燥纤维 样品，加入蛋白提取溶液提取。过滤，滤液离心，取上清液待进一步处理。
[0040] (2)胰酶酶解处理：
[0041] 提取得到的蛋白样品采用碳酸氢铵溶解，加入二硫苏糖醇并于室温下孵育，再加 入碘乙酰胺室温避光孵育，最后加入胰蛋白酶于37°C下孵育。酶解后的样本脱盐后热干，低 温保存待分析。
[0042] (3)生物质谱分析
[0043] 将上述处理后的纺织纤维蛋白的酶解样品注入色谱-生物质谱联用系统检测，利 用生物质谱分析方法获得羊绒标志肽段QCCESNLEPLFSGYIETLR及羊毛标志肽段YEEEVALR 的检测信号。
[0044] 三、结果
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