一种同时快速测定红花中四种亚精胺成分含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药有效成分含量测定技术领域，具体属于一种同时快速测定红花中 四种亚精胺成分含量的方法。
【背景技术】
[0002] 红花是菊科红花属植物红花（Carthamus tinctorius L.)的干燥管状花，花管狭 细，长约1. 5厘米，橙红色。其原名为红蓝花，别名为红花樱子、草红花、刺红花、杜红花、会 红花等。主要产地为新疆、河南、浙江以及四川等省，其味辛、微苦、性温、归心和肝经，能活 血通经、散瘀止痛、降血压和降血脂，用于治疗经闭、痛经、心绞痛、高血压、跌打损伤、冠心 病等。
[0003] 红花化学成分极具多样性，至今已从中分离得到包括醌式查尔酮苷类、黄酮类、甾 醇类、生物碱类、木脂素类、有机酸类、烷基二醇类以及多炔类等250多种化学成分。亚精胺 类化合物是指具有H 2N(CH2)3NH(CH2)4NH 2结构单元的多胺类化合物，目前已从红花中分离鉴 定四种亚精胺类成分：N1, N5, NlO- (Z) -tri-p-coumaroylspermidine (I)、NI, N5- (Z) -NlO-(E) -tri-p-coumaroylspermidine (2)、NI (E) -N5- (Z) -Nl〇- (E) -tri-p-coumaroylspermidi ne (3)、和 NI, N5, Nl〇-(E)-tri-p-coumaroyl-spermidine (4)〇
[0004] 四种亚精胺成分的结构式：
[0005]
[0006] 亚精胺类成分具有抗病毒、抗氧化、抗肿瘤、抗菌等广泛的生物活性。从红花中分 离鉴定亚精胺成分NI, Ν5- (Z) -NlO- (E) -tri-p-coumaroylspermidine (即本专利中的化合 物2)显示出对5-HT再摄取有很强选择性抑制活性，具有治疗抑郁症前景。由于亚精胺存 在众多同分异构体，在分析、分离、鉴定上存在许多困难。目前关于红花中亚精胺快速分离 制备已有专利报道（中国专利：一种运用高速逆流色谱从红花中分离制备亚精胺的方法， 【申请号】201310396939.X)。而有关红花中亚精胺类成分含量测定方法未见报道，尤其同时 快速测定红花中四种亚精胺含量的方法未见报道。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于提供一种同时快速测定红花中四种亚精胺成分附，阳，附0_ (Z) -tri-p-coumaroyl-spermidine (I)、NI, N5- (Z) -NlO- (E) -tri-p-coumaroylspermidi ne (2)、N1 (E) -N5- (Z) -Nl〇- (E) -tri-p-coumaroylspermidine (3)、和 NI, N5, NlO- (E) -tri-p -coumaroyl-spermidine (4)含量的方法。该方法应稳定、可靠、易操作，不仅能完善红花药 材质量控制的方法，同时还能为亚精胺类物质分析提供可靠的检测方法。
[0008] 本发明提供的一种同时快速测定红花中四种亚精胺成分含量的方法，包括如下步 骤：
[0009] 1)称取红花药材粉末（过60目筛）I. 0000g，置于IOOrnl棕色的具塞锥形瓶中，加 入15ml甲醇，称定重量，超声处理（超声频率40KHz，功率比91%，超声温度25°C )10min， 放冷后再次称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀、过滤，得到红花供试品溶液，再过0.45 μπι 微孔滤膜后待测；
[0010] 2)用Agilent液相色谱仪测定，色谱条件：分析柱为Agilent C18色谱柱 (250mmX4. 6mm，5 μπι)，流动相为有机溶剂/水等度洗脱，洗脱流速为I. 0ml/min，柱温 30°C，检测波长210-360nm，进样体积为10 μ 1 ;
[0011] 3)将四种亚精胺成分所对应的峰面积分别带入以下公式计算其含量；Y = 40317Χ-51. 630, Y = 35750χ-29. 313, Y = 38854χ-50. 026, Y = 48600χ-67. 042 ;
[0012] 所述的四种亚精胺成分：NI, Ν5, NlO- (Z) -tri-p-coumaroyl-spermidine (I)、NI, N 5- (Z) -NlO- (E) -tri-p-coumaroylspermidine (2)、NI (E) -N5- (Z) -NlO- (E) -tri-p-coumaro ylspermidine (3)、和 NI, N5, Nl〇- (E) -tri-p-coumaroyl-spermidine (4) 〇
[0013] 所述的有机溶剂为甲醇，洗脱梯度为47%甲醇。
[0014] 所述四种亚精胺成分（1)、（2)、（3)、（4)的检测波长分别对应为 270nm, 280nm, 290nm, 300nm。
[0015] 本发明采用HPLC法同时测定红花中四种亚精胺类有效成分含量，方法可靠易操 作，提供了一种亚精胺含量测定的新方法。该方法在亚精胺的提取、合成、分析、以及相关药 物研发和生产中质量控制方面具有应用前景。
【附图说明】
[0016] 图1不同波长下红花中四种亚精胺成分NI, N5, NlO-(Z)-tri-p-coumaroyl-sperm idine(I)、NI, N5-(Z)-NlO-(E)-tri-p-coumaroylspermidine(2)、NI (E)-N5- (Z)-NlO-(E)-tri-p-coumaroylspermidine (3)、和 NI, N5, Nl〇-(E)-tri-p-coumaroyl-spermidine(4)混 合对照品的HPLC图。
[0017] 图2不同波长下红花药材的HPLC图。
【具体实施方式】
[0018] 实施例1 :
[0019] 液相色谱分析条件：分析柱为Agilent C18色谱柱（250mmX4. 6mm, 5 μπι)， 流动相为47 %甲醇/水等度洗脱，洗脱流速为1.0 ml/min，柱温30 °C，检测波长为 270nm, 280nm, 290nm, 300nm多波长检测，进样体积为10 μ 1。
[0020] 对照品溶液的制备：
[0021] 混合对照品贮备液的配制：分别精密称取亚精胺类化合物1标准品4. 16mg，亚精 胺类化合物2标准品5. 12mg，亚精胺类化合物3标准品5. 40mg，亚精胺类化合物4标准品 10. 04mg，于100mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到混合对照品溶液贮备液（各标准 品由本实验室所制备）。
[0022] 混合对照品溶液的配制：用吸量管分别精密吸取对照品贮备液0. 5ml，0. 8ml，2. O ml，3. Oml，4. Oml，5. Oml分别置于IOml棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成不同浓度 的混合对照品溶液，微孔滤膜（0.22 μ m)过滤即得。
[0023] 供试品溶液的制备：
[0024] 精密称取红花药材粉末（过60目筛）1.0 OOOg，置于100mL棕色的具塞锥形瓶 中，精密加入15ml甲醇，称定重量，超声处理（超声频率40KHz，功率比91%，超声温度 25°C ) 10min，放冷后再次称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀、过滤，取所得的红花供试品溶 液过0. 45 μ m微孔滤膜后即得。
[0025] 分别吸取混合对照品溶液、供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0026] 该方法能够准确有效的测定红花中四种亚精胺成分NI, Ν5, N10-(Z)-tri-p_couma royl-spermidine (I)、NI, N5- (Z) -NlO- (E) -tri-p-coumaroylspermidine (2)、NI (E) -N5- (Z )-Nl〇- (E