一种冠心宁片的指纹图谱的建立方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种中药制剂的指纹图谱的建立方法，具体涉及一种冠心宁片的指纹 图谱的建立方法及其应用。 (二）
【背景技术】
[0002] 冠心宁片为正大青春宝药业有限公司研发的中药新产品，于2015年4月获得国家 食品药品监督管理总局颁发的生产批件。它是丹参和川芎两味中药组成的复方制剂，系部 颁中药17册收载的"冠心宁注射液"经改变给药途径研制而成的中药制剂。冠心宁片具有 活血化瘀、通脉养心的功效，用于冠心病稳定型劳累性心绞痛I、II级中医辩证属心血瘀阻 证，症见胸痛、唇舌紫暗。
[0003] 冠心宁片质量标准中的含量测定成分为丹参中的丹酚酸B和川芎中的阿魏酸，且 这两个成分在治疗心血管疾病方面具有较强的药理作用。对于目前的中药复方制剂来说， 能够做到对处方中的每一味药物都有一个含量测定的成分，已经是一个比较高的水平。但 是如果要比较全面地对一个中药制剂进行质量控制，中药指纹图谱技术是一个可行且有效 的手段。指纹图谱能够比较全面地反映产品中各物质的种类和含量，使得对产品的质量控 制更加精准，更能准确和真实地反映出产品的质量。 (三）
【发明内容】
[0004] 本发明提供了一种冠心宁片的指纹图谱的测定方法，该方法精密度、重复性、稳定 性良好，获得的色谱峰较多且分离度较好，指纹图谱的相似度高，能更加全面反应出冠心宁 片的产品质量。
[0005] 本发明采用的技术方案是：
[0006] -种冠心宁片的指纹图谱的建立方法，所述方法包括以下步骤：
[0007] (1)供试品溶液的制备：将冠心宁片研细后混匀，精密称取0· 05~0· 50g，加入 25~IOOmL的蒸馏水或体积浓度0~100%的甲醇水溶液，超声处理10~30分钟，放冷， 过滤，取滤液，即得供试品溶液；
[0008] (2)色谱分析：取10个以上批次的冠心宁片按照步骤（1)方法制备供试品溶液， 然后按照以下条件进行高效液相色谱分析，得到不同批次冠心宁片的液相色谱图；
[0009] 色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积浓度0. 1 %磷酸水 溶液为流动相A，以乙腈为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱程序为：0~IOmin时流动相A 的体积分数为97 %，10~30min时流动相A的体积分数为97~87 %，30~35min时流动相 A的体积分数为87~86 %，35~60min时流动相A的体积分数为86~80 %，60~90min 时流动相A的体积分数为80~77 %，90~IOOmin时流动相A的体积分数为77~75 %，检 测波长为250~330nm，柱温为20~30°C ;
[0010] (3)步骤⑵获得的不同批次冠心宁片的液相色谱图导入国家药典委员会提供的 中药色谱指纹图谱相似度评价系统，设置多点校正，自动匹配，软件自动生成冠心宁片的标 准指纹图谱。
[0011] 所述步骤（1)中，所述超声处理的条件为：超声频率25KHZ、超声功率80~100W。
[0012] 所述步骤⑴中，所述体积浓度0~100%的甲醇水溶液，其中的0代表无限接近 于0但不为0。
[0013] 优选步骤（1)中加入蒸馏水或体积浓度50%的甲醇水溶液，更优选蒸馏水。
[0014] 进一步，优选步骤（1)按以下操作：将冠心宁片研细后混匀，精密称取0. 10g，加入 50mL的蒸馏水或体积浓度50%的甲醇水溶液，在超声频率25KHz、超声功率100W的条件下 超声处理20分钟，放冷，过滤，取滤液，即得供试品溶液。
[0015] 所述步骤⑵中，优选色谱柱为ZORBAX SB-C18柱，柱长250mm，内径4. 6mm，填充 剂为十八烷基硅烷键合硅胶，填充剂粒径5 μπι，流速：1.0ml/min，柱温：25°C ;DAD紫外检测 器检测波长：285nm。
[0016] 所述步骤（2)中，以体积浓度0.1%磷酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B进 行梯度洗脱，流动相A的体积分数是指流动相A的体积与流动相A和B的体积总和之比，流 动相A和流动相B的体积分数之和为100%。这是本领域技术人员公知的。
[0017] 所述步骤（2)中，梯度洗脱程序中，10~30min时流动相A的体积分数为97~ 87%，是指设定10~30min内，流动相A的体积分数从97 %线性下降至87%，这是本领域 技术人员在设定高效液相色谱仪的梯度洗脱程序时的通用表示方法。
[0018] 即梯度洗脱程序为：0~IOmin时流动相A的体积分数为97%，10~30min时流 动相A的体积分数从97 %线性下降至87 %，30~35min时流动相A的体积分数从87 %线 性下降至86%，35~6〇111；[11时流动相4的体积分数从86%线性下降至80%，60~901]1；[11时 流动相A的体积分数从80 %线性下降至77%，90~IOOmin时流动相A的体积分数从77% 线性下降至75%。
[0019] 本发明还提供按上述方法获得的标准指纹图谱，如图4所示，有6个已定性的色谱 特征峰，分别为：丹参素对应的4号色谱峰，原儿茶醛对应的6号色谱峰，咖啡酸对应的10 号色谱峰，阿魏酸对应的11号色谱峰，迷迭香酸对应的15号色谱峰，丹酚酸B对应的17号 色谱峰。
[0020] 定性色谱特征通过将供试品溶液的液相色谱图与对照品溶液的液相色谱图比对 获得。
[0021] 以丹酚酸B对应的17号峰为参照峰，标准指纹图谱中各共有峰的相对保留时间和 相对峰面积如下表1 :
[0022] 表 1
[0023]
CN 105158352 A VL 3/IU 贝
[0024] 本发明获得的冠心宁片的标准指纹图谱可用于冠心宁片生产工艺监控、质量评价 或者真伪鉴别中。
[0025] 进一步，所述应用的方法为：将待测冠心宁片样品按照步骤（1)、（2)的方法获得 待测样品的液相色谱图，与标准指纹图谱进行比对，相似度在〇. 95以上判定为合格产品， 相似度低于〇. 95判定为不合格产品。
[0026] 与现有技术相比，本发明的优势体现在：该方法精密度、重复性、稳定性良好；获 得的色谱峰较多且分离度较好，指纹图谱的相似度高。能更加全面反应出冠心宁片的产品 质量，能够应用于冠心宁片的生产过程控制和成品的质量评价。 (四）
【附图说明】
[0027] 图1为混合对照品溶液的色谱图，色谱峰a为丹参素钠对照品、色谱峰b为原儿茶 醛对照品、色谱峰c为咖啡酸对照品、色谱峰d为阿魏酸对照品、色谱峰e为迷迭香酸对照 品、色谱峰f为丹酚酸B对照品。
[0028] 图2为批号Sl的冠心宁片样品的供试品溶液的高效液相色谱图。
[0029] 图3为11个不同批次样品的液相色谱图；图3中的R曲线为软件自动生成的标准 指纹图谱。
[0030] 图4为标准指纹图谱。 (五）
【具体实施方式】
[0031] 下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于 此：
[0032] 实施例1 :冠心宁片的指纹图谱建立
[0033] (1)高效液相色谱条件
[0034] 仪器名称：安捷伦1100高效液相色谱仪
[0035] 色谱条件：色谱柱：ZORBAX SB-C18(柱长250mm，内径4. 6mm)，填充剂：十八烷基硅 烷键合硅胶（粒径5 μ m)，流速：1.0ml/min，柱温：25°C
[0036] DAD紫外检测器检测波长：285nm
[0037] 以体积浓度0. 1 %磷酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱条件为O~ IOmin时流动相A为97 %，10~30min时流动相A为97~87 %，30~35min时流动相A为 87~86 %，35~60min时流动相A为86~80 %，60~90min时流动相A为80~77 %， 90~IOOmin时流动相A为77~75%。
[0038] (2)对照品洛液的制备：
[0039] a、丹参素钠对照品溶液：精密称取减压干燥12小时的丹参素钠对照品（中国药 品生物制品检定所，批号：110855-200506)8. 7mg，置25ml量瓶中，用水超声溶解并稀释至 刻度，摇匀，精密量取4ml，置25ml量瓶中，加水至