用于确定双疗法药物的改性效力程度的方法
【专利说明】
[0001] 本申请要求2013年3月18日提交的俄罗斯专利申请No. 2013111961的优先权， 以引用的方式将其整体全部并入本文。
技术领域
[0002] 本发明涉及药物、特别是制药领域。本发明用于确定药物、特别是双疗法 (biphatic)药物的改性效力，所述双疗法药物的至少一种组分以可靠和可重复的方式根据 顺势疗法技术制备。
【背景技术】
[0003] 活性强化形式
[0004] 根据顺势疗法技术制备的药物包括通过在载体（水或水-醇溶剂）中的多次连 续稀释（由此降低浓度）以及对各连续稀释液进行的振荡由顺势疗法强化（也称为活化） 制备的药物，参见例如RU 2191601 C1;RU 2192888 C1;RU 2332236 C1(英文版为EP 2 123 300);以及RU 2438707 C 2 (U.S.专利公开2011/0008452)。通过顺势疗法强化获 得的制剂为含有低剂量或极低剂量的初始药物的药物；稀释可进行至每分子处于分子形式 的初始药物约为或超过1摩尔载体，需要注意的是，每摩尔的分子总数由阿伏伽德罗常数 (6.(^SXloMmol 1)给出。术语分子形式在下文中进一步定义。在固体的上下文中，稀释指 的是磨碎。通过顺势疗法技术，载体可获得改性效力，当通过所述活性强化形式处理时，显 示出改变起始物质的物理、化学和/或生物性质的能力（RU 2161955 C1)。
[0005] 术语"分子形式"用于表示特定化学物质的一个或多个分子。因此，阿司匹林的分 子形式可为单个分子的乙酰水杨酸；处于分子形式的1摩尔阿司匹林由6. 022X 1023个乙酰 水杨酸分子组成，重180. 157克。
[0006] 术语"活性强化形式"用于表示含有物质的分子形式的初始溶液的顺势疗法强化 产物。换句话说，根据顺势疗法技术，使含有物质的分子形式（例如特定的抗体或有机分 子）的溶液接受连续重复稀释并对每次获得的溶液进行多次竖直振荡。优选的稀释剂（通 常称为载体）为水或水-乙醇混合物。初始载体中的优选的分子形式的浓度为约〇. 5mg/ml 至约5. Omg/ml。可通过顺势疗法强化由初始溶液制备活性强化形式，优选通过1份各在先 溶液的连续稀释而成比例降低浓度的方法。因此，将1份初始溶液与99份载体混合（百倍 稀释），并使之接受外部作用。优选外部作用涉及每次稀释时的多次竖直振荡（稀释增效 法，dynamization)。这使得制得第1百倍稀释液（表示为C1)。通过将1份的第1百倍稀 释液C1与99份载体混合，制备第2百倍稀释液（C2)。将这一过程另外重复10次，从而制 备第12百倍稀释液C12。通常将单独的容器用于后续各次稀释，直至所需的稀释系数。以 相应的稀释系数实施类似程序，从而获得例如C30、C50和C200稀释液。这一方法在顺势疗 法领域中被广泛接受。参见例如 V.Schwabe，"Homeopathic medicines"，M.，1967,第 14-29 页，以引用的方式将其并入本文用于所述目的。C12、C30和C200表示抗体的初级基质溶液 (原始羾剂，mother tincture)分别被稀释10012、1003°和100 2°°倍的稀释液。
[0007] 优选的活性强化形式通常为相同分子形式的多种百倍稀释液的混合物。例如， C12、C30和C50稀释液的混合物，或者C12、C30和C200稀释液的混合物。当使用组合物的 各组分的多种顺势疗法稀释液（例如C12、C30、C50和C200)的混合物时，所述稀释液根据 上述过程分别制备直至获得倒数第二份稀释液（例如，分别直至C11、C29和C199)，然后根 据混合物组成将1份的各组分加入一个容器中，并与所需量的载体（如，用97份以进行百 倍稀释）进行混合。
[0008] 顺势疗法强化的实例在US专利号7, 572, 441和7, 582, 294中描述，以引用的方式 将其整体并入本文用于所述目的。术语"活性强化形式"和术语"极低剂量"彼此完全支持 并基本上同义。
[0009] 顺势疗法的双疗法（bipathy)
[0010] US专利号8, 178, 498描述了双疗法药物形式的概念。双疗法药物制剂将治疗剂量 药物物质的治疗价值同与该药物物质化学上同源质但在对机体的作用机制方面不同的活 性强化制剂的治疗价值进行组合。换言之，所述双疗法药物制剂将约处于标准浓度的药物 物质的分子形式同衍生自相同分子形式、但其分子形式以极低浓度存在（如果有的话）的 活性强化形式进行组合。组合或者几乎同时给予的标准剂量和活性强化形式显示出促进生 物活性并在"全身性适应"方面诱导积极的形态和功能改变，从而担负起活性药物物质的增 高的治疗效果以及患者个体反应的降低的风险和不期望的不利副作用或后遗症。
[0011] 此外，根据US专利号8, 178, 498,处于治疗剂量的药物物质和活性强化形式的"双 疗法"的同时给予：（1)允许更低的物质常规剂量；(2)预防由酶"诱导"引起的习惯化；以 及（3)预防归因于负能量中和作用的药物过量以及对一些器官和整个机体的刺激作用。US 专利号8, 178, 498以引用的方式整体并入本文用于所述目的。
[0012] 药物的定性和/或定量评价
[0013] 本领域已知用于确定物质的生物活性的方法（例如RU 2181890 C1)。活性以物 质添加之前和之后对测试样品的酶促应答率之比表示。在体外确定"样品中的最佳物质浓 度"。然而，该方法不适于确定根据顺势疗法技术制备的药物的效力。
[0014] 本领域已知通过在恒定磁场的存在下向活化药物施加线性的偏振相干光学辐射， 从而确定顺势疗法药物的效力。利用来自测试介质不同点的光学偏差模式中的偏振成分强 度的时间相关积累值来测量经散射的透射。进行分析以计算透过强度的极低波动的频谱， 并将数据与标准样本进行比较。参见例如RU 2112976 C1。
[0015] 另外已知的是，用于定性测定顺势疗法药物或活性强化形式的方法。该方法包 括对具有标准样本的测试介质进行处理，并记录物理和化学参数的改变。使用其结构和 /或组成与已确定的顺势疗法药物或强化物质形式以及这些已知物质的抗体的结构和/ 或组成大体相似或相似的一组已知物质。识别顺势疗法药物或强化物质形式应基于已知 的物质，当将顺势疗法药物或强化物质形式引入反应介质中时，所述已知的物质与合适的 抗体反应并伴有改变，利用基于抗原-抗体反应的免疫化学分析方法记录这些改变（RU 2195648 C2)。
[0016] 然而，现有技术方法并未提供与活性强化形式有关的药物特性和效力的可靠且可 重复的定性和定量测定。这包括根据上述顺势疗法技术制备的活化药物。
【发明内容】
[0017] 确定物质的活性强化形式的活性的方法，所述方法包括：提供物质的活性强化形 式；确保在所述活性强化形式中不含物质的分子形式；提供所述物质的分子形式；利用合 适的分析方法对所述物质的所述分子形式的至少一种物理、化学或生物参数（A)进行测 量；用所述物质的所述活性强化形式对所述物质的所述分子形式进行处理；以及利用所述 分析方法对所述经处理的所述物质的分子形式的至少一种物理、化学或生物参数（A M)进行 测量，其中，所述物质的所述活性强化形式的所述活性为A与AM之间的差异程度。
[0018] 如上所述的方法进一步包括根据式X = C(A_AM)/A，以相对单位（X)表示所述物质 的所述活性强化形式的所述活性。
[0019] 上述方法进一步包括：i)用所述第一物质的活性强化形式对不同物质的分子形 式进行处理；ii)用所述分析方法对所述不同物质的所述分子形式的至少一种物理、化学 或生物参数（B)进行测量；iii)利用所述分析方法对所述经处理的所述不同物质的分子形 式的至少一种物理、化学或生物参数（B M)进行测量，从而确定所述方法的特异性，其中，当 对于A-Am而言所述至少一种物理、化学或生物参数以统计学上显著的方式改变而对于B-Bm 而言不以统计学上显著的方式改变时，认为所述方法是特异的。
[0020] 如上所述的方法，其中，所述分析方法为高效液相色谱。
[0021] 如上所述的方法，其中，所述分析方法为免疫测定（immunoferment)分析。
[0022] 如上所述的方法，其中，所述分析方法为核磁共振。
[0023] 如上所述的方法，其中，所述确保不含物质的分子形式的步骤包括移出所述物质 的分子形式。
[0024] 如上所述的方法，其中，所述物质为抗体。
[0025] 如上所述的方法，其中，所述抗体为多克隆抗体。
[0026] 如上所述的方法，其中，所述物质为有机小分子。
[0027] 如上所述的方法，其中，所述活性强化形式是液体。
[0028] 如上所述的方法，其中，所述活性强化形式被浸渍至固态载体上。
【附图说明】
[0029] 图1示出Ab抗IFN- y +AC以及Ab抗IFN- y +纯水的NMR谱的叠加图。
【具体实施方式】
[0030] 参考所附的权利要求书对本发明进行限定。关于权利要求书，相关定义已在上文 中提供，另外的定义在此提供。
[0031] 本文使用的术语"抗体"意味着特异性地结合至另一分子的特定空间和极性结构、 并因此被定义为与另一分子的特定空间和极性结构互补的免疫球蛋白。权利要求书中所列 举的抗体可包括完整的免疫球蛋白或其片段，可为天然抗体、多克隆抗体或单克隆抗体，并 可包括多个类及同种型，例如184、18〇、18￡、1861、1862 &、186213和1863、1811等。免疫球蛋 白的片段可包括Fab、Fv和F(ab'） 2以及Fab'等。单数"抗体（antibody)"包括复数"抗 体（antibodies)"。
[0032] 术语"活性强化形式"或"强化形式"用于表示含有物质（例如抗体）的分子形式的 任何初始溶液的顺势疗法强化产物。顺势疗法强化的抗体的实例在美国专利号7, 572, 441 和7, 582, 294中描述，以引用的方式将其整体并入本文中并用于所述目的。当存在三个因 素时，抗体处于"活性强化"或"强化"形式。首先，抗体的"活性强化"形式为顺势疗法领域 广泛接受的制备过程的产物。其次，抗体的"活性强化"形式必须具备通过现代药学广泛接 受的方法确定的生物活性。第三，抗体的"活性强化"形式所表现出的生物活性不能由顺势 疗法过程终产物中的抗体的分子形式的存在加以解释。
[0033] 关于用顺势疗法对人类受试者进行治疗已有许多争议。虽然本发明依靠已接受的 顺势疗法过程来获得物质的"活性强化"形式（即分子形式），但是其并不仅仅依赖于在人 类受试者中进行顺势疗法来证明其活性。特别是对于由抗体构成的分子形式而言，本申请 的发明人出乎预料地发现、并在已接受的药理学模型中充分证明，由起始的抗体的分子形 式进行连续多次稀释而最终得到的溶剂具有明确的活性，且与痕量的抗体的分子形式在目 标稀释液中的存在无关。另外，所述的抗体的"活性强化"形式仅涵盖溶液或固体制剂，所 述溶液或固体制剂的生物活性不能由初始、起始溶液中余留的抗体的分子形式的存在进行 解释。换句话说，虽然抗体的"活性强化"形式可包含痕量的初始的抗体的分子形式也在考 虑之列，但是由于连续稀释后余留的抗体的分子形式的浓度极低，因此本领域技术人员不 能以任何程度的合理性将在已接受的药理学模型中观察到的生物活性归因于余留的抗体 的分子形式。虽然本发明并不受任何具体理论的限制，但是本发明的抗体的"活性强化"形 式的生物活性并不归因于初始的抗体的分子形式。优选所述抗体的"活性强化"形式处于 液体形式或固体形式，其中，抗体的分子形式的浓度低于所接受的分析技术（如毛细管电 泳和高效液相色谱）的检测限。特别优选抗体的"活性强化"形式处于液体形式或固体形 式，其中，抗体的分子形式的浓度低于阿伏伽德罗常数（即，1分子的分子形式/6. 022X1023 分子载体）。
[0034] 本发明的药物组合物扩展了可用于治疗和预防感染性疾病（包括细菌感染以及 急性和慢性病毒感染）的制剂库。
[0035] 根据本发明这一方面的复合药物组合物可处于液体形式或固体形式。制备本发明 所述的复合药物的活性强化组分的优选程序为：使用抗体初级基质溶液分别被稀释1〇〇 12、 1003°和100 5°倍的3种水性-醇稀释液的混合物，相当于百倍顺势疗法稀释液C12、C30和 C50 ;或者使用抗体初级基质溶液分别被稀释10012、1003°和100 2°°倍的3种水性-醇稀释液 的混合物，相