具有可变对照线的用于快速检测的条带以及使用该条带的诊断试剂盒的制作方法
【技术领域】 本发明设及具有可变对照线的用于快速检测的条带、包括用于快速检测的条带的诊断 试剂盒、W及用于通过使用该条带定性和定量分析样品中分析物的方法。
【背景技术】 免疫层析法，被称为快速检测方法，是用于通过短时期内的抗原-抗体反应来定性和 定量分析少量分析物的方法，并且已经应用于多个领域，例如医疗领域、农业、牧畜业、食 品、军事、环境等，连同用于多种疾病的诊断或检查。通常，利用包含与祀标分析物反应W产 生变化的试剂的分析条，或者利用包括塑料盒和安装在该盒中的分析条的分析装置来实施 该免疫层析法。图1是用于免疫层析法的常规分析条的截面视图。如图1所示，常规分析 条由W下组成：用于接收液体样品的样品垫；包含结合物的结合垫，该结合物通过将产生 由肉眼或传感器可检测的信号的标记（例如，金颗粒）结合到配体（例如抗原或抗体）进 行制备；检测垫，在该检测垫上形成了固定有特异性结合到该样品中分析物和/或该结合 物的结合剂（抗体或抗原）的检测线W及用于确定该样品迁移的对照线；和用于最后接收 该液体样品的吸附垫。将运些功能垫按W上描述它们的顺序连接成彼此部分地重叠，并且 连续地安排在固体支撑件上。如果使用了安装在塑料盒中的分析条，则用于将样品引入到 样品垫的样品接收孔形成在该盒的上部部分上，并且用于观察该检测结果的结果观察窗形 成在该检测垫的结合剂被固定的位置上。在利用该分析条的免疫层析法中，当将液体样品 注射到该样品垫内时，液体样品通过毛细作用沿该结合垫和该检测垫流动，并且最后被吸 附垫吸附。例如，能够与祀标抗原结合的一个抗体在膜垫上固定成一条线（检测线），并且 其他抗体与标记（例如金颗粒中的一个）结合，然后允许该样品迁移。当该样品跨越该结 合垫迁移时，它的一部分产生抗原-金颗粒抗体的复合物，并且在固定的检测线处捕获该 抗原-金颗粒抗体W形成"在检测线-抗原-金颗粒抗体处固定的抗体"。此时，该检测线 由于金颗粒被染成红色。如此，包含于结合垫中的该结合物还与该液体样品一起迁移。如 果祀标分析物存在于该样品中，则该结合物通过该分析物被结合到固定在该检测垫上的结 合剂（通常称为"夹层反应"），或者该结合物或该分析物竞争性地结合到该结合剂（通常 称为"竞争性反应"）。基于运种概念，该分析条用于利用肉眼或传感器来检测样品中分析 物的存在。 发明披露 技术问题 先前所述的该快速检测方法，即利用快速试剂盒的免疫层析法，通常处于条带的形式， 通过在长膜片上沿若干水平线固定单独的具体物质然后纵向切割它来制备该条带。因此， 优势在于，它W简单方式进行大量生产是可能的；另外，与酶联免疫吸附测定等相比，不需 要额外的洗涂步骤或第二级反应，并且该反应时间短至10分钟。因此，该免疫层析法在便 利性方面为极好的。然而，缺点在于，它的检测极限为相对较低的，并且由于基于肉眼检测 的缘故，精确的定量分析为困难的。出于运个原因，该常规免疫层析法通常用于定性分析， 并且在其定量分析方面存在许多限制。 诸位发明人已经尽力改进该免疫层析条在定量分析连同定性分析方面的可靠性，并且 因此，他们已经发现通过添加含有等同于分析物或其类似物的可控对照线，然后对比该检 测线和该可变对照线之间的信号强度，定量分析为可能的。因此，本发明提供具有可控对照 线的用于快速检测的条带，该条带可W用于利用肉眼进行样品中分析物的高度可靠的定量 分析连同其定性分析。 问题的解决方案 在一个方面，本发明提供用于与结合垫和检测垫进行快速检测的条带，其中该结合垫 具有与分析物反应的第一预定量的第一配体和结合到该第一配体的信号检测标记，该第一 配体和该标记在样品迁移之前或在样品迁移时彼此链接W形成结合物，并且该结合物可W 在样品迁移时迁移到检测垫， 其中该检测垫具有彼此分离的检测线和可变对照线， 其中该检测线与和该样品中分析物反应的第二配体一起固定，并且 其中该可变对照线与第二预定量的第=配体一起固定，该第=配体等同于与该第一配 体反应的该分析物或其类似物，从而能够与没有结合到样品中分析物的裸结合物反应。 在优选的实施例中，用于快速检测的条带的特征在于，该第一预定量的第一配体的部 分与该样品中分析物发生反应，W从而形成复合物，其中该分析物结合到具有该第一配体 和该标记的结合物，并且所形成的复合物的量随着该样品中分析物浓度的增加而增加，然 而该裸结合物的量降低。 在另一个优选的实施例中，用于快速检测的条带的特征在于，具有第一配体、标记和分 析物的该复合物与在该检测线处捕获的第二配体发生反应，没有结合到该样品中的分析物 并且具有第一配体和标记的该裸结合物与在该可变对照线处捕获的该第=配体发生反应， 并且可W通过测量来自该检测线和该可变对照线的信号来确定该样品中的分析物是否存 在或其量或者上述两者。 仍在另一个优选的实施例中，用于快速检测的条带的特征在于，该可变对照线的信号 强度随着该样品中分析物浓度的增加而降低。 还在另一个优选的实施例中，用于快速检测的条带的特征在于，来自该可变对照线的 信号强度保持为恒定水平，直到该样品中分析物的浓度达到M值，但是当该浓度超过M值时 该信号强度逐渐降低，并且最后收敛为0,其中在W该第二预定量固定的所有第=配体通过 与该裸结合物反应达到饱和的情况下M值为样品中分析物的最大浓度。 还在另一个优选的实施例中，用于快速检测的条带的特征在于，该检测垫进一步具有 用于确定样品迁移的恒定对照线，该恒定对照线与报道分子一起固定。 另外在另一个优选的实施例中，用于快速检测的条带的特征包括： 样品垫，将包含待分析的分析物的样品引入到该样品垫内； 结合垫，该结合垫的一端连接到该样品垫； 检测垫，该检测垫的一端连接到该结合垫的另一端； 吸附垫，该吸附垫的一端连接到该检测垫的另一端，提供该样品从样品垫运输的驱动 力讯 放置在用于快速检测的条带的下侧上的固体支撑件。 还在另一个优选的实施例中，用于快速检测的条带的特征在于该支撑件由选自下组的 材料制成，该组由W下各项组成：硝化纤维、尼龙、PVDF(聚偏氣乙締）、玻璃和塑料。 还在另一个优选的实施例中，用于快速检测的条带的特征在于该第一配体、该第二配 体和该第S配体为蛋白质、抗原、抗体、DNA、RNA、PNA或适体。 还在另一个优选的实施例中，用于快速检测的条带的特征在于该标记为胶态金、乳胶 粒、彩色的聚苯乙締微粒、酶、巧光颜料、导电聚合物、发光物质或磁性颗粒。 还在另一个优选的实施例中，用于快速检测的条带为免疫层析条。 在另一方面，本发明提供包括如上所述额外安装在盒中的用于快速检测的条带的诊断 试剂盒，其中该试剂盒在下部盒中具有导向件和条带支撑件，在上部盒中具有样品接收孔， 并且结果观察窗放置在对应于该检测线和该可变对照线的位置。 在优选的实施例中，诊断试剂盒的特征在于该试剂盒配备有标准信号数据，该标准信 号数据包含用于含有处于多种浓度的分析物的样品的检测线和可变对照线的标准比色表。 在另一个优选的实施例中，该诊断试剂盒的特征在于可W通过用肉眼检查检测线和可 变对照线的标记的信号是否存在及其强度，来实施定性或半定量分析。 仍在另一方面，本发明提供利用上述的用于快速检测的条带对样品中分析物进行定量 或定性分析的方法， 该方法包括如下步骤： 将该样品引入到该结合垫或在该结合垫之前定位的垫内，并且允许该样品迁移（步骤 1); 检测来自该检测线和该可变对照线的标记的信号是否存在及其强度（步骤2);和 将该检测线和该可变对照线的信号强度与标准信号数据进行对比W确定该分析物的 量， 其中通过使包含不同已知浓度的该分析物的样品中的每一个经历步骤1和2来获得该 步骤信号数据（步骤3)。 在优选的实施例中，该方法的特征在于，在步骤2中，利用光密度计检查来自该检测线 和该可变对照线的标记的信号是否存在及其信号强度。 仍在另一方面，本发明提供用于样品中一种或多种分析物的定量或定量分析的方法， 包括使该样品与吸附在固体支撑件上的配体发生反应，其特征在于对一个分析物施加了两 种不同的反应机制。 在优选的实施例中，该方法的特征在于该两种不同的反应机制为夹层反应和竞争性反 应。 本发明的有利效应 因为本发明的用于快速检测的条带具有可变对照线，所W由于钩效应克服分析物在定 量分析方面的困难并且还利用肉眼W简单快速方式进行高度可靠的定量分析连同定性分 析是可能的。此外，存在如下作用：分析物的动态范围可W通过检测线和可变对照线的互补 效应来改进。
【附图说明】 图1是示出了用于典型的免疫层析法中的分析条的横截面视图的示意图； 图2是示出了用于本发明的免疫层析法中的分析条的示意图； 图3是示出了在引入样品之前和之后，在本