在线净化-液相色谱-质谱/质谱法测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的测定方法，尤其是涉及一种通过 在线净化-液相色谱-质谱/质谱法对菊花中吡虫啉和吡蚜酮进行定量检测的方法。
【背景技术】
[0002] 菊花为一种常用药材，收载于中国药典中，功能清肝利胆、健胃消食、利尿消肿；同 时其也常用作饮品。吡虫啉和吡蚜酮是吡啶类杀虫剂，具有广谱、高效、低毒的特点，能有效 防治菊花花期蚜虫的侵害，是有关部门向菊农推荐使用的有效防治蚜虫的农药；同时这两 种农药也就不可避免地在菊花上产生一定的残留。为有效控制菊花的质量，保障人身健康， 非常必要对吡虫啉和吡蚜酮在菊花上的残留量进行分析。
[0003] 目前，涉及菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量测定的检测方法较少。盛静等通过液相 色谱对杭白菊中吡虫啉的残留量进行检测，从而对其残留进行动态研究;徐艳等采用高效 液相色谱法同时测定中药材亳菊中多菌灵、吡虫啉和啶虫脒的残留量，最低检出浓度为 0·02mg/kg。
【发明内容】
[0004] 为了弥补采用液相色谱-质谱/质谱法测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的空白， 特别是采用在线净化的前处理方法，本发明的目的是提供一种利用在线净化-液相色谱-质 谱/质谱法准确、灵敏、简便的测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮的检测方法。
[0005] 为了实现上述的目的，本发明采用了以下的技术方案：
[0006]在线净化-液相色谱-质谱/质谱法测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的方法，其 特征在于该方法包括以下的步骤：
[0007] 1)试样处理:称取1.00g样品，置入50mL塑料离心管中，加入约20mL水浸泡30min， 均质后加入20mL乙腈和约4g氯化钠，祸旋3min，离心，取上层溶液约lmL过膜，在线净化，液 相色谱-质谱/质谱仪测定。
[0008] 2)净化:采用在线净化，条件为：
[0009] &)在线净化柱：〇5^1〇116-?，5〇111111\0.5111111，6(^111;
[0010] b)流动相:水+乙腈，梯度上样洗脱；
[0011] c)进样量：10yL。
[0012] 3)测定:采用液相色谱-质谱/质谱法，其中：
[0013] 液相色谱条件为：
[0014] a)色谱柱:C18，150mmX4.6mm(内径），5μπι;
[0015] b)流动相：乙腈+0.1 %甲酸溶液，梯度洗脱；
[0016] 。)柱温:20°(3。
[0017]质谱条件为：
[0018] a)离子源：电喷雾离子源；
[0019] b)扫描方式:正离子扫描；
[0020] C)检测方式:多反应监测；
[0021] d)电喷雾电压:3 200V;
[0022] 幻离子源温度:300。〇；
[0023] f)鞘气压力：5〇Arb;
[0024] g)辅助气压力：20Arb;
[0025] h)毛细管温度：270°C;
[0026] i)碰撞气压力：1 · 5mTorr;
[0027] j)鞘气、辅助气均为高纯氮气;碰撞气为高纯氩气。
[0028] 4)空白试验
[0029] 除不加试样外，均按上述测定步骤进行；
[0030] 5)结果计算和表述
[0031] 按公式(1)计算试样中吡虫啉或吡蚜酮的残留量： CV
[0032] 1 = --
[0033] 式中：
[0034] X-试样中吡虫啉或吡蚜酮的含量，单位为毫克每千克；
[0035] C-由标准工作曲线得到样液中吡虫啉或吡蚜酮的浓度，单位为微克每毫升；
[0036] V-样液最终体积，单位为毫升；
[0037] m-最终样液所代表的试样量，单位为克。
[0038] 作为优选，上述在线净化的流动相条件如表1:
[0039]表1在线净化的流动相条件
[0042] 作为优选，上述液相色谱的流动相条件如表2:[0043]表2液相色谱的流动相条件
[0040]
[0041]
[0044]
[0045] 作为优选，上述的多反应监测离子对条件表3:
[0046] 表3多反应监测离子对和碰撞能量
[0047]
[0048] 其中，带的为定量离子，其余为定性离子。
[0049] 本发明的测定方法采用在线净化-液相色谱-质谱/质谱法测定菊花中吡虫啉和吡 蚜酮的残留量，方法简便、快速、准确、可靠，检测限、回收率和精密度均符合要求。
[0050] 本发明的测定方法具有以下技术效果：
[0051] 1)首次开发了在线净化-液相色谱-质谱/质谱法同时测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮 残留量的方法，填补了技术空白；
[0052] 2)提供了在线净化-液相色谱-质谱/质谱法测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的 最优净化条件和仪器条件。
【附图说明】
[0053] 图1为标准溶液多反应监测(0.5ng/mL)色谱图。
[0054] 图2为样品溶液多反应监测色谱图（吡虫啉检出）。
【具体实施方式】
[0055] 为进一步说明本发明，结合以下实施例具体说明：
[0056] 1、试剂和材料
[0057] 1.1超纯水；
[0058] 1.2乙腈:色谱纯；
[0059] 1.3甲酸:色谱纯；
[0060] 1.4 0.1%甲酸溶液:准确移取1.011^甲酸，用水定容至1 000111匕
[0061 ] 1.5标准品:信息见表4。
[0062] 表4标准品信息 Luu〇4」 Z、仪益和段亩
[0065] 2.1在线净化-液相色谱-质谱/质谱仪，配有电喷雾离子源；
[0066] 2.2均质器；
[0067] 2.3离心机。
[0068] 3、测定步骤
[0069] 3.1样品前处理
[0070] 称取l.OOg样品，置入50mL塑料离心管中，加入约20mL水浸泡30min，均质后加入 20mL乙腈和约4g氯化钠，祸旋3min，离心，取上层溶液约lmL过膜，供在线净化，液相色谱-质 谱/质谱仪测定。
[0071] 3.2在线净化和测定
[0072] 由于测试条件取决于所使用的仪器，因此不可能给出色谱分析的普遍参数。采用 下列操作条件已被证明对测试是合适的。
[0073] 3.2.1在线净化条件
[0074] a)在线净化柱：Cyclone-P，50mm X 0 · 5mm，60ym;
[0075] b)流动相:水+乙腈，梯度上样洗脱条件见表1;
[0076] c)进样量：10yL。
[0077] 3.2.2液相色谱条件
[0078] a)色谱柱:C18，150mmX4.6mm(内径），5μηι;
[0079] b)流动相：乙腈+0.1 %甲酸溶液，梯度洗脱条件见表2;
[0080] 。)柱温:20°(3。
[0081 ] 3.2.3质谱条件
[0082] a)离子源：电喷雾离子源；
[0083] b)扫描方式:正离子扫描；
[0084] c)检测方式:多反应监测；
[0085] d)电喷雾电压：3 200V;
[0086] 6)离子源温度：300。〇；
[0087] f)鞘气压力：5〇Arb;
[0088] g)辅助气压力：20Arb;
[0089] h)毛细管温度:270°C;
[0090] i)碰撞气压力：1 · 5mTorr;
[0091 ] j)鞘气、辅助气均为高纯氮气;碰撞气为高纯氩气。
[0092] k)监测离子对及碰撞能量见表3。
[0093] 3.2.4空白试验
[0094] 除不加试样外，均按上述步骤进行。
[0095] 4、结果计算和表述
[0096] 按公式(2)计算试样中吡虫啉或吡蚜酮的残留量： ^ CV
[0097] !=.^. · · · ? ?'? · · ? ?'? ?'?'·''·'·'?'· · · C2)
[0098] 式中：
[0099] X-试样中吡虫啉或吡蚜酮的含量，单位为毫克每千克；
[0100] C-由标准工作曲线得到样液中吡虫啉或吡蚜酮的浓度，单位为微克每毫升；
[0101] v-样液最终体积，单位为毫升；
[0102] m-最终样液所代表的试样量，单位为克。
[0103] 5、方法检出限
[0? 04]本发明方法对于菊花中R比虫啉和R比姐酮的检出限均为0.0 lmg/kg。
[0105] 6、方法的回收率和精密度
[0106] 本方法回收率实验设定了三个添加浓度，按本方法所确定的实验条件，对每个添 加浓度进行6次实验，回收率及精密度结果见表5。
[0107] 表5回收率及精密度试验(n = 6)
[0108]
[0109] 7、结论
[0110] 综合上述情况，本发明方法的回收率、检出限和精密度等各项技术指标均符合要 求，方法应用于菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的检测，重现性良好。本发明建立的检验方法 操作简便、结果准确。
【主权项】
1.在线净化-液相色谱-质谱/质谱法测定菊花中化虫嘟和化晒酬残留量的方法，其特 征在于该方法包括W下的步骤： 1) 试样处理:称取1. OOg样品，置入50mL塑料离屯、管中，加入约20mL水浸泡30min，均质 后加入20mL乙腊和约4g氯化钢，满旋3min，离屯、，取上层溶液约ImL过膜，在线净化，液相色 谱-质谱/质谱仪测定； 2) 净化:采用在线净化，条件为： a) 在线净化柱：切C lone-P，50mm X 0.5mm，60 皿； b) 流动相：水+乙腊，梯度上样洗脱；梯度上样洗脱条件如下，水和乙腊的比例为体积 比：C)进样量 3) 测定:采用液相色谱-质谱/质谱法，其中： 液相色谱条件为： a) 色谱柱:C18，150mmX4.6mm(内径），5皿； b) 流动相：乙腊+0.1 %甲酸溶液，梯度洗脱;梯度洗脱条件如下，其中乙腊和0.1 %甲酸 的比例为体积比：(3)柱溫:20°〇; 质谱条件为： a) 离子源：电喷雾离子源； b) 扫描方式:正离子扫描； C)检测方式:多反应监测； d) 电喷雾电压:3200V; e) 离子源溫度:300°C; f) 銷气压力:50Arb; g) 辅助气压力:20Arb; h) 毛细管溫度:270°C; i) 碰撞气压力：1 .SmTorr; j) 銷气、辅助气均为高纯氮气;碰撞气为高纯氣气； k) 监测离子对及碰撞能量如下：4) 空白试验 除不加试样外，均按上述步骤2)~3)测定步骤进行； 5) 结果计算和表述 按公式(1)计算试样中化虫嘟或化晒酬的残留量：式中： X-试样中化虫嘟或化晒酬的含量，单位为毫克每千克； C-由标准工作曲线得到样液中化虫嘟或化晒酬的浓度，单位为微克每毫升； V-样液最终体积，单位为毫升； m-最终样液所代表的试样量，单位为克。
【专利摘要】本发明涉及一种菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的测定方法，尤其是涉及一种通过在线净化-液相色谱-质谱/质谱法对菊花中吡虫啉和吡蚜酮进行定量检测的方法。在线净化-液相色谱-质谱/质谱法测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的方法，该方法称取1.00g样品，置入50mL塑料离心管中，加入约20mL水浸泡30min，均质后加入20mL乙腈和约4g氯化钠，涡旋3min，离心，取上层溶液约1mL过膜，在线净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定。本发明的测定方法采用在线净化-液相色谱-质谱/质谱法测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮的残留量，方法简便、快速、准确、可靠，检测限、回收率和精密度均符合要求。
【IPC分类】G01N30/28, G01N30/02
【公开号】CN105548398
【申请号】CN201511009415
【发明人】黄超群, 谢文, 蒋沁婷, 李慧思, 楼成杰, 吴娟, 黄雷芳
【申请人】浙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2015年12月28日