一种液态乳中酵母β-葡聚糖的提取方法及含量测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种食品中酵母目-葡聚糖的提取方法及含量测定方法，尤其适用于 液态乳中酵母目-葡聚糖的提取和测定。
【背景技术】
[0002] 酵母目-葡聚糖是W酿酒酵母为原料，经提取、酸碱处理、喷雾干燥等步骤生产而 成，分子量为2万至400万道尔顿，分子式为（C化2〇6)η，其中η=125-25000。大量研究证明， 酵母目-葡聚糖具有增强免疫、抗福射与降血脂功能，送使得酵母目-葡聚糖在食品行业有 了更为广泛的应用前景。
[0003] 目前，酵母目-葡聚糖的测定方法多采用苯酪-硫酸法，但该法精密度较差，并且 不适合测定液态乳制品中的酵母目-葡聚糖。液态乳制品的成分比较复杂，且含有大量蛋 白质，直接测定的结果准确性较差并可对仪器造成不良影响。较为理想的方案是先提取液 态乳中的酵母目-葡聚糖，再对酵母目-葡聚糖的含量进行测定。现有的提取方法是用蛋 白沉淀剂(例如己酸锋和亚铁氯化钟）将液态乳中的蛋白质沉淀，取上清液进行测定；该方 法的缺点是：易造成目-葡聚糖的回收率低；此外，盐析沉淀蛋白方法中，乳糖和其他多糖 添加剂对离子色谱测定有干扰，影响目-葡聚糖的测定。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种液态乳中酵母目-葡聚糖的提取方法，可降低提取过程 中酵母目-葡聚糖的损失。
[0005] 本发明的另一个目的是提供一种液态乳中酵母目-葡聚糖的含量测定方法，其回 收率和精密度较高。
[0006] 本发明提供了一种液态乳中酵母目-葡聚糖的提取方法，包括；a、取25克液态乳， 加入碱性蛋白酶0. 03至0. 1U和中性蛋白酶0. 01至0. 05U，充分振荡混合后于40至6(TC 水浴加热2至4小时，得到水解液；b、将水解液振荡混合均匀后，于5000至6000转/分钟 离必15至20分钟，去掉上清液，保留沉淀物及上层脂肪；C、向步骤b得到的沉淀物和上层 脂肪中加入60至10(TC的去离子水15至3〇111以振荡混合均匀后，于5000至6000转/分钟 离必15至20分钟，去掉上清液及上层脂肪，保留沉淀；W及t将步骤C中得到的沉淀用水 清洗一至两次，得到提取物；用水清洗的方法为；加入60至10(TC的去离子水15至30mU振 荡混合均匀后，于5000至6000转/分钟离必15至20分钟，去掉上清液，保留沉淀。
[0007] 在液态乳中酵母目-葡聚糖的提取方法的一种示意性实施方式中，还包括将步骤 d得到的提取物冷冻干燥。
[000引本发明还提供了一种液态乳中酵母目-葡聚糖的含量测定方法，包括先通过上述 的液态乳中酵母目-葡聚糖的提取方法，提取待测液态乳中的酵母目-葡聚糖，再测定提取 产物中酵母目-葡聚糖的含量。
[0009] 在液态乳中酵母目-葡聚糖的含量测定方法的一种示意性实施方式中，测定方法 包括；通过上述的提取方法，提取待测液态乳中的酵母目-葡聚糖；将提取后得到的产物用 溶壁酶、1,6-葡聚糖酶、外切-目-葡聚糖酶和目-葡萄糖巧酶水解，使酵母目-葡聚糖全 部水解成葡萄糖，得到待测液；W及测定待测液中葡萄糖的含量，并计算待测液态乳中酵母 目-葡聚糖的含量。
[0010] 在液态乳中酵母目-葡聚糖的含量测定方法的一种示意性实施方式中，测定待测 液中葡萄糖的含量的方法为G0P0D法。
[0011] 在液态乳中酵母目-葡聚糖的含量测定方法的一种示意性实施方式中，G0P0D法 的步骤包括；向待测液中加入3 mL G0P0D溶液，4(TC水浴中保持20分钟；最后冷却至室温 并在51 Onm下测定吸光度值。
[0012] 在液态乳中酵母目-葡聚糖的含量测定方法的一种示意性实施方式中，测定待测 液中葡萄糖的含量的方法为高效液相色谱法。
[0013] 在液态乳中酵母目-葡聚糖的含量测定方法的一种示意性实施方式中，高效液相 色谱法的条件为：色谱柱；Dionex CarboF^ac ΡΑΙΟ 4X250 mm,带 CarboF^ac ΡΑΙΟ 4X50 mm保护柱；流动相；A为超纯水，电阻率> 18. 2ΜΩ ;B为0. 25 mol/L氨氧化钢溶液；C为 1 mol/L己酸钢溶液；检测器读培检测器；Au工作电极；Ag/AgCl参比电极；检测池温度 3(TC ;糖采用积分安培模式检测，波形选择碳水化合物标准四电位；流速；1. 0 mL/min ;柱 温；30 °C进样量；25 μ L ; 淋洗梯度见下表;_
安培检测器检测糖波形参数；I I_^
阳014] 本发明提供的液态乳中酵母目-葡聚糖的提取方法，采用蛋白酶水解去除液态乳 中的蛋白质，有效降低了酵母目-葡聚糖在提取过程中的损失；并且在提取过程中去除了 对测定有干扰的乳糖。使用该提取方法对液态乳中酵母目-葡聚糖进行测定，测定回收率 和精密度较高。
【具体实施方式】
[0015] 为了对发明的技术特征、目的和效果有更加清楚的理解，现结合W下实施例说明 本发明的【具体实施方式】。
[0016] 本发明中"U"，即活力单位，在最适条件（25to下，每分钟内催化1微摩尔（μ mol) 底物转化为产物所需的酶量定为一个活力单位。
[0017] 提取例1 ;液态乳中酵母目-葡聚糖的提取方法。
[0018] 曰、取25克液态乳，加入碱性蛋白酶0. 04 U和中性蛋白酶0. 03U，充分振荡混合后 于4(TC水浴加热2小时，得到水解液； K将水解液振荡混合均匀后，于5000转/分钟离必15分钟，去掉上清液，保留沉淀物 及上层脂肪； C、向步骤b得到的沉淀物和上层脂肪中加入60°C的去离子水15 mU振荡混合均匀后， 于5000转/分钟离必15分钟，去掉上清液及上层脂肪，保留沉淀； d、 将步骤C中得到的沉淀用水清洗一至两次，得到提取物；用水清洗的方法为；加入 6(TC的去离子水15 mU振荡混合均匀后，于5000转/分钟离必15分钟，去掉上清液，保留 沉淀； e、 将步骤d得到的提取物冷冻干燥，冷冻干燥的温度为-47°C，得到干燥后提取物。
[001引提取例2 ;液态乳中酵母目-葡聚糖的提取方法。
[0020] 曰、取25克液态乳，加入碱性蛋白酶0. 0抓和中性蛋白酶0. 01 U，充分振荡混合后 于55°C水浴加热2. 5小时，得到水解液； K将水解液振荡混合均匀后，于5500转/分钟离必17分钟，去掉上清液，保留沉淀物 及上层脂肪； C、向步骤b得到的沉淀物和上层脂肪中加入8(TC的去离子水20 mU振荡混合均匀后， 于5500转/分钟离必17分钟，去掉上清液及上层脂肪，保留沉淀； t将步骤C中得到的沉淀用水清洗一至两次，得到提取物；用水清洗的方法为；加入 8(TC的去离子水20mU振荡混合均匀后，于5500转/分钟离必17分钟，去掉上清液，保留沉 淀； e、将步骤d得到的提取物冷冻干燥，冷冻干燥的温度为-47°C，得到干燥后提取物。
[0021] 提取例3 ;液态乳中酵母目-葡聚糖的提取方法。
[0022] 曰、取25克液态乳，加入碱性蛋白酶0. 1U和中性蛋白酶0. 05U，充分振荡混合后于 6(TC水浴加热4小时，得到水解液； K将水解液振荡混合均匀后，于6000转/分钟离必20分钟，去掉上清液，保留沉淀物 及上层脂肪； C、向步骤b得到的沉淀物和上层脂肪中加入10(TC的去离子水30 mU振荡混合均匀 后，于6000转/分钟离必20分钟，去掉上清液及上层脂肪，保留沉淀； t将步骤C中得到的沉淀用水清洗一至两次，得到提取物；用水清洗的方法为；加入 l〇(TC的去离子水30mU振荡混合均匀后，于6000转/分钟离必20分钟，去掉上清液，保留 沉淀； e、将步骤d得到的提取物冷冻干燥，冷冻干燥的温度为-47°C，得到干燥后提取物。