一种3-氨基哌啶异构体的hplc检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种3-氨基哌啶异构体的HPLC检测方 法。
【背景技术】
[0002] (R)-3_氨基哌啶是Π型糖尿病新药利拉利汀、阿格列汀的重要中间体。利拉利汀、 阿格列汀分子结构中只有一个手性中心，由中间体(R)-3_氨基哌啶引入，因此（R)-3_氨基 哌啶的光学纯度直接决定了利拉利汀、阿格列汀的光学纯度和药效。
[0003] 王灿辉等(CN103435538 B)采用3-氨基哌啶的1，3位氮上分别用叔丁氧羰基取代， 采用chiralpark AD-H 4.6 X250手性色谱柱在215nm对其进行分析，流动相为正己烧，流速 1.0 mL/min，保留时间未报道。孙凤霞等（CN104007202A CN104034814A)采用苯甲酰氯为衍 生化试剂对3-氨基哌啶分别进行单衍生化和双衍生化，使用CHIRAL-AGP(150 X 4.6mm)手性 柱，在254nm下对衍生物进行分析。Watanabe等人（Tetsuya Assignee Sumitomo Chemical Co.,Ltd., Japan 2009)米用氯甲酸丙酯为衍生化试剂对3-氨基哌啶进行衍生，米用 CHIRALCEL AS-RH (150X4.6mm)手性柱在254nm下对衍生物进行分析，其流动相组成为 70:30(V:V)的水：乙腈，流速1 .OmL/min，（S)-衍生物19. lmin出峰，（R)-衍生物31.5min出 峰。所需检测时间过长及手性柱价格昂贵。Meek等(W02011160037)采用Crownpak? CR+(150 X4.6 mm)手性柱，示差折光检测器直接对3-氨基哌啶进行检测，其流动相为95 :5(V:V)的 HCKk (pH=l) : MeOH，柱温0°C，流速0.6mL/min，（S)-3_氨基哌啶3.0min出峰，（R)-3_氨基 哌啶3.7min出峰。但实际上示差折光检测器对分析的样品量要求很大，误差大，手性柱价格 昂贵。。而通过与带紫外吸收的手性试剂进行快速衍生化，得到既有紫外吸收又形成两个手 性基团的衍生物，能够直接在反相高效液相与紫外联用上进行异构体的分析。
[0004] 相比示差折光检测器，紫外检测器具有更高的灵敏度和稳定性。但由于3-氨基哌 啶及其手性异构体紫外吸收很弱，使用常规的紫外检测存在末端吸收干扰等问题，采用衍 生化方法使之紫外吸收增强从而提高检测灵敏度，再通过反相液相色谱进行分析检测。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种3-氨基哌啶异构体的HPLC检测 方法，使用普通C18柱，可以快捷准确的实现定性、定量和对映体过量率分析。
[0006] 为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下： 一种3-氨基哌啶异构体的HPLC检测方法，具体包含如下步骤： 步骤一、衍生化 将3-氨基哌啶溶于有机溶剂中，在一定的温度条件下，以(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯为衍 生化试剂，控制3-氨基哌啶和(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯的摩尔比，进行单衍生化反应，得到 衍生化后的3-氨基哌啶，反应式见式I;
步骤二、分离检测 采用反相高效液相色谱-紫外检测器对衍生化后的3-氨基哌啶进行定性、定量和对映 体过量率测定。
[0007] 所述的有机溶剂选自氯仿、四氯化碳、石油醚、甲苯、四氢呋喃、二氯甲烷和己烷中 的一种或两种以上的组合。
[0008] 所述的有机溶剂与3-氨基哌啶的体积比为1~300:1，优选的为5~20:1。
[0009] 所述低温条件下指反应温度为-20°020°C，优选的为_5°05°C。
[0010] 所述的3-氨基哌啶和(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯的摩尔比为1:0.5~1。
[0011] 所述的紫外检测器的检测波长为210~300nm，优选220~260nm。
[0012] 所述的所述的高效液相使用的色谱柱是普通反相柱，优选的色谱柱为反相C18柱。
[0013] 所述的反相高效液相色谱的流动相由缓冲盐溶液和有机溶剂组成，有机溶剂选自 甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、四氢呋喃、丙酮和乙腈中的一种或两种以上;有机溶剂占流动 相的体积比例范围为20%~80%，优选30%~50%。
[0014] 所述的流动相缓冲盐选自磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾和磷酸二氢钾中 的一种或两种，所述缓冲盐溶液的质量体积浓度为〇. 01%~10%，优选〇. 1%~1%。
[0015] 所述缓冲盐溶液的pH值为2 · 0~7 · 0，优选3 · 0~5 · 0。流动相流速在0 · 2~3 · OmL/min， 优选 1 · 0mL/min〇
[0016] 本发明中，反相高效液相色谱分析条件优选为： 液相色谱条件:迪马1代C18色谱柱，流动相为40%乙腈_60%(0.1%磷酸二氢钠)水溶液， pH值为4.5，紫外检测波长为254nm，流速为1. OmL/min，柱温为30°C，进样体积20yL。与现有 技术相比，本发明所取得的有益效果如下： 本发明提供一种衍生化方法，利用反相高效液相色谱与紫外联用对衍生化的3-氨基哌 啶进行异构体分析，并建立了对(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯和3-氨基哌啶衍生物的对应异构 体测定的高效液相色谱分析方法。通过对(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯和3-氨基哌啶衍生物异 构体分析，从而实现对3-氨基哌啶的异构体分析。
【附图说明】
[0017] 图l:(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-3-氨基哌啶衍生化后色谱图； 图2:(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与(R)-3_氨基哌啶衍生化后色谱图； 在附图中：1为(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与(R)-3_氨基哌啶的衍生物;2为(R)-a-甲基_ 2-萘乙酰氯-和(S) -3-氨基哌啶的衍生物。
【具体实施方式】
[0018] 以下结合附图和具体实施例对本发明进行进一步详细的叙述。
[0019] 实施例1: (R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-3_氨基哌啶衍生化的液相色谱分析 (l)(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-3-氨基哌啶衍生化的液相色谱分析 称取混旋(RS)-3-氨基哌啶3.09g(0.03mo 1)，溶于40mL石油醚中，在5°C下搅拌，缓慢滴 加(R)-a-甲基-萘基乙酰氯6.148(0.03111 〇1)。11(：监测反应，反应结束后蒸干溶剂得(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-3_氨基哌啶衍生物。
[0020] 将(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与（RS)-3-氨基哌啶的衍生物用流动相溶解后采用高 效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件:迪马1代C18色谱柱，流动相为40%乙腈_60%(0.1% 磷酸二氢钠)水溶液，pH值为4.5，紫外检测波长为254nm，流速为1. OmL/min，柱温为30°C，进 样体积20yL。其图谱见图1。
[0021] (2)(R)-a-甲基-萘基乙酰氯与(R)-3_氨基哌啶衍生化的液相色谱分析 称取(R)-3-氨基哌啶3.09g(0.03mo 1)，溶于40mL石油醚中，在5 °C下搅拌，缓慢滴加 (R)-a-甲基-萘基乙酰氯6.148(0.03!11〇1)。孔(：监测反应，反应结束后蒸干溶剂得(R)-a-甲 基 -萘基乙酰氯与(R)_3_氨基哌啶衍生物。
[0022]将(R)-a-甲基-萘基乙酰氯与(R)-3_氨基哌啶的衍生物用流动相溶解后采用高效 液相色谱进行检测分析。液相色谱条件:迪马1代C18色谱柱，流动相为40%乙腈_60%(0.1%磷 酸二氢钠)水溶液，pH值为4.5，紫外检测波长为254nm，流速为1. OmL/min，柱温为30 °C，进样 体积20yL。其图谱见图2。
[0023]表一（R)-a-甲基-萘基乙酰氯与3-氨基哌啶衍生化物定性分析
实施例2 ::3_氨基哌啶和(R)-a-甲基-萘基乙酰氯的衍生化条件考察 2-1: (R)-a-甲基-萘基乙酰氯与(RS)-3_氨基哌啶衍生化的液相色谱分析 称取(RS)-3-氨基哌啶3.09g(0.03mol)，溶于40mL四氢呋喃中，在5°C下搅拌，缓慢滴加 (R)-a-甲基-萘基乙酰氯4.09 8(0.02!11〇1)。孔(：监测反应，反应结束后蒸干溶剂得(1〇-€[-甲 基 -萘基乙酰氯与(RS)-3-氨基哌啶衍生物。
[0024]将(R)-a-甲基-萘基乙酰氯与（RS)-3_氨基哌啶的衍生物用流动相溶解后采用高 效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件:迪马1代C18色谱柱，流动相为40%乙腈_60%(0.1% 磷酸二氢钠)水溶液，pH值为4.5，紫外检测波长为254nm，流速为1. OmL/min，柱温为30°C，进 样体积20yL，保留时间和手性e. e. %值同实施例1 -1。
[0025] 2-2: (R)-a-甲基-萘基乙酰氯与(RS)-3_氨基哌啶衍生化的液相色谱分析 称取混旋(RS)-3-氨基哌啶3.09g(0.03mo 1)，溶于40mL石油醚中，在5°C下搅拌，缓慢滴 加(R)-a-甲基-萘基乙酰氯3.078(0.015111〇1)。11(：监测反应，反应结束后蒸干溶剂得(R)-a-甲基-萘基乙酰氯与(RS)-3_氨基哌啶衍生物。
[0026]将(R)-a-甲基-萘基乙酰氯与（RS)-3_氨基哌啶的衍生物用流动相溶解后采用高 效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件:迪马1代C18色谱柱，流动相为40%乙腈_60%(0.1% 磷酸二氢钠)水溶液，pH值