I mm i. d. X50 mm，L 7 μm);柱温： 50 °C ;样品池温度：10 °C ;进样体积：5 μ L ;流速：0. 3 mL/min ;流动相：A液为甲醇-乙 腈混合液（1 :1，v/V)，B液为超纯水，等度洗脱（A:B=80:20)。质谱参考条件：离子源为电 喷雾电离ESI (_)。检测方式为MRM。反吹气温度（Gas Temp)为325 °C;反吹气流量（Gas Flow)为 6 L/min;压力（Nebulizer)为 42 psi;鞘气温度（Sheath Gas Temp)为 380 °C; 鞘气流量（Sheath Gas Flow)为11 L/min;毛细管电压（Capillary)为4000 V ;喷嘴电压 (Nozzle Voltage)为1500 V ;监测离子、碰撞能量和锥孔电压(见表1)。
[0051] 表1六溴环十二烷和四溴双酚A的多反应离子监测分析参数
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[0053] 3.3.2 标准曲线绘制
[0054] 吸取标准系列溶液各5 μ L进样，以标准系列溶液中目标化合物浓度为横坐标，目 标化合物与相应内标物峰面积比为纵坐标，绘制标准曲线，并按下式计算平均相对响应因 子：
[0055] 式中：
[0056] /-平均相对响应因子；
[0057] a?,_标准溶液中内标物绝对质量ng ;
[0058] 死-标准溶液中待测物绝对质量ng ;
[0059] 待测物峰面积；
[0060] 為-内标物峰面积；
[0061] 计算结果表示到三位有效数位。
[0062] 3. 3. 3 试样测定
[0063] 吸取油脂类食品净化后试样5 UL进样，记录总离子流图及待测物和内标的峰面 积，以保留时间及碎片离子的丰度定性，要求所检测的待测物色谱峰信噪比（S/N)大于3; 待测物相应监测离子的丰度偏差不超过标准溶液中相应离子丰度的20%。
[0064] 4 结果
[0065] 4. 1计算公式
[0066] 按下式由内标法计算试样中各待测物的浓度：
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[0068] 式中：
[0069] 试样中待测物的含量ng/g (以脂肪计）；
[0070] 死-试样中内标物的绝对质量ng ;
[0071] /_平均相对响应因子；
[0072] 待测物的峰面积；
[0073] 為-内标峰面积；
[0074] 所取样品脂肪重量g ;
[0075] 计算结果表示到三位有效数位。
[0076] 4. 2线性范围
[0077] 以 5. 0、10. 0、50· 0、250· 0、500· 0 ng/mLHBCDs 与 TBBPA 混合标准溶液进样，根据待 测物和内标的峰面积比（_r)和对应的标准溶液中待测物的质量（X)进行线性回归，得出线 性方程为：TBBPA =0· 10141+0. 0937 ;相关系数：夕=0· 9985 ; a -HBCD = 4· 2120x - 2. 3245 ;相关系数：夕=0· 9999 ; β -HBCD =0· 4624x - 0· 5896 ;相关系数：夕=0· 9995 ; γ -HBCD =0· 1927χ +0· 0512 ;相关系数：夕=0· 9989。
[0078] 4. 3标准曲线的相对响应因子
[0079] 计算线性曲线图中每个点上的相对响应因子猫y得出平均相对响应因子（见表 2)，计算公式如下：
[0081] 公式中：&定量内标的质量；
[0082] 目标化合物的质量；
[0083] 目标化合物的峰面积；
[0084] 定量内标的峰面积。
[0085] 表2 HB⑶s与TBBPA混合标准系列溶液相对响应因子
[0087] 4. 4检出限与定量限
[0088] 检测限根据对基质空白的测定确定噪声，以3倍噪声峰高对应的浓度为检测限 (LOD)。计算公式如下：
[0090] 式中，噪音峰高，本试验Λ值为1 ;馬-加入定量内标的量；
[0091] ，定量内标的峰高；S-脂肪重量；
[0092] 而以10倍噪声峰高对应的浓度为定量限（LOQ)。计算公式如下：
[0094] 取5g冻干好的肉制样品（经检测确定不含TBBPA和HB⑶s的鱼肉样品）作为不含 目标物的基质样，加入20 ng内标（同位素内标混合标准应用溶液B 200 yL)，按前述3.2 样品提取方法提取并净化处理后，上机测定（三组平行，取平均值）。结果如表3所示。确 定HB⑶三种异构体a -HB⑶、β -HB⑶和γ -HB⑶的检测限和定量限分别为0. 030、0. 100 ng/g，0. 008、0· 032 ng/g，0. 016、0· 053ng/g(以脂肪计）JBBPA的检测限和定量限分别为 0·027、0·087 ng/g (以脂肪计）。
[0095] 表3检测限和定量限测定结果（ng/g，以脂肪计）
[0097] 4. 5回收率与精密度
[0098] 采用市售的金龙鱼植物油为空白基质，在样品中添加低、中、高三个不同质量浓度 的标准溶液进行UPLC-MS/MS分析，每个添加水平平行测定6次。回收率表示方法的可行性， 以相对标准差（RSD)表示方法的重现率即精密度，结果见表4。结果显示三种HBCD与TBBPA 的平均回收率在89. 4%-113. 2%之间，RSD范围为6. 02%-11. 01%之间。表明该方法可行，且 精密度良好。
[0099] 表4 HB⑶s和TBBPA的回收率和精密度
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[0101] 4. 6样品验证试验
[0102] 为了验证方法在实际样品中的可行性，采用建立的方法，在鱼类、肉类、蛋类、乳类 这四种实际的空白样品（样品经测定不含目标物）中添加质量浓度为20 ng的标准溶液进 行UPLC-MS/MS分析，每个添加水平平行测定6次。以回收率表示方法的可行性，以相对标 准差（RSD)表示方法的重现性即精密度，结果见表5。结果显示三种HB⑶与TBBPA的平均 回收率在87. 5%-114. 4%之间，RSD范围为4. 73%-12. 34%之间，表明该方法可行，且精密度 良好。
[0103] 表5实际样品加标回收结果
[0105] 采用该方法对湖北地区采集的212份鱼、肉、蛋、奶等油脂类食品样品进行了检 测，通过方法空白的质量控制发现，该方法回收率和精密度良好。
[0106] 国际考核样品验证试验
[0107] 采用所建立的方法，测定了从挪威采购的鳟鱼肉（trout)样品，并用此方法测得 的样品值与2010年挪威公共卫生学院组织的食品中PCBs，PBDEs and HB⑶试验室间比对 试验得出的均值进行了比对。样品中α，β，γ-ΗΒ⑶、TBBPA及相应的同位素内标的色谱 图如图4所示。检测结果均以湿重计，结果如表6所示。采用本方法分析的结果与国际不 同试验室的均值相接近，说明本方法测定结果准确，该分析方法可行。但实测值均低于国际 均值，其原因可能是：同时分析两种物质时，前处理方法的目标物损失率较单独分析HBCDs 稍高。
[0108] 表6本方法实测值与2010年国际比对考核中鳟鱼样品均值的比较
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[0110] 实施例2不同净化方法的对比试验
[0111] 以下样品前处理方法和检测方法同实施例1，净化方法如下：
[0112] 方法1酸化硅胶柱净化法：于干净的固相萃取玻璃柱底部塞一小撮棉花，从下往 上依次倒入I cm的无水硫酸钠、5 g硅胶、15 g 44%酸化硅胶、5 g硅胶、I cm的无水硫酸 钠。用洗耳球轻震管壁以使填料表面水平，倒入正己烷排尽气泡，再用200 mL正己烷活化 柱子备用。
[0113] 44%酸化硅胶制备方法：称取活化好的硅胶逐步加入浓硫酸（硅胶与硫酸质量比 为44/56)，振摇过夜至无块状物。完成后装入磨口试剂瓶中，干燥器中保存。
[0114] 将提取的样品旋蒸至近干，用正己烷复溶，每次2~4 m