一种检测汞离子的适体试纸的制作方法
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及检测试纸技术领域，尤其涉及一种检测汞离子的适体试纸。
【背景技术】
[0002]重金属污染是影响我国可持续发展的重要环境问题之一，土壤重金属污染会影响农产品质量，尤其是一些具有生物富集效应的重金属可以通过食物链最终进入人体，威胁人体健康。其中汞是一种高毒性重金属元素，其可以通过摄食、呼吸和皮肤三种途径进入动物体内，对人类和动物的神经系统、生殖系统、肾脏和胎儿等产生毒性作用，并且在环境中的毒性、移动性及长期停留性使其分布遍布全球，甚至通过大气环流进入南北极区域，因此已经被多个国家列为优先污染物。
[0003]目前对于汞的测定方法一般常用的有原子吸收光谱、原子发射光谱、原子荧光光谱、电感藕合等离子体质谱等检测手段相，上述的分析方法需要昂贵的精密仪器和熟练的操作人员，对于实验室的要求很高，且远远满足不了现场检测的初步筛选，开发简便快速、便于携带的检测工具成为必然。
[0004]汞离子能特异地和两个胸腺嘧啶共价结合形成稳定结构，基于该原理可以建立汞离子核酸检测方法，但是现有的检测方法多是基于荧光信号转变，仍然不利于便携式操作。利用该原理将特异性汞离子核酸适体组装在胶体金试纸上，具有良好的应用前景。
【发明内容】
[0005]本实用新型要解决的技术问题是提供一种快速筛查水体中汞离子的适体试纸。
[0006]本实用新型采用如下技术方案:
[0007]本实用新型的检测汞离子的新型适体试纸是由底板、吸水垫、硝酸纤维膜、适体结合垫、样品吸液层组成；底板是长方形的平板，样品吸液层、适体结合垫、硝酸纤维膜、吸水垫依次顺序粘贴在底板上。硝酸纤维膜上设置有检测线。
[0008]其中，所述的结合垫处喷涂有结合了汞离子特异性适体与其互补序列组装的胶体金微粒聚集体，其中汞离子适体上修饰有生物素，其互补序列上修饰有荧光基团。该荧光基团做为检测该试纸有效性的依据，从而取消对照线。
[0009]其中，所述的检测线上喷涂有亲和素。
[0010]所述的汞离子特异性适体上修饰有生物素。
[0011]所述的互补序列上修饰有荧光基团。
[0012]本实用新型基于胶体金的层析原理:
[0013]当待测物中没有被检测的汞离子时，适体结合垫处的核酸-金标聚集体不能随溶液在硝酸纤维膜的介质中移动，因此硝酸纤维膜上不会呈现条带。
[0014]当待测物中存在被检测的汞离子时，适体结合垫处的核酸-金标聚集体中核酸适体与互补序列解链，聚集体解离形成分散的纳米颗粒，并随着汞离子的浓度增加，解链程度越多，分散的纳米颗粒随溶液在移动，硝酸纤维膜上呈现红色条带，显色程度与汞离子浓度在一定范围内呈正比。
[0015]适体试纸的使用方法:
[0016]1、备检样品、试纸条在使用前先平衡至室温；
[0017]2、将试纸条加热至90° C，保持3min;
[0018]3、吸取50 μ L备检样品滴加于样品吸液层，放于桌面计时；
[0019]4、加样后5min左右读取结果；
[0020]5、确定试纸是否有效，可将试纸置于荧光检测器中，未使用或无靶标物时，荧光聚集于适体结合垫处；样品中有靶标物时，荧光集团分布于试纸中适体结合垫至吸水垫区域内。
[0021]检测结果解释:
[0022]1、阳性:仅在检测线6出现一条红色条带，红色深浅在一定浓度范围内(l_20ppm)随着汞离子浓度增加，红色变深。出现红色条带初步判定检测样品中有汞离子。
[0023]2、阴性:在纤维素膜上未出现条带，初步判定检测样品中无汞离子。
[0024]3、无效:试纸上无焚光显示。
[0025]本实用新型的有益效果:本实用新型提供了一种检测汞离子的适体试纸，该试纸结构简单，制作简便，价格低廉，尤其是使用方便，检测快速，不需要专业检测人员，可用于初步判定。
【附图说明】
[0026]图1为本实用新型的结构示意图。
[0027]其中:1-底板、2-吸水垫、3-硝酸纤维膜、4-适体结合垫、5-样品吸液层、6-检测线。
【具体实施方式】
[0028]下面的结合实施例对本实用新型的做进一步详细描述。
[0029]实施例1
[0030]图1示出了本实用新型的检测汞离子的时间分辨荧光适体试纸的结构示意图。
[0031]该检测汞离子的适体荧光试纸，其包括依次顺序粘贴在底板1上的吸水垫2、硝酸纤维膜3、适体结合垫4、样品吸液层5，硝酸纤维膜3上的反应区设有检测线6。
[0032]具体地，结合垫4喷涂有结合了汞离子特异性适体与其互补序列组装的胶体金微粒聚集体，其中汞离子适体上修饰有生物素，其互补序列上修饰有荧光基团。
[0033]其中，汞离子适体固定在适体结合垫上，适体上修饰有亲和素可与检测线上的生物素结合。当样品中存在汞离子时，适体与汞离子结合，复性时不再与互补序列结合，聚集体解散成结合了适体的胶体金纳米颗粒，随溶液层析，与检测线上的生物素结合，则在检测线处显示红色条带，条带的深浅和浓度呈正比；不存在汞离子时适体和互补序列重新结合，继续以聚集体形式存在，不能层析移动，因此不显示条带，达到检测的目的。
[0034]汞离子适体直接合成，5'-AAATAGTCAGGGAACATGACAAACA-CAGGGACTTGCGAAAATCAGTGTTTTG-3'，5' 修饰亲和素，3' 连接胶体金。
[0035]实施例2
[0036]在实施例1的基础上，本实施例进一步提供检测汞离子适体试纸实施检测:
[0037]在野外取水样，低温保存，用于胶体金检测。
[0038]1、备检样品、试纸条在使用前先平衡至室温；
[0039]2、将试纸条加热至90° C，保持3min;
[0040]3、吸取50 μ L备检样品滴加于样品吸液层，放于桌面计时；
[0041]4、加样后5 min左右读取结果；
[0042]5、确定试纸是否有效，可将试纸置于荧光检测器中，未使用或无靶标物时，荧光聚集于适体结合垫处；样品中有靶标物时，荧光集团分布于试纸中适体结合垫至吸水垫区域内；
[0043]6、结果结果:检测线显红色为阳性结果；检测线不显示为阴性。
[0044]对于所属技术领域的技术人员而言，随着技术的发展，本实用新型构思可以不同方式实现。本实用新型的实施方式并不仅限于以上描述的实施例，而且可在权利要求的范围内进行变化。
【主权项】
1.一种检测汞离子的适体试纸，其特征在于:由底板、吸水垫、硝酸纤维膜、适体结合垫、样品吸液层组成；所述的底板是长方形的平板，样品吸液层、适体结合垫、硝酸纤维膜、吸水垫依次顺序粘贴在底板上，所述的硝酸纤维膜上设置有检测线，所述的适体结合垫上喷涂有结合了汞离子特异性适体与其互补序列组装的胶体金微粒聚集体，所述的检测线上喷涂有亲和素，所述的汞离子特异性适体上修饰有生物素，所述的互补序列上修饰有荧光基团D
【专利摘要】本实用新型公开了一种检测汞离子的试纸，该试纸是由底板、吸水垫、硝酸纤维膜、适体结合垫、样品吸液层组成；硝酸纤维膜上喷涂有检测线；结合垫处喷涂有结合了汞离子适体与其互补序列组装的胶体金微粒聚集体。该检测汞离子的适体试纸灵敏度高、操作简便快速、显示结果形象直观准确、价格低廉、易于大范围推广应用。
【IPC分类】G01N21/78, G01N21/64
【公开号】CN205003082
【申请号】CN201520681782
【发明人】王耘
【申请人】金陵科技学院
【公开日】2016年1月27日
【申请日】2015年9月6日