+ (干膏得率+最 高干膏得率）X0. 2X100。
[0047] 表3醇提工艺方差分析
[0048]
[0049] F0.05 (2, 6) = 5. 140
[0050] 直观分析结果显示三因素的主次关系为A>C>B，最佳的工艺搭配为A2C 3B2。由于因 素B、C的离差平方和均小于误差项因素D，故将其并入误差项计算。综合评价方差分析结 果表明，醇提过程中，乙醇浓度（A)为显著性影响因素，选择A 2，加醇量（B)、回流时间（C)无 显著性影响，加醇量（B)选择B2，从极差分析C 2与C3相差不大，二者均明显优于C1，从节省 时间和能源角度考虑，选择C 2 ;因此最佳提取工艺为A2C2B2，即8倍量70 %乙醇，提取两次， 每次lh。
[0051] 2、最佳条件验证
[0052] 称取1/10处方量的菟丝子等药材，按最佳工艺进行提取，试验结果见表4。
[0053] 表4醇提验证结果
[0055] (二）水提工艺的研究
[0056] 1、正交设计
[0057] 为优选最佳水提工艺，采用正交试验法考察浸泡时间、加水量、提取时间对处方君 药熟地黄中毛蕊花糖苷及干膏得率的影响。选用L9(34)正交表设计试验，各因素水平设计 表见表5〇
[0058] 表5水提工艺因素和水平
[0060] 按1/10处方称取熟地黄、山药、枸杞子药材，与醇提后干燥药渣混合后，按照正交 设计条件提取，试验结果见表6,方差分析结果见表7。
[0061 ] 表6 L9 (34)正交设计及实验结果
[0063] *注：毛蕊花糖苷转移率的权重系数为0. 6,干膏得率的权重系数为0. 4,综合评分 (M)=(毛蕊花糖苷转移率+最高毛蕊花糖苷转移率）X0. 6 X 100+(干膏得率+最高干 膏得率）X0. 4X100。
[0064] 表7水提工艺方差分析表
[0066] F0.05 (2, 4) = 6.940
[0067] 直观分析结果显示三因素的主次关系为B>C>A，最佳的工艺搭配为B3C1A 3。由于因 素A的离差平方和小于误差项因素D，故将其并入误差项计算。综合评价方差分析结果表 明，水提过程中，加水量（B)为显著性影响因素，选择B3，药材的浸泡时间（A)、提取时间（C) 无显著性影响，可根据生产实际情况适当调整。优选的工艺条件为浸泡30min，12倍量水， 提取两次，每次0. 5h。
[0068] 2、最佳条件验证
[0069] 按1/10处方称取熟地黄、山药、枸杞子药材，与醇提后干燥药渣混合后，按照正交 设计优选的条件提取，结果见表8。
[0070] 表8水提验证结果
[0071]
[0072] (三）醇沉工艺的研究
[0073] 苯酚-硫酸法测醇沉前后多糖含量，高效液相法测醇沉前后毛蕊花糖苷转移率， 烘干法测醇沉前后干膏得率，将三指标加权后综合评分，优选最佳醇沉工艺。
[0074] 1、多糖含量的测定
[0075] (1)样品制备
[0076] 取1个处方量菟丝子（粗粉）与山茱萸、牛膝，加8倍量70%乙醇提取2次，每次 1小时，药渣挥干后与另三位药合并，加12倍量水提取0. 5小时，2次，药液浓缩至Ig生药/ ml。各取20ml浓缩液，分别加95 %乙醇至乙醇浓度0 %、30 %、50 %、70 %，醇沉12小时后， 滤过，量取滤液体积，在滤液中加相应体积的95%乙醇，使滤液中乙醇浓度为80%，醇沉12 小时，滤过，取残渣加水溶解，超声20min，水浴助溶20min，离心，上清液加水定容至50ml， 稀释适当倍数，待测，平行3份。
[0077] (2)样品溶液多糖含量测定
[0078] 各精密吸取样品溶液2ml，精密加入5 %苯酚溶液Iml.摇匀，迅速精密加入硫酸 5ml，摇匀，放置10分钟后，40°C水浴中保温15分钟，取出，迅速冷却至室温，以相应的试剂 为空白，照紫外-可见分光光度法（附录VA).在490nm的波长处测定吸光度。
[0079] 结果见下表9。
[0080] 表9不同醇沉浓度多糖转移率考察结果（η = 3)
[0082] 2、毛蕊花糖苷转移率
[0083] 取1/10处方量菟丝子（粗粉）与山茱萸、牛膝，加8倍量70%乙醇提取2次，每次 1小时，药渣挥干后与另三位药合并，加12倍量水提取0. 5小时，2次。浓缩至Ig生药/ml。 各取20ml浓缩液，分别加95 %乙醇至乙醇浓度30 %、50 %、70 %，醇沉12小时后，滤过，滤 液水浴挥干后加流动相复溶后，测毛蕊花糖苷含量。
[0084] 表10不同浓度醇沉前后毛蕊花糖苷转移率（η = 3)
[0085]
[0086] 3、干膏得率
[0087] 取1/10处方量菟丝子（粗粉）与山茱萸、牛膝，加8倍量70%乙醇提取2次，每次 1小时，残渣挥干后与另三位药合并，加12倍量水提取0. 5小时，2次。浓缩至Ig生药/ml。 各取20ml浓缩液，分别加95 %乙醇至乙醇浓度30 %、50 %、70 %，醇沉12小时后，滤过，取 滤液测干膏得率。
[0088] 表11不同浓度醇沉前后干膏得率（η = 3)
[0090] 4、综合评价
[0091] 根据毛蕊花糖苷是熟地黄的有效成分之一，也是中国药典2010年版一部中熟地 黄项下的含量测定指标，多糖为活性成分，干膏得率是评价提取效率的直接手段，兼顾上述 三个关键指标加权后进行综合评分，多糖转移率的权重系数为〇. 4,毛蕊花糖苷含量的权重 系数为〇. 4,干膏得率的权重系数为0. 2,综合评分（M)=(多糖转移率+最高多糖转移 率）X 0· 4 X 100+ (毛蕊花糖苷含量+最高毛蕊花糖苷含量）X 0· 4 X 100+ (干膏得率+最 高干膏得率）Χ0. 2X100
[0092] 表12不同浓度醇沉前后综合评分结果
[0094] 随着醇沉浓度的增加，多糖含量减少，毛蕊花糖苷转移率增加，50%乙醇沉淀既可 以保留大部分多糖和毛蕊花糖苷，又可以有效的去除杂质，减少干膏得率。综合评分显示， 50%乙醇沉淀效果最佳。
[0095](四）制剂成型工艺研究 [0096] 1、炼条温度的优选
[0097] 炼条温度对丸剂成型影响较大，在室温下炼条时，软条粗糙，松散易断，随着机器 运转自身产热，所制软条趋于平滑，而后当机器自身温度过高时，软条质黏，不易切断，丸子 有拖尾现象，圆整度不佳。基于此，对炼条温度进行考察，结果见表13。
[0098] 表13炼条温度的优选
[0100] 结论：炼条温度过高或过低时，制丸工艺都会受到影响。只有当炼条温度控制在 35~45°C时，左归浓缩丸成型工艺才能顺利进行。
[0101] 2、稀释剂种类的优选
[0102] 对常用稀释剂进行筛选，使用淀粉、糊精、微晶纤维素、乳糖、PVP时，素丸能成型。 对稀释剂的不同加入量进行考察，优选不同稀释剂的最佳加入量，优选结果见表14。
[0103] 表14不同稀释剂优选结果
[0105] (1)不同处方左归丸吸湿率
[0106] 恒温30°C，将样品置于装有KNO3饱和溶液的干燥器中（RH90% ) 5小时，测定其平 均吸湿率，结果见表15。
[0107] 表15不同处方左归丸吸湿率
[0109] (2)不同处方左归丸溶散时限检查
[0110] 照2010版药典附录IA丸剂项下溶散时限检测方法，对5个处方的溶散时限进行 考察，结果见表16。
[0111] 表16不同处方左归丸溶散时限检查结果
[0112]
[0113] (3)综合评价
[0114] 从药辅比、素丸外观、吸湿率、溶散时限等方面分别对其评分，最佳者5分，最劣者 1分，对以上4指标的评分相加后得综合评分，选择评分最高的处方为最优处方。
[0115] 表17综合评价
[0117] 结论：不同处方左归丸均符合2010版药典规定。即微晶纤维素、乳糖、糊精、淀粉、 PVP-K30均可作为左归丸的稀释剂，但从稀释剂加入量、素丸外观、吸湿率、溶散时限等方面 综合评价，微晶纤维素为最佳稀释剂类型。
[0118] 3、崩解剂的优选
[0119] 含胶浓缩丸在长久储存过程中，可能会出现溶散时间延长的现象，为了使左归丸 长久储存但不影响其溶散时限，在处方中可加入适量的崩解剂。微晶纤维素：崩解剂= 10:1时，以素丸外观、溶散时限、吸湿率为指标，对崩解剂类型进行优选，结果见表18。
[0120] 表18崩解剂类型考察
[0122] 结论：制丸过程中加入CMS-Na、L-HPC、CMC_Na等三种崩解剂，丸子成型性好，达到 了减少溶散时限的目的，综合评价，CMC-Na为最佳崩解剂。
[0123] 4、稀释剂与崩解剂加入比优选
[0124] 崩解剂的加入可以减少溶散时限，但当崩解剂加入过量时，会影响丸剂成型，且所 得素丸吸湿率也显著增加。因此，有必要对崩解剂和稀释剂的比例进行考察。以素丸外观、 溶散时间、吸湿率为指标，对崩解剂与稀释剂的最佳加入比进行考察，结果见表19。
[0125] 表19崩解剂加入量考察
[0127] 结论：稀释剂：崩解剂=10:0~3时，素丸成型性佳，溶散时限与吸湿率均符合规 定。在稀释剂：崩解剂=10:2(即5:1)时，成型性最佳，缩短溶散时限的同时，对吸湿率影 响不大，为最佳比例。
[0128] (五）与左归颗粒比较
[0129] (1)吸湿率
[0130] 恒温30°C，将左归颗粒（包衣）和本发明的左归浓缩丸（未包衣）样品置于装有 不同饱和溶液的干燥器中5小时，测定其平均吸湿率，结果见表20。
[0131] 表20不同相对湿度下两剂型吸湿率比较（η = 3)
[0133] 与左归颗粒相比，卞〈0. 05有统计学差异，#P〈0. 01有显著性差异
[0134] 结果表明，相对湿度90%、96. 3%、100%时，P = 0.000,小于0.01，表明左归颗粒 与左归浓缩丸的在相对湿度90%、96. 3%、100%时吸湿率有显著性差异，即包衣后的左归 颗粒较左归浓缩素丸在高湿环境下，显著性更易吸湿。
[0135] (2)临界相对湿度
[0136] 研究表明，水溶性药物在相对湿度较低的环境下，几乎不吸湿，而当环境相对湿度 增大到一定值时