Vsig10l基因作为肺鳞癌转移诊治标志物的用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，具体地涉及VSIG10L基因在肺鳞癌转移的诊断、治疗中 的用途。
【背景技术】
[0002] 肺癌是严重威胁人类生命和健康的重大疾病。2011年世界卫生组织(WHO)国际癌 症研究机构IARC公布的2008全球统计资料结果显示:肺癌是发病率和死亡率都高居榜首的 恶性肿瘤。每年全球新发病例数160.8万，死亡病例数137.7万，占全部恶性肿瘤的12.7 %和 18.2%。美国癌症协会公布的统计结果显示:预计在2012年，美国新发肺癌病例数将达到 22.6万，因肺癌死亡病例数将达到16万。在我国，由卫生部主持的全国第三次死因回顾抽样 调查结果显示:肺癌为样本地区恶性肿瘤死亡原因之首，粗死亡率为30.83/10万，其中男性 41.34/10万，女性19.84/10万;在男性、女性中均为首位癌症死亡原因。随着全球老龄化的 加速和环境污染加剧等因素，肺癌发病必将继续呈上升趋势，因此，对肺癌的诊断治疗研究 的进展需求，必定越来越强烈。
[0003] 从病理上，肺癌可分为非小细胞肺癌(NSCLC，约占85%)和小细胞肺癌（SCLC，约占 15% )。其中，NSCLC主要由鳞癌(又称鳞状细胞癌或肺鳞癌）、腺癌(又称肺腺癌)和大细胞癌 组成。鳞癌和腺癌各占 NSCLC的40%。
[0004] 肺癌的发病较为隐匿，超过70%的患者在就诊时已发展至中晚期，失去了手术机 会。这也是肺癌疗效差，死亡率高的主要原因之一。因此，早期筛查、诊断成为防治肺癌的重 中之重。目前，临床所使用肺癌筛查诊断方法主要是胸部X射线检查、CT扫描等影像学技术。 虽然这些影像资料对诊断起着重要作用，但也存在很多局限性，例如假阳性率高，无法检出 隐性病灶、亚临床病灶和微小转移病灶。除此之外，对肺癌的诊断方法还包括支气管镜检 查、穿刺活检等有创操作，这类方法耗时长，增加患者痛苦。因此，寻找无创、无辐射、费用低 廉、诊断快速且敏感性、特异性均高的筛查、诊断方法，是目前癌症早期诊断的迫切需求。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种可用于肺鳞癌转移诊断的分子标志物。相比现有的肺 鳞癌转移的诊断方法，使用基因标志物来诊断肺鳞癌转移的具有及时性、特异性和灵敏性， 从而使患者在转移早期就能知晓疾病风险，针对风险高低，采取相应的预防和治疗措施。
[0006] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0007] 本发明提供了检测VSIG10L基因表达的产品在制备诊断肺鳞癌转移的工具中的应 用。
[0008] 进一步，所述检测VSIG10L基因表达的产品包括检测VSIG10L基因 mRNA水平的产 品、和/或检测VSIG10L蛋白水平的产品。
[0009] 进一步，所述检测VSIG10L基因表达的产品包括:通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫 检测、原位杂交或芯片检测VSIG10L基因表达以诊断肺鳞癌转移的产品。
[0010] 进一步，所述用RT-PCR诊断肺鳞癌转移的产品至少包括一对特异扩增VSIG10L基 因的引物;所述用实时定量PCR诊断肺鳞癌转移的产品至少包括一对特异扩增VSIG10L基因 的引物;所述用免疫检测诊断肺鳞癌转移的产品包括:与VSIG10L蛋白特异性结合的抗体； 所述用原位杂交诊断肺鳞癌转移的产品包括:与VSIG10L基因的核酸序列杂交的探针;所述 用芯片诊断肺鳞癌转移的产品包括:蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与VSIG10L 蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与VSIG10L基因的核酸序列杂交的探针。
[0011] 所述用实时定量PCR诊断肺鳞癌转移的产品至少包括的一对特异扩增VSIG10L基 因的引物如SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.4所示。
[0012] 所述检测VSIG10L基因表达的产品可以是检测VSIG10L基因表达的试剂、也可以是 包含所述试剂的试剂盒、芯片、试纸等，也可以是使用所述试剂的高通量测序平台。
[0013] 所述诊断肺鳞癌转移的工具包括但不限于芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平 台；高通量测序平台是一种特殊的诊断肺鳞癌转移的工具，随着高通量测序技术的发展，对 一个人的基因表达谱的构建将成为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正常人群的基因 表达谱，容易分析出哪个基因的异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知VSIG10L基因 的异常与肺鳞癌转移相关也属于VSIG10L基因的用途，同样在本发明的保护范围之内。
[0014] 本发明还提供了一种诊断肺鳞癌转移的工具，所述工具包括检测VSIG10L基因表 达的试剂;所述试剂包括检测VSIG10L基因 mRNA的引物和/或探针、检测VSIG10L蛋白的抗 体。
[0015] 所述工具包括但不限于芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台。
[0016] 其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片;所述基因芯片包括固相载体以及固定 在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测VSIG10L基因转录水平的针 对VSIG10L基因的寡核苷酸探针；所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体的 VSIG10L蛋白的特异性抗体;所述基因芯片可用于检测包括VSIG10L基因在内的多个基因 (例如，与肺鳞癌转移相关的多个基因）的表达水平。所述蛋白质芯片可用于检测包括 VSIG10L蛋白在内的多个蛋白质（例如与肺鳞癌转移相关的多个蛋白质）的表达水平。通过 将多个与肺鳞癌转移的标志物同时检测，可大大提高肺鳞癌转移诊断的准确率。
[0017] 其中，所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒;所述基因检测试 剂盒包括用于检测VSIG10L基因转录水平的试剂;所述蛋白免疫检测试剂盒包括VSIG10L蛋 白的特异性抗体。进一步，所述试剂包括使用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或 芯片方法检测VSIG10L基因表达水平过程中所需的试剂。优选度，所述试剂包括针对 VSIG10L基因的引物和/或探针。根据VSIG10L基因的核苷酸序列信息容易设计出可以用于 检测VSIG10L基因表达水平的引物和探针。
[0018] 所述试纸包括检测VSIG10L基因表达的试剂。
[0019] 所述高通量测序平台包括检测VSIG10L基因表达的试剂。
[0020] 与VSIG10L基因的核酸序列杂交的探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其 它衍生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结 合，任何长度都可以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针 的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度对 杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不 超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所述探针自身互补 序列最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。
[0021 ]进一步，所述VSIG10L蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述 VSIG10L蛋白的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰(例如，，嵌合抗 体、scFv、Fab、F(ab'）2、Fv等。只要所述片段能够保留与VSIG10L蛋白的结合能力即可。用于 蛋白质水平的抗体的制备时本领域技术人员公知的，并且本发明可以使用任何方法来制备 所述抗体。
[0022]在本发明的具体实施方案中，所述检测VSIG10L基因 mRNA的引物包括SEQ ID N0.3 和SEQ ID NO.4所示的引物对。
[0023]本发明还提供了 VSIG10L基因和/或其表达产物的抑制剂在制备治疗肺鳞癌转移 的药物中的应用。所述抑制剂包括抑制VSIG10L基因表达的试剂、和/或抑制VSIG10L基因表 达产物的试剂。
[0024] 进一步，所述抑制VSIG10L基因表达的试剂包括抑制基因转录的试剂、抑制基因翻 译的试剂;所述抑制VSIG10L基因表达产物的试剂包括抑制VSIG10L基因 mRNA的试剂、抑制 VSIG10L蛋白的试剂。所述抑制VSIG10L基因 mRNA的试剂包括抑制mRNA稳定性的试剂、抑制 mRNA翻译活性的试剂。所述抑制VSIG10L蛋白的试剂包括抑制VSIG10L蛋白稳定性的试剂、 抑制VSIG10L蛋白活性的试剂、抑制VSIG10L蛋白功能的试剂。
[0025] 进一步，抑制VSIG10L基因 mRNA的试剂包括针对VSIG10L基因 mR