Vsig10l基因作为肺鳞癌转移诊治标志物的用图_2

文档序号:9882414阅读:来源:国知局
NA的双链核糖核 酸;抑制VSIG10L蛋白功能的试剂包括VSIG10L抗原蛋白的肿瘤疫苗、抑制VSIG10L蛋白功能 的抗体。所述抗体可以是多克隆抗体,或是单克隆抗体。
[0026]在本发明的具体实施方案中,所述针对VSIG10L基因 mRNA的双链核糖核酸是 siRNA。为了确保VSIG10L基因能够被高效剔除或沉默,根据VSIG10L基因的mRNA序列设计了 siRNA特异性片段。siRNA的设计根据已发表的通用设计原则(Elbashir et.al 2001, Schwarz et.al 2003,Khvorova et.al 2003,Reynolds et.al 2004,Hsieh et.al 2004, Ui-Tei et.al 2004),通过在线工具完成设计,该在线工具为:siRNASelectionProgramof Whitehead Institute(BingbingYuan et.al 2004,http ://jura.wi.mit.edu/bioc/ siRNAext/)和BLOCK-iTTM RNAi Designer ofINVITR0GEN(winner of the 2004Frost& Sullivan Excellence in Research Award,https://rnaidesigner.invitrogen. com/ sirna/)。为了进一步提高siRNA片断的有效性,综合两个在线设计工具的优点来设计用于 筛选的siRNA片断。最后,通过同源性比对(NCBI BLAST)来过滤siRNA序列,以提高siRNA片 断的特异性并减少RNAi干扰的脱靶效应。
[0027] 优选地,所述siRNA的序列如SEQ ID N0.7和SEQ ID N0.8所示。
[0028] 本发明还提供了一种用于治疗肺鳞癌转移的药物组合物,所述药物组合物包括上 面所述的VS IG10L基因和/或其表达产物的抑制剂。
[0029] 本发明的药物组合物还包括药学上可接受的载体,其中该载体可为赋形剂、稀释 剂、增稠剂、填充剂、结合剂、崩解剂、润滑剂、油脂或非油脂的基剂、表面活性剂、悬浮剂、胶 凝剂、辅助剂、防腐剂、抗氧化剂、稳定剂、着色剂或香料其中之一或两者以上的混合。
[0030] 本发明的药物组合物可用于制造治疗肺鳞癌转移的药剂。
[0031 ]本发明的药物组合物,其中该哺乳动物可为人类病患。
[0032] 本发明的药物组合物可例如以口服、注射、涂抹或贴片其中之一方式给予至该人 类病患体内。
[0033] 本发明的药物组合物还可与其他治疗肺鳞癌转移的药物联用,多种药物联合使用 可以大大提到治疗的成功率。
[0034] 在本发明的上下文中,"VSIG10L基因"包括VSIG10L基因以及VSIG10L基因的任何 功能等同物的多核苷酸。VSIG10L基因包括与目前国际公共核酸序列数据库GeneBank中 VSIG10L基因(NC_000019.10)DNA序列具有70%以上同源性,且编码相同功能蛋白质的DNA 序列;
[0035] 优选地,VS IG10L基因的编码序列包括以下任--种DNA分子:
[0036] (1)序列表中SEQ ID N0· 1所不的DNA序列;
[0037] (2)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且编码相同功能蛋白质的DNA序列;
[0038] (3)与(1)或(2)限定的DNA序列具有70%、优选地,90%以上同源性,且编码相同功 能蛋白质的DNA分子。
[0039]在本发明的具体实施方案中,所述VSIG10L基因的编码序列是SEQ ID N0.1所示的 DNA序列。
[0040] 在本发明的上下文中,VSIG10L基因表达产物包括VSIG10L蛋白以及VSIG10L蛋白 的部分肽。所述VSIG10L蛋白的部分肽含有与肺鳞癌转移相关的功能域。
[0041 ] "VSIG10L蛋白"包括VSIG10L蛋白以及VSIG10L蛋白的任何功能等同物。所述功能 等同物包括VSIG10L蛋白保守性变异蛋白质、或其活性片段,或其活性衍生物,等位变异体、 天然突变体、诱导突变体、在高或低的严紧条件下能与VSIG10L的DNA杂交的DNA所编码的蛋 白质。
[0042]优选地,VSIG10L蛋白是具有下列氣基酸序列的蛋白质:
[0043] (1)由序列表中SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质;
[0044] (2)将SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺 失和/或添加且与SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列具有相同功能的由SEQ ID N0.2所示的氨 基酸序列衍生的蛋白质。取代、缺失或者添加的氨基酸的个数通常为1-50个,较佳地1-30 个,更佳地1-20个,最佳地1-10个。
[0045] (3)与SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列具有至少80%同源性(又称为序列同一性), 更优选地,与SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列至少约90%至95%的同源性,常为96%、97%、 98 %、99 %同源性的氨基酸序列构成的多肽。
[0046]在本发明的具体实施方案中,所述VSIG10L蛋白是具有SEQ ID N0.2所示的氨基酸 序列的蛋白质。
[0047]通常,已知的是,一个蛋白质中一个或多个氨基酸的修饰不会影响蛋白质的功能。 本领域技术人员会认可改变单个氨基酸或小百分比的氨基酸或对氨基酸序列的个别添加、 缺失、插入、替换是保守修饰,其中蛋白质的改变产生具有相似功能的蛋白质。提供功能相 似的氨基酸的保守替换表是本领域公知的。
[0048]通过添加一个氨基酸或多个氨基酸残基修饰的蛋白质的例子是VSIG10L蛋白的融 合蛋白。对于与VSIG10L蛋白融合的肽或者蛋白质没有限制,只要所得的融合蛋白保留 VSIG10L蛋白的生物学活性即可。
[0049] 本发明的VSIG10L蛋白也包括对SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的非保守修饰,只 要经过修饰的蛋白质仍然能够保留VSIG10L蛋白的生物学活性即可。在此类修饰蛋白质中 突变的氨基酸数目通常是10个或者更少,例如6个或者更少,例如3个或者更少。
[0050] 在本发明的上下文中,"诊断肺鳞癌转移"既包括判断受试者是否已经患有肺鳞癌 转移、也包括判断受试者是否存在患有肺鳞癌转移的风险。
[0051] 在本发明的上下文中,"治疗肺鳞癌转移"从疾病的状态变化来分,可以包括疾病 的缓解、疾病的完全治愈。
[0052]本发明的优点和有益效果:
[0053]本发明首次发现了 VSIG10L基因表达与肺鳞癌转移相关,通过检测受试者组织中 VSIG10L的表达,可以判断受试者是否患有肺鳞癌转移、或者判断受试者是否存在患有肺鳞 癌转移的风险,从而指导临床医师给受试者提供预防方案或者治疗方案。
[0054]本发明发现了一种新的分子标记物-VSIG10L基因,相比传统的检测手段,基因诊 断更及时、更特异、更灵敏,能够实现肺鳞癌转移的早期诊断,从而降低肺鳞癌转移的死亡 率。
【附图说明】
[0055]图1显示利用基因芯片检测VSIG10L基因在肺鳞癌组织中的表达情况;
[0056] 图2显示利用Western blot检测VSIG10L蛋白在肺鳞癌组织中的表达情况;
[0057] 图3显示利用QPCR检测肺鳞癌细胞中VSIG10L基因的表达;
[0058] 图4显示利用QPCR检测siRNA对VSIG10L基因表达的影响;
[0059] 图5显示利用Western blot检测siRNA对VSIG10L蛋白表达的影响。
[0060]具体的实施方式
[0061]下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本 发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条 件,例如Sambrook等人,分子克隆:实验室手册(New York:Cold Spring HarborLaboratory Press,1989)中所述的条件,或按照制造厂商所建议的条件。
[0062] 实施例1 VSIG10L基因的差异表达
[0063] 1、样本获取:40例肺鳞癌组织(包括20例有转移样本和20例无转移样本)上述样本 为肺鳞癌患者的手术切除标本。上述所有标本的取得均通过组织伦理委员会的同意。组织 样本的临床资料包括:性别、年龄、肿瘤大小、病理分级(Edmonson)、
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