将萃取液烘干后的残留物即生物胺用0.1M的盐酸溶解，每g水产品的盐酸使用量为1- 4ml; e将盐酸溶液加入质量百分比5%以上的氯化钠，并调节pH为11。
[0031] (2)在固相微萃取萃取头上浸涂一层衍生化试剂;衍生化试剂为氯甲酸异丁酯，为 了提高衍生化的效果，同时在衍生化试剂中加入异辛烷，氯甲酸异丁酯与异辛烷的重量比 为0.2:13; (3) 用步骤(2)处理后的萃取头直接衍生/萃取步骤（1)得到的生物胺稀溶液中的生物 胺，得到生物胺衍生物；将萃取头浸入生物胺稀溶液中进行同步衍生/萃取生物胺时，在 500-900rpm下搅拌60min;在将萃取头操作结束之后，去除萃取头上的水分； (4) 将步骤(3)得到的生物胺衍生物利用气相质谱进行分析； (5) 根据内标化合物校正峰面积后，建立生物胺含量与生物胺衍生物峰面积定量关系 的标准曲线； (6) 按照上述步骤(1)-(4)获得待测样品中生物胺衍生物的峰面积，根据步骤(5)生物 胺含量与生物胺衍生物峰面积的定量关系，计算得到水产品中生物胺的含量。
[0032] 实施例2: 一种水产品中生物胺的快速检测方法，具体包括以下步骤： (1)从水产品中萃取生物胺，并将其制备成生物胺稀溶液;该稀溶液是将萃取液得到的 生物胺采用盐酸溶解，并将该溶液调节pH为11; a将水产品匀浆后称取5g，用5wt%三氯乙酸提取生物胺，将提取液用5wt%的三氯乙酸稀 释至50mL，滤纸过滤； b采用正己烷对滤液进行除脂； c向萃取液中加入重量百分比为10%以上的氯化钠，调节pH为12，并用1:1的正丁醇-三 氯甲烷溶液萃取； d将萃取液烘干后的残留物即生物胺用0.1M的盐酸溶解，每g水产品的盐酸使用量为1- 4ml; e将盐酸溶液加入质量百分比5%以上的氯化钠，并调节pH为9。
[0033] (2)在固相微萃取萃取头上浸涂一层衍生化试剂;衍生化试剂为氯甲酸异丁酯，为 了提高衍生化的效果，同时在衍生化试剂中加入异辛烷，氯甲酸异丁酯与异辛烷的重量比 为 1:13; (3) 用步骤(2)处理后的萃取头直接衍生/萃取步骤（1)得到的生物胺稀溶液中的生物 胺，得到生物胺衍生物；将萃取头浸入生物胺稀溶液中进行同步衍生/萃取生物胺时，在 500-900rpm下搅拌30min;在将萃取头操作结束之后，去除萃取头上的水分； (4) 将步骤(3)得到的生物胺衍生物利用气相质谱进行分析； (5) 根据内标化合物校正峰面积后，建立生物胺含量与生物胺衍生物峰面积定量关系 的标准曲线； (6) 按照上述步骤(1)-(4)获得待测样品中生物胺衍生物的峰面积，根据步骤(5)生物 胺含量与生物胺衍生物峰面积的定量关系，计算得到水产品中生物胺的含量。
[0034] 实施例3: 其他操作和实施例1相同，同时，步骤(2)中，在衍生试剂中加入N，N-二乙基乙胺，N，N-二乙基乙胺与衍生化试剂的比为0.5,步骤(3)中，操作前首先在生物胺稀溶液还加入重量 百分比为8%的枸橼酸钠； 实施例4: 其他操作和实施例2相同，同时，步骤(2)中，在衍生试剂中加入N，N-二乙基乙胺，N，N-二乙基乙胺与衍生化试剂的比为1:1，步骤(3)中，操作前首先在生物胺稀溶液还加入重量 百分比为3%的枸橼酸钠； 实施例5: 其他操作和实施例1相同，同时，步骤(2)中，在衍生试剂中加入N，N-二乙基乙胺，N，N-二乙基乙胺与衍生化试剂的比为0.8,步骤(3)中，操作前首先在生物胺稀溶液还加入重量 百分比为5%的枸橡酸钠； 实施例6: 该方法的另一种操作为： 待测样品的处理:根据GB/T5009.208-2008对待测样品进行处理。准确称取鲐鱼5g用搅 拌器打碎，并用30mL5%的三氯乙酸(TCA)提取生物胺，然后10000g离心10min，取上清液置于 50mL容量瓶内，连续提取两次，合并上清液，滤纸过滤。取10mL提取液加到10mL正己烷里，振 荡5min去除油脂，重复两次;弃去有机相加入氯化钠使饱和，调pH为11，加入5mL正丁醇-氯 仿（1+1)混合溶液萃取，振荡5min，lOOOOg离心10min，吸取有机相，重复两次，合并萃取液， 取lmL萃取液40°C下氮气吹干，加入lOmLO. 1M盐酸制得生物胺稀溶液。
[0035] 萃取头的衍生:在0.5mL离心管内加入325uL异辛烷以及25uL氯甲酸异丁酯，混匀； 将萃取头浸入混合溶液里衍生lmin取出。
[0036]生物胺的同步萃取/衍生:取5mL净化液置于20mL带塞顶空瓶内，加入0.6g氯化钠 和2%氢氧化钠调pH为11，将实施例2中衍生后的萃取头插入溶液内，500rpm下搅拌萃取 30min〇
[0037]气相质谱分析：气相色谱分析条件：岛津气相色谱仪；色谱柱：Rxi-5ms (30m X 0.25mmX 0.25μπι);进样口温度270°C，不分流模式进样；质谱接口温度280°C，离子源温度 230°C ;色谱柱柱温：100°C，保持1.2min;然后以10°C /min的速度升温至160°C，再以25°C / min的速度升温至280°C，保留5min。设好方法文件后，待机，将上述萃取头的衍生的萃取头 插入进样口，运行分析。
[0038] 制备混标:分别是腐胺、尸胺、组胺、酪胺以及内标物1，7_二氨基庚烷，其中腐胺、 尸胺、酪胺的浓度梯度为(〇.〇〇5mg/L，0.05 mg/L，0.1 mg/L，0.3 mg/L，0.4 mg/L，0.5 mg/ L，0.7 mg/L，l mg/L)，组胺的浓度梯度为(0.05 mg/L，0.2 mg/L，0.5 mg/L，1.2 mg/L，1.6 mg/L，2 mg/L，3.5 mg/L)，l，7-二氨基庚烧浓度保持不变，为0.08 mg/L。
[0039] 将步骤（1)的生物胺稀溶液按上述各步骤进行实验，得到生物胺与内标物的峰面 积之比，根据制备混标中的标准曲线计算得到稀释后的样品中生物胺含量，进而可以计算 出提取液中生物胺的含量。
[0040] 根据计算得到的生物胺含量进行加标实验，计算加标回收率
从实验结果来看，该方法适合样品检测，方便可靠。
【主权项】
1. 一种水产品中生物胺的快速检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤： (1) 从水产品中萃取生物胺，并将其制备成生物胺稀溶液； (2) 在固相微萃取萃取头上浸涂一层衍生化试剂； (3) 用步骤(2)处理后的萃取头直接衍生/萃取步骤（1)得到的生物胺稀溶液中的生物 胺，得到生物胺衍生物； (4) 将步骤(3)得到的生物胺衍生物利用气相质谱进行分析； (5) 根据内标化合物校正峰面积后，建立生物胺含量与生物胺衍生物峰面积定量关系 的标准曲线； (6) 按照上述步骤（1)-(4)获得待测样品中生物胺衍生物的峰面积，根据步骤(5)生物 胺含量与生物胺衍生物峰面积的定量关系，计算得到水产品中生物胺的含量。2. 根据权利要求1所述的一种水产品中生物胺的快速检测方法，其特征在于，所述步骤 (1)将萃取液得到的生物胺采用盐酸溶解，并将该溶液调节pH为9-11。3. 根据权利要求2所述的一种水产品中生物胺的快速检测方法，其特征在于，所述步骤 (1) 的具体步骤为： a将水产品匀浆后称取5-20g，用5wt%三氯乙酸提取生物胺，将提取液用5wt%的三氯乙 酸稀释后滤纸过滤； b采用正己烷对滤液进行除脂； c向萃取液中加入重量百分比为10%以上的氯化钠，调节pH为11-12,并用1:1的正丁醇- 三氯甲烷溶液萃取； d将萃取液烘干后的残留物即生物胺用0.1M的盐酸溶解，每g水产品的盐酸使用量为1-4ml; e将盐酸溶液加入质量百分比5%以上的氯化钠，并调节pH为9-11。4. 根据权利要求3所述的一种水产品中生物胺的快速检测方法，其特征在于，所述步骤 (2) 中使用的衍生化试剂为氯甲酸异丁酯。5. 根据权利要求4所述的一种水产品中生物胺的快速检测方法，其特征在于，所述衍生 化试剂还加入异辛烷，氯甲酸异丁酯与异辛烷的重量比为0.2-1:13。6. 根据权利要求4或5所述的一种水产品中生物胺的快速检测方法，其特征在于，所述 衍生试剂中还加入N，N-二乙基乙胺，N，N-二乙基乙胺与衍生化试剂的比为0.5-1:1。7. 根据权利要求1所述的一种水产品中生物胺的快速检测方法，其特征在于，所述步骤 (3) 将萃取头浸入生物胺稀溶液中进行同步衍生/萃取生物胺时，在500-900rpm下搅拌30-60min;在将萃取头操作结束之后，去除萃取头上的水分。8. 根据权利要求1所述的一种水产品中生物胺的快速检测方法，其特征在于，所述步骤 (4) 的具体条件是:气相色谱分析条件：岛津气相色谱仪;色谱柱:Rxi-5ms(30m X 0.25mmX 0.25μπι);进样口温度270°C，不分流模式进样;质谱接口温度280°C，离子源温度230°C ;色谱 柱柱温：100°C，保持1.2min;然后以10°C /min的速度升温至160°C，再以25°C /min的速度 升温至280°C，保留5min。9. 根据权利要求1所述的一种水产品中生物胺的快速检测方法，其特征在于，所述步骤 (5) 中使用的内标化合物为1，7_二氨基庚烷;标准曲线的建立采用内标法，具体为:首先，在 样品中加入不同浓度的生物胺标准品和定量的内标化合物1，7_二氨基庚烷，然后，采用步 骤(4)测出一系列不同浓度的生物胺标准品对应的峰面积，最后，根据内标化合物校正峰面 积后，确定生物胺的含量与生物胺衍生物峰面积的定量关系，建立标准曲线。10.根据权利要求1或2或3所述的一种水产品中生物胺的快速检测方法，其特征在于， 所述步骤(3)中操作前首先在生物胺稀溶液还加入5-8%的枸橼酸钠。
【专利摘要】本发明涉及检测技术领域，具体涉及一种水产品中生物胺的快速检测方法。该方法首先将从水产品中萃取生物胺，并将其制备成生物胺稀溶液；然后采用涂覆衍生化试剂的萃取头直接衍生/萃取生物胺稀溶液，再将得到的生物胺衍生物利用气相质谱进行分析，同时，根据内标化合物校正峰面积后，建立生物胺含量与生物胺衍生物峰面积定量关系的标准曲线；获得待测样品中生物胺衍生物的峰面积，根据步骤（5）生物胺含量与生物胺衍生物峰面积的定量关系，计算得到水产品中生物胺的含量。该方法的优点为：前处理操作步骤简单，检测快速简便；有机溶剂使用较少，绿色环保；检测对象种类多样；检测精度较高。
【IPC分类】G01N30/06, G01N30/02
【公开号】CN105651890
【申请号】
【发明人】干宁, 黄洁, 欧昌荣, 汤海青, 张利, 曹玉廷, 李天华, 林赛钗, 刘海波
【申请人】宁波大学
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年1月18日