专利名称：快速繁殖库拉索芦荟的培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及对芦荟进行繁殖的培养基。
芦荟目前被广泛用于药物原料、化妆品成分和食品保健品等方面。特别是库拉索芦荟由于叶厚，产量高，生物活性功能成分丰富而受到社会重视，需求量越来越大。但由于它本身无法完成有性繁殖，靠无性繁殖(扦插或分株)完成扩充速度太慢，而对库拉索芦荟进行组织培养可更快的繁殖种苗，虽然国内外均开始研究，但要真正运用工厂化生产仍需在工艺、效率及配方上进一步细化。
本发明的目的旨在提供一种可对库拉索芦荟进行快速繁殖，可进行工厂化生产，工艺效率高的快速繁殖库拉索芦荟的培养基。
本发明的目的是通过下述方式实现的本发明将组织培养过程细分为三步即丛生芽的诱导阶段、快速增殖阶段和生根培养阶段，每步相对应的培养基分别为诱导小苗分化培养基含有MS常规基本培养基、6苄基腺嘌呤2毫克/升、吲哚乙酸0.1毫克/升，琼脂0.65％，蔗糖3.0％；快速增殖阶段的增殖培养基含有MS常规基本培养基、6苄基腺嘌呤2毫克/升、萘乙酸0.2毫克/升、琼脂0.65％、蔗糖3％；生根培养基含有1/2MS常规基本培养基、2.4毫克/升吲哚乙酸、琼脂0.65％、蔗糖3.0％，其中琼脂、蔗糖均指质量含量。
将每步中的培养基调整PH为5.8～6.0。
下面结合附图
对本发明作进一步详细说明。
附图为本发明的工艺流程图。
参见附图所示，利用本发明培养库拉索芦荟的过程为1、培养基的配参见附图所示，利用本发明培养库拉索芦荟的过程为1、培养基的配制，分别将三种培养基按比例进行配制，MS(Marashige&Sroog)为常规基本培养基。将配制好的培养基(有关成分含量见表I)加热溶解后调整PH值为5.8～6.0，装入洗净的圆柱瓶中，封口后高压在120℃左右蒸气下灭菌15分钟左右。
表I各阶段培养基中激素、蔗糖及琼脂含量 *IBA-吲哚乙酸，NAA-荼乙酸，BA-6苄基腺嘌呤2，外植体选择与处置。
选择生长健壮、无病无虫、着叶紧凑、高约30厘米的库拉索芦荟苗嫩茎作培养的外植体，清水洗去表面杂物，再用饱和洗衣粉摇动5分钟转入清水漂洗进入接种室，先用75％酒精灭菌5秒，立即用0.15％HgCL2灭菌10分钟，无菌水冲洗4次，沥干后切成0.6厘米厚的小段，用于接种。
3、丛生芽诱导培养。
将外植体接种在分化培养基上，直径8厘米的圆柱瓶每瓶接种3段，培养条件为26℃+(-)2℃，照光12h，光强1500lx(勒克司)。发现被菌类污染的及时拣出，45天左右即长许多丛生小芽(每外植体四周着生21个左右)，用于增殖或继代培养。
4、快速增殖。
将丛生芽分开，转入增殖培养基中，每培养瓶接种18～25个，温光不变，25天，叶长至2cm以上。
5、生根培养。
将快速增殖培养的苗转入生根培养基中，在照光12H，光照2000lx下培养，长出5～6根(15天左右)后，转入炼苗。
6、试管苗的移植。
移植前先将培养瓶在普通房间内敞口3天，洗去根部培养基，晾干后移植在大棚的苗床中。
下面将通过一些具体实验情况来说明本发明所述为培养基为培养库拉索芦荟为最适宜配比。
首先是生长物质对试管苗芽分化的影响。
为了寻找最有效的生长物质，以便诱导愈伤组织分化出更多的芽，我们对生长物质的种类和浓度进行了实验，表II是在有激动素BA(2ppm)的情况下，加入NAA或IBA后芽形成情况。
表II 生长素对试管苗芽分化的影响
上表表明IBA0.10ppm对库拉索芦荟芽增殖系数最高。
另外是生长素对试管苗生根的影响。
试管苗的生根数及成活率是影响大田栽培成活和生产成本的关键因素，而不同生长素对此的影响有差别(表III)，我们的工作表明，2.4ppm的IBA是最适当的一种方法。
表III 生长素对试管苗生根的影响
琼脂浓度对繁殖的影响。
组培过程中，琼脂使用量较大，其作用又仅仅是作为营养物的载体，因此，探索其最低的有效用量是降低生产成本的重要措施，我们的实践表明，0.65％的琼脂用量是实行芦荟组培的经济方式，单项成本节约近20％。
表IV 琼脂浓度对繁殖速度的影响
综上所述，本发明将组织培养过程细分为三步，每步对应配有相应的培养基，可直接运用到工厂化生产，工艺、效率、配方上进行了细化，具有准确定量，成本低，扩繁速度快，生产效率高特点。首批生产周期为85-95天，增殖系数为20左右，正常生产后生产周期为60天，并且具有可调性。
权利要求
1.快速繁殖库拉索芦荟的培养基，组织培养过程细分为三步即丛生芽的诱导阶段、快速增殖阶段和生根培养阶段，每步相对应的培养基分别为诱导小苗分化培养基含有MS常规基本培养基、6苄基腺嘌呤2毫克/升、吲哚乙酸0.1毫克/升，琼脂0.65％，蔗糖3.0％；快速增殖阶段的增殖培养基含有MS常规基本培养基、6苄基腺嘌呤2毫克/升、萘乙酸0.2毫克/升、琼脂0.65％、蔗糖3％；生根培养基含有1/2MS常规基本培养基、2.4毫克/升吲哚乙酸、琼脂0.65％、蔗糖3.0％，其中琼脂、蔗糖均指质量含量。
2.如权利要求1所述的快速繁殖库拉索芦荟培养基，每步中的培养基调整PH为5.8～6.0。
全文摘要
快速繁殖库拉索芦荟培养基,诱导小苗分化培养基含有MS常规基本培养基、6苄基腺嘌呤2毫克/升、吲哚乙酸0.1毫克/升,琼脂0.65%,蔗糖3.0%;快速增殖阶段的增殖培养基含有MS常规基本培养基、6苄基腺嘌呤2毫克/升、萘乙酸0.2毫克/升、琼脂0.65%、蔗糖3%;生根培养基含有1/2MS常规基本培养基、2.4毫克/升吲哚乙酸、琼脂0.65%、蔗糖3.0%,其中琼脂、蔗糖均指质量含量。可对库拉索芦荟进行快速繁殖,可实现工厂化生产及工艺效率高的特点。
文档编号A01H4/00GK1389102SQ0111450
公开日2003年1月8日 申请日期2001年5月31日 优先权日2001年5月31日
发明者杨力, 蒋腊才, 龚石洋 申请人:湖南金正方生物科技有限公司