一种海水组培选育耐盐库拉索芦荟的方法
【专利摘要】本发明公开了一种海水组培选育耐盐库拉索芦荟的方法，包括组培材料的前期处理；不同浓度海水培养基的配方；不同浓度海水驯化筛选耐盐分化芽的操作技术。通过不同程度的盐胁迫培养研究，利用基质盐分化学渐近递增的方式，诱导植物体内的盐应答基因的表达逐步增强，从而培养、分离、筛选出适合海涂盐渍地区种植和适应淡水缺乏地区海水灌溉的耐盐新品种，再通过在高盐培养基中的多代驯化培养稳定其性状，然后利用组织海水培养快繁技术达到耐盐新品种的选育。本发明的有益效果是利用海水组培技术，可以大量快繁芦荟耐盐品系，加速库拉索芦荟的耐盐高产品种并推广应用。
【专利说明】一种海水组培选育耐盐库拉索芦荟的方法 【技术领域】
[〇〇〇1] 本发明属于海洋生物【技术领域】，涉及一种海水组培选育耐盐库拉索芦荟的方法。 【背景技术】
[0002] 全世界约有9.5X108hm2的土地为盐渍土，占耕地面积的25%，中国约有 3. 3X 107hm2的盐渍土，其中沿海滩涂盐渍土面积为2. OX 106hm2。近年来，全球性的干旱 日趋严重。我国是农业大国，淡水资源总量严重不足、时空分布不均、水环境恶化、可耕地逐 年减少等不利因素已严重影响农业发展。如今发展海水灌溉农业、开发荒滩荒涂已被列为 海洋开发及国家发展战略中的重要一环，也是世界各国科学家研究的热点。发展海水农业， 关键要选育出耐盐性很强、有经济价值的植物或作物品种。
[0003] 芦荟是百合科（liliaceae)芦荟属（Aloe)多年生肉质草本植物，大多数生长在 热带和亚热带地区.含有芦荟大黄素等70多种对人体有益的物质，对肠胃病、心血管病 及各种灼烧、烫伤等均有不同程度的疗效，并具有较高的观赏价值，是集药用、食用、美容 及观赏于一身的热带植物，有极高的开发应用前景。库拉索芦荟，我国叫翠叶芦荟，学 名：Aloe Vera Linn，为芦荟中的珍品，其叶片肥厚多肉，翠绿，叶表有蜡质白粉，叶缘 有刺，叶面在幼苗期有白斑，成株后消失，其蒽醌（其中芦荟大黄素为基本成分）含量为 0.05%?0.5% (随植株生长发育不同而变化），而中国芦荟仅为0.0056%，相差10? 100 倍。
[0004] 库拉索芦荟一般生长数年后才能开花结实，加之雌雄花开放时间不一致，故种子 很少。生产上多采用分株或扦插法进行繁殖，在自然条件下，分生芽极低，且生长缓慢，同 时，长期的无性繁殖也会使芦荟变异率小，导致自然选择机率低。为了加速美国库拉索芦荟 的繁殖，利用植物组织培养方法，成功地繁殖出大量种苗，满足市场需要。当前，国内外对 芦荟的研究工作主要集中在医药，美容，栽培，以及生态方面，对其抗盐耐海水的研究没有 报道。且常规库拉索芦荟组培苗耐海水能力差，对大田栽培与生产指导作用受到影响。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种海水组培库拉索芦荟的方法，解决了目前耐盐芦荟株 系培育进程缓慢的问题。
[0006] 本发明的目的是提供海水组培与海水胁迫栽培轮回选育库拉索芦荟新品系的方 法，获得库拉索芦荟耐盐分化苗与生根苗。本发明所采用的技术方案是利用海水组培时间 短、继代驯化周期快的特点，结合大田海水灌溉系统选育方法，轮回驯化培育，以快速高效 选育库拉索芦荟的耐盐高产品种。本发明具体步骤如下：
[0007] 步骤1 :在大田经体积比1:3的海淡水浇灌一年后选取与淡水灌溉芦荟生长量没 有差异的植株，取出分化组织在常规培养基上培养，此时常规培养基可选取A0分化培养 基，待芦荟诱导出丛芽后，选择健壮、分化旺盛的无污染丛芽；
[0008] 步骤2 :将选取的丛芽转入AO、A1这两种分化培养基上培养28d，再转移到AO、A1 两种生根的培养基上培养28d，形成AO和A1方式处理后的丛芽。
[0009] 步骤3 :从A1处理中挑选健壮幼苗诱导丛芽，按照步骤2中在A1上培养的模式条 件再转接到A2分化培养基与生根培养基上继续进行分化与生根培养，以此类推，在A3、A4、 A5、A6培养基上均按此模式条件进行培养，选取出健壮且整齐一致的株系；
[0010] 步骤4 :A0处理的丛芽继续在A0培养基按照A0培养的条件循环培养5个轮回，选 取健壮且整齐一致的植株作为对照，分别以淡水与海淡水比30 :70的混合水进行幼苗入圃 实验与大田对比试验，经过多轮筛选出耐盐性强、产量高、品质好的芦荟品系。
[0011] 进一步，整个培养试验在温度（28±l)°c、光照度为20001X下进行，每天光照llh。
[0012] 进一步，所述培养基配方为保持基本基质即A0配方不变，按7个梯度，即基本基质 依次增加10%海水作为一个梯度，改变基质盐离子浓度配制7种分化培养基及7种生根培 养基；
[0013] 分化培养基本基质：
[0014] MS+肌醇100mg/l (单位下同）+烟酸0. 5+盐酸硫胺素1. 0+盐酸吡哆醇0. 5+甘氨 酸 2. 0+ 蔗糖 30000+ 卡拉胶 5800+6-BA2. 0+ΝΑΑ0. 1 ;PH :6· 0 (25°C );
[0015] 生根培养基本基质：
[0016] MS+肌醇100mg/l (单位下同）+烟酸(λ 5+盐酸硫胺素 L 0+盐酸吡哆醇(λ 5+甘氨 酸 2. 0+ 蔗糖 30000+ 卡拉胶 6800+NAAL 0+ΙΒΑ0. 5+ 活性炭 1000 ;ΡΗ :6· 0 (25°C )。
[0017] 本发明的有益效果是利用海水组培技术，可以大量快繁芦荟耐盐品系，加速库拉 索芦荟的耐盐高产品种并推广应用。 【专利附图】
【附图说明】
[0018] 图1为本发明海水组培选育南盐1号流程示意图；
[0019] 图2为大田海水灌溉对两种芦荟地上部（A)和根（B)鲜重的影响示意图。 【具体实施方式】
[0020] 下面根据附图和【具体实施方式】对本发明进行说明。
[0021] 如图1所示为本发明海水组培选育南盐1号流程示意图。本发明方法按照以下步 骤进行：
[0022] 步骤1 :在大田经体积比1:3的海淡水浇灌一年后选取与淡水灌溉芦荟生长量没 有差异的植株，取出分化组织在常规培养基上培养，此时常规培养基可选取A0分化培养 基，待芦荟诱导出丛芽后，选择健壮、分化旺盛的无污染丛芽；
[0023] 步骤2 :将选取的丛芽转入AO、A1这两种分化培养基上培养28d，再转移到AO、A1 两种生根的培养基上培养28d，形成A0和A1方式处理后的丛芽。
[0024] 步骤3 :从A1处理中挑选健壮幼苗诱导丛芽，按照步骤2中在A1上培养的模式条 件再转接到A2分化培养基与生根培养基上继续进行分化与生根培养，以此类推，在A3、A4、 A5、A6培养基上均按此模式条件进行培养，选取出健壮且整齐一致的株系（命名为南盐1号 株系，代号F6);
[0025] 步骤4 :A0处理的丛芽继续在A0培养基按照A0培养的条件循环培养5个轮回，选 取健壮且整齐一致的植株作为对照（代号H))，以F6与R)为材料进行分别以淡水与海淡 水比30 :70的混合水进行幼苗入圃实验与大田对比试验，幼苗入圃实验与大田对比试验过 程：将筛选出的健壮的耐盐分化芽在A6处理继代培养3个轮回，以保证其稳定的优良性状。 将最后筛选获得的南盐1号库荟株系与对照处理（A0-6)同时打开瓶盖炼苗三天，洗净生根 苗基部培养基，移栽苗圃，分别用淡水、30 %海水、60 %海水的的天然海水灌溉处理，重复3 个，进行耐盐性比较，以培育筛选芦荟耐盐品系，经过多轮筛选出耐盐性强、产量高、品质好 的南盐1号芦荟品系。
[0026] 整个培养试验在温度（28± 1) °C、光照度为20001x下进行，每天光照llh。所有试 验每处理重复100样（瓶），每瓶8株。
[0027] 本发明培养基的设计：在基本培养基组成的基础上按6个梯度增加海水比例（表 1)，每个处理培养100个样品。
[0028] 表 1 123456789101112
【权利要求】
1. 一种海水组培选育耐盐库拉索芦荟的方法，其特征在于按照以下步骤进行： 步骤1 :在大田经体积比1:3的海淡水浇灌一年后选取与淡水灌溉芦荟生长量没有差 异的植株，取出分化组织在常规培养基上培养，此时常规培养基可选取A0分化培养基，待 芦荟诱导出丛芽后，选择健壮、分化旺盛的无污染丛芽； 步骤2 :将选取的丛芽转入A0、A1这两种分化培养基上培养28d，再转移到A0、A1两种 生根的培养基上培养28d，形成A0和A1方式处理后的丛芽； 步骤3 :从A1处理中挑选健壮幼苗诱导丛芽，按照步骤2中在A1上培养的模式条件再 转接到A2分化培养基与生根培养基上继续进行分化与生根培养，以此类推，在A3、A4、A5、 A6培养基上均按此模式条件进行培养，选取出健壮且整齐一致的株系； 步骤4 :A0处理的丛芽继续在A0培养基按照A0培养的条件循环培养5个轮回，选取健 壮且整齐一致的植株作为对照，分别以淡水与海淡水比30 :70的混合水进行幼苗入圃实验 与大田对比试验，经过多轮筛选出耐盐性强、产量高、品质好的芦荟品系。
2. 按照权利要求1所述一种海水组培选育耐盐库拉索芦荟的方法，其特征在于：整个 培养试验在温度（28±1) °C、光照度为20001x下进行，每天光照llh。
3. 按照权利要求1所述一种海水组培选育耐盐库拉索芦荟的方法，其特征在于：所述 培养基配方为保持基本基质即A0配方不变，按7个梯度，即基本基质依次增加10%海水作 为一个梯度，改变基质盐离子浓度配制7种分化培养基及7种生根培养基； 分化培养基本基质： MS+肌醇100mg/l (单位下同）+烟酸0. 5+盐酸硫胺素1. 0+盐酸吡哆醇0. 5+甘氨酸 2. 0+ 蔗糖 30000+ 卡拉胶 5800+6-BA2. 0+ΝΑΑ0. 1 ;PH :6· 0 (25°C ); 生根培养基本基质： MS+肌醇100mg/l (单位下同）+烟酸0. 5+盐酸硫胺素1. 0+盐酸吡哆醇0. 5+甘氨酸 2. 0+ 蔗糖 30000+ 卡拉胶 6800+NAAL 0+ΙΒΑ0. 5+ 活性炭 1000 ;PH :6· 0 (25°C )。
【文档编号】A01H4/00GK104082143SQ201410309505
【公开日】2014年10月8日 申请日期:2014年7月1日 优先权日:2014年7月1日
【发明者】刘兆普, 刘联, 刘玲, 隆小华 申请人:南京农业大学（海南）滩涂农业研究所