专利名称：一种耐热紫花苜蓿的培育方法
技术领域：
本发明涉及一种耐热紫花苜蓿的培育方法。
背景技术：
苜蓿因其高产、优质、利用年限长、根系发达，可改良土壤结构，增加土 壤肥力，被誉为"牧草之王"。在我国，随着农业产业结构和畜牧业结构的调整， 节粮型畜牧业，特别是草食动物养殖业，呈现良好的发展态势，因为苜蓿在提 高奶牛、肉羊的单产中发挥决定性的作用，己成为我国"三元"种植结构调整
的首选词料作物，苜蓿产业作为新兴的朝阳产业，存在着广阔的发展空间。
优良品种是获得高产优质苜蓿的内在原因，也是产业化的基础，但目前我 国优良苜蓿品种较少，加之原种数量少，良种产量低，远远满足不了生产和生 态建设的需求。同时，由于夏季高温的原因导致紫花苜蓿在我国南方难以种植， 南方的苜蓿干草基本是从北方调运，运输成本极高，既提高了词养成本，而且 质量难以保证，极大阻碍了南方草食畜禽的发展。
正是在该背景下，本发明提出一种耐热紫花苜蓿的培育方法，旨在培育适 合南方种植的耐热紫花苜蓿新品种，推动南方紫花苜蓿苜蓿产业化发展，增加 优质饲草的供应，促进我国草食动物养殖业的发展，增进农村经济发展和农民 收入。
发明内容
本发明的目的在于提供一种耐热紫花苜蓿的培育方法，以获得适合南方种 植的耐热紫花苜蓿新品种。
耐热紫花苜蓿的培育方法，其特征在于包括以下步骤
1) 取主栽紫花苜蓿品种的子叶为外植体，接种至诱导培养基，于25士rc下
诱导愈伤组织；
2) 选取诱导形成1周的愈伤组织，转移至添加1%(1-胡萝卜素的诱导培养基， 培养至愈伤组织进入快速增殖期；
3) 挑取新增生的愈伤组织，置于温度35'C和光照3000Lux下筛选1周，尔 后移至继代培养基，继代培养2周，重新置于35'C和3000Lux下筛选l周；
4) 选取仍存活的愈伤组织，转移至分化培养基，诱导分化成苗，单株编号 种植；
5) 摘取顶端的2张新生叶，测定叶黄素含量，保留叶黄素含量高于0.1%的 紫花苜蓿植株，进行种子繁育；6)继续种植步骤5)筛选的紫花苜蓿株系，室内外评价验证叶黄素含量和 耐热性的表达稳定性，对稳定的优良株系进行种子繁殖，培育能正常越夏的耐 热紫花苜蓿。
上述的稳定性是指入选紫花苜蓿的叶黄素含量和耐热性可在不同年份间(2 年及以上)、季节间(2季及以上)以及地点间(2个地点及以上)表达一致， 特性不受年份、季节以及地点的显著影响。
本发明中，所说的诱导培养基为MS基本培养基添加NAA5mg、 BA0.5mg、 蔗糖30g、琼脂粉6.8g， pH灭菌前5.8。
本发明中，所说的继代培养基为MS基本培养基添加NAA0.5mg、 BA2mg、 蔗糖30g、琼脂粉6.8g， pH灭菌前5.8。
本发明中，所说的分化培养基为MS基本培养基添加KTlmg、蔗糖30g、 琼脂粉6.8g ， pH灭菌前5.8。
本发明具有以下几方面的有益效果
培育的耐热紫花苜蓿新品种适合我国南方种植，推动紫花苜蓿苜蓿在我国 南方的产业开发，增加优质饲草的供应，促进我国草食动物养殖业的发展，尤 其有利于增进南方丘陵山区的农村经济发展和农民收入。
具体实施例方式
以下通过具体实例进一步说明本发明。
实施例1:
以紫花苜蓿品种"维多利亚"的子叶为外植体，接种至诱导培养基，于25土rc
下诱导形成愈伤组织，选择诱导形成l周的愈伤组织，转移至含添加1%01-胡萝
卜素的诱导培养基，培养至2周后愈伤组织进入快速增殖期，挑取新增生的愈 伤组织，置于35。C和3000Lux下筛选l周，然后转移至继代培养基，继代培养 2周，重新置于35'C和3000Lux下筛选l周，选择存活的愈伤组织，转移至分 化培养基，诱导分化成苗，单株编号种植幼苗976多株。摘取顶端的2张新生 叶，采用高效液相色谱法[色谱柱为C18柱(4.6mmxi50mm; 5pm)，流动相为 乙腈-甲醇(95: 5);流速0.7mL/min，检测波长446nm;柱温室温。结果叶 黄素在7.686~17.93pg/mL范围内线性关系良好]测定叶黄素含量，入选叶黄素含 量高于0.1%的紫花苜蓿植株5株，进行种子繁育，经室内外模拟评价叶黄素含 量和耐热性的表达稳定性，获得叶黄素含量0.13%和耐热性稳定的优良紫花苜 蓿新材料HT-Alfal。种植培育出的HT-Alfal，可正常越夏，即盛夏炎热季节叶 片保持绿色，能正常生长，可提供稳定提供优质营养的饲料，而普通紫花苜蓿 材料由于不耐热，休眠停滞生产，叶片枯黄。
权利要求
1. 一种耐热紫花苜蓿的培育方法，其特征在于包括以下步骤1)取主栽紫花苜蓿品种的子叶为外植体，接种至诱导培养基，于25±1℃下诱导愈伤组织；2)选取诱导形成1周的愈伤组织，转移至添加1％α-胡萝卜素的诱导培养基，培养至愈伤组织进入快速增殖期；3)挑取新增生的愈伤组织，置于温度35℃和光照3000Lux下筛选1周，尔后移至继代培养基，继代培养2周，重新置于35℃和3000Lux下筛选1周；4)选取仍存活的愈伤组织，转移至分化培养基，诱导分化成苗，单株编号种植；5)摘取顶端的2张新生叶，测定叶黄素含量，保留叶黄素含量高于0.1％的紫花苜蓿植株，进行种子繁育；6)继续种植步骤5)筛选的紫花苜蓿株系，室内外评价验证叶黄素含量和耐热性的表达稳定性，对稳定的优良株系进行种子繁殖，培育能正常越夏的耐热紫花苜蓿。
全文摘要
本发明涉及一种耐热紫花苜蓿的培育方法，其特征在于包括以下步骤取主栽紫花苜蓿品种的子叶为外植体，在25±1℃下诱导形成愈伤组织，选择1周的愈伤组织转移至含添加1％α-胡萝卜素的诱导培养基，培养至愈伤组织快速增殖期，挑取新增生的愈伤组织，置于高温和强光下筛选2次，取存活的愈伤组织转移至分化培养基分化成苗，按单株编号种植，摘取顶端的2张新生叶，测定并保留叶黄素含量高于0.1％的紫花苜蓿植株，进行种子繁育，继续种植室内外评价验证叶黄素含量和耐热性的表达稳定性，对稳定的优良株系进行种子繁殖，培育能正常越夏的耐热紫花苜蓿。本发明的耐热紫花苜蓿，适合在我国南方种植，增加优质饲草的供应，促进我国草食动物养殖业的发展。
文档编号A01H1/04GK101283673SQ20081006181
公开日2008年10月15日 申请日期2008年5月12日 优先权日2008年5月12日
发明者吴殿星, 王忠华, 舒小丽, 新 黄 申请人:浙江大学