专利名称：一种简便的牙鲆幼鱼性别判定方法
技术领域：
本发明属鲆鲽鱼类性别的判定领域，特别是涉及于一种简便的牙鲆幼鱼的性别判 定方法。
背景技术：
性别判定是研究鱼类繁殖与发育的基础，鱼类的性腺分为精巢和卵巢，在鱼类的繁育中具有不同的功能。在鱼类研究中，包括鱼类的繁殖发育、内分泌调节、外界环境及化 学物质等对鱼类的繁殖与生理影响等均需要判定其性别。牙鲆等鲆鲽鱼类具有雌性个体生 长速度大于雄性个体的特点，为了提高生产效益，单性育种技术如雌核发育、激素诱导雌性 化及温度性别决定等逐渐发展起来。而在这些研究中均需要大量判定幼鱼的性别，进行性 别比例计算以研究人工性别控制的成效。同样，在对鲆鲽鱼类进行内分泌调控研究时，亦需 要首先确定其性别组成。由于鱼类幼鱼的性腺还未发育成熟，性腺组织较小，呈细小的现状，不能用肉眼分 辨性别，通常情况下，性别判定主要依靠组织切片技术进行。但是，组织切片技术操作步骤 较多，如大量判定必定花费较多的人力物力，且其操作过程中的二甲苯等化学物质对操作 人员健康有较大的危害。
发明内容
本发明需要解决的问题是提供了一种简便的牙鲆幼鱼性别判定方法。该发明流程 简单，易操作，整个过程耗时少，结果稳定可靠，无需特殊或昂贵的仪器，成本少，所需试剂 少，减少操作人员组织切片过程中所接触的多种有毒化学物质，对操作人员伤害极小。本发明的一种简便的牙鲆幼鱼性别判定方法，包括(1)取新鲜的牙鲆幼鱼，称量后解剖并将含有性腺组织的腹部固定于Davision’ s AFA固定液中，在固定24h后换用70%乙醇长期保持；(2)将固定的牙鲆腹部放置在载玻片上，将其置于解剖镜下，剥去其表皮和肌肉组 织，取出完整的性腺组织；(3)将性腺靠近肾脏的一端放于解剖镜视野中央，用解剖针和镊子轻轻抚平其表 皮部分；(4)观察近肾脏一端性腺部分表皮内性腺组织的形状，根据形状的不同判定其性 别。所述步骤(1)中Davision’ s AFA固定液由无水乙醇、甲醛、冰乙酸按体积比 6:3: 1的比例配制。所述步骤(4)中根据形状的不同判定其性别方法为若性腺较大且呈“心”形则为 雌性，若性腺细长且呈细长的“D”形则为雄性。本发明根据牙鲆等鲆鲽鱼类的性腺组织结构及其形状的不同，设计出快捷的不经 组织切片技术的性别判定方法，经过反复试验及组织切片证明，所述方法可以准确地判定性别分化后全长在6. Ocm以上的牙鲆幼鱼的性别，本发明可以用于牙鲆等鲆鲽鱼类的神经内分泌调控、单性培育及环境因子性别调控等研究中，具有广泛的适用性。有益效果(1)本发明流程简单，易操作，整个过程耗时少，结果稳定可靠；(2)无需特殊或昂贵的仪器，成本少，所需试剂少，减少操作人员组织切片过程中 所接触的多种有毒化学物质，对操作人员伤害极小。
图1为解剖镜下取出的牙鲆性腺组织；图2为雌性牙鲆的“心”形性腺；图3为雄性牙鲆的“D”形性腺。
具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人 员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定 的范围。实施例1(1)取新鲜的牙鲆幼鱼，称量(全长6. 9cm, 2. 78g)，解剖并将含有性腺组织的腹部 固定于Davision's AFA固定液(无水乙醇、甲醛、冰乙酸按照体积比6 3 1配制)中， 在固定24h后换用70%乙醇长期保持；(2)取固定的牙鲆腹部放置在载玻片上，将其置于解剖镜下，剥去其表皮和肌肉组 织，取出完整的性腺组织；(3)将性腺靠近肾脏的一端放于解剖镜视野中央，用解剖针和镊子轻轻抚平其表 皮部分；(4)观察近肾脏一端性腺部分表皮内性腺组织的形状，根据形状的不同判定其性 别；性腺细长且呈细长的“D”形，判定其性别为雄性。将该性腺组织做常规石蜡切片，染色 后观察，经验证其性腺为雄性，精巢呈细长的棒状，与解剖镜镜检结果一致。实施例2(1)取新鲜的牙鲆幼鱼，称量(全长7. 5cm, 3. 12g)，解剖并将含有性腺组织的腹部 固定于Davision's AFA固定液(无水乙醇、甲醛、冰乙酸按照体积比6 3 1配制)中， 在固定24h后换用70%乙醇长期保持；(2)取固定的牙鲆腹部放置在载玻片上，将其置于解剖镜下，剥去其表皮和肌肉组 织，取出完整的性腺组织；(3)将性腺靠近肾脏的一端放于解剖镜视野中央，用解剖针和镊子轻轻抚平其表 皮部分；(4)观察近肾脏一端性腺部分表皮内性腺组织的形状，根据形状的不同判定其性 别；性腺较大且呈“心”形，判定其性别为雌性。将该性腺组织做常规石蜡切片，染色后观察，经验证其性腺为雌性，卵巢较大，组织切片中的卵巢形状与解剖镜下观察的形状基本一致
权利要求
一种简便的牙鲆幼鱼性别判定方法，包括(1)取新鲜的牙鲆幼鱼，称量后解剖并将含有性腺组织的腹部固定于Davision’s AFA固定液中，在固定24h后换用70％乙醇长期保持；(2)将固定的牙鲆腹部放置在载玻片上，将其置于解剖镜下，剥去其表皮和肌肉组织，取出完整的性腺组织；(3)将性腺靠近肾脏的一端放于解剖镜视野中央，用解剖针和镊子轻轻抚平其表皮部分；(4)观察近肾脏一端性腺部分表皮内性腺组织的形状，根据形状的不同判定其性别。
2.根据权利要求1所述的一种简便的牙鲆幼鱼性别判定方法，其特征在于所述步骤 (1)中Davision's AFA固定液由无水乙醇、甲醛、冰乙酸按体积比6 3 1的比例配制。
3.根据权利要求1所述的一种简便的牙鲆幼鱼性别判定方法，其特征在于所述步骤 (4)中根据形状的不同判定其性别方法为若性腺较大且呈“心”形则为雌性，若性腺细长且 呈细长的“D”形则为雄性。
全文摘要
本发明涉及一种简便的牙鲆幼鱼性别判定方法，包括(1)将牙鲆幼鱼称量后取腹部包含性腺的部分固定于Davision’s AFA固定液中，在处理24h后改用70％乙醇保存；(2)将固定的幼鱼腹部置于解剖镜下，剥去其表皮及肌肉部分，取出性腺组织；(3)将性腺组织置于解剖镜下，观察其性腺表皮包含的性腺组织的形状，雌性牙鲆的性腺组织较大，呈“心”形，而雄性牙鲆的性腺组织较小且细长，呈长“D”形。本发明操作简便，成本低，结果稳定可靠，适用于鲆鲽鱼类等多种鱼类的繁殖与发育研究。
文档编号A01K61/00GK101803578SQ20101013643
公开日2010年8月18日 申请日期2010年3月30日 优先权日2010年3月30日
发明者孙鹏, 尹飞, 彭士明, 施兆鸿 申请人:中国水产科学研究院东海水产研究所