专利名称：一种养蚕用消毒药剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种消毒剂组合物，特别涉及一种适用于蚕易感染的病原微生物的消毒剂。
背景技术：
蚕病的爆发一直是养蚕业最大的威胁，每年都会因各类蚕病的爆发造成重大损失。蚕病防治的基本方针是预防为主，综合防治。人们主要通过加强蚕室蚕具消毒、蚕座消毒、桑叶页面消毒、改善饲育条件等手段来降低蚕病爆发的几率，虽有成效，但结果总不如人意。从已有医药或兽药中筛选适合蚕业生产的新型药物已经成为蚕药开发的新思路。
溴氯海因(benzimidazole compounds，基本结构为1-溴-3-氯-5，5-二甲基海因，分子式C5H6BrClN2O2)是一种性能特异的消毒杀菌剂，其作用机理为C5H6BrClN2O2+2H2O→C5H8N2O2+HOBr+HOCl，即溴氯海因在水中通过溶解不断释放出活性Br-离子和活性Cl-离子，形成次溴酸和次氯酸，生成的次溴酸和次氯酸具有强氧化性，将微生物体内的生物酶氧化而达到杀菌的目的。相比其他消毒杀菌剂，溴氯海因具有以下特点(1)杀菌力更强，且杀菌范围广；(2)常规含氯消毒剂通常在水体使用时，其效果受到水质酸碱度(即pH)影响极大，一般在偏碱性的水体中使用，其pH应用范围极广；(3)一般而言，常规含氯消毒剂在水体中使用，其杀菌效果如何，还要受到水体肥瘦(即有机质)的强烈的影响，通常水质较肥的水体施用常规含氯消毒剂后，其杀菌效果不尽人意，而溴氯海因对有机质极不敏感，因此在各种不同类型的水体中应用溴氯海因均可取得令人满意的消毒效果。但是之前溴氯海因一直作为一种有效的消毒剂应用在水处理和水产养殖上，但作为蚕药来使用还未见报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种溴氯海因的新用途，开发一种新的养蚕用消毒药剂。
根据溴氯海因单独杀灭NPV，CPV病毒效果，开发了以溴氯海因为主剂，磷酸三钠或氯化磷酸三钠或碳酸氢钠等碱性钠盐为辅剂的新蚕药，有效扩大杀毒范围，提高利用率。
本发明的技术方案为一种养蚕用消毒药剂，以溴氯海因为主剂，以碱性钠盐为辅剂，当以水为溶剂配成溶液时，其中溴氯海因的质量体积浓度为120mg/L～960mg/L，辅剂的质量百分比浓度为0.25％～0.75％。所述的碱性钠盐为磷酸三钠、氯化磷酸三钠或碳酸氢钠中的任意一种。配成溶液时，更优选的溴氯海因的质量体积浓度为240mg/L～480mg/L，碱性钠盐为的质量百分比浓度为0.45％～0.5％。
根据上述配方开发制备的消毒剂可以是任何一种药剂学中的剂型。作为优选，所述的药剂为粉剂，溴氯海因的质量百分比浓度为5％～20％，相应辅剂的质量百分比浓度为80％～95％。
有益效果 (1)本发明将已有药物溴氯海因用于防治蚕病，开拓了该药的新用途。
(2)本发明将溴氯海因和磷酸三钠等碱性钠盐进行配伍，扩大了溴氯海因自身的消毒范围。
(3)本发明溴氯海因和磷酸三钠等碱性钠盐配伍制成的药剂安全无毒，对家蚕生命活动和各项经济指标无影响。
(4)本发明溴氯海因和磷酸三钠等碱性化合物配伍对家蚕主要病原体NPV、CPV、N.b、白僵菌、黄曲霉、苏芸金杆菌芽孢和毒素都有很好的杀灭作用，是1种高效广谱的养蚕用消毒剂。
具体实施例方式 为了更好的理解本发明的实质，下面将用溴氯海因，磷酸三钠的杀灭家蚕病原菌效果实验来说明其作为养蚕用消毒药剂的效果。同时也用来说明不同剂量、不同作用时间溴氯海因、磷酸三钠配伍对不同蚕病的防治效果也有所区别。
一、药品 1、溴氯海因 化学名称1-溴-3-氯-5，5-二甲基海因，简称BCDMH 分子式C5H6BrClN2O2 分子量241.49 性状为白色粉末，微溶于水。20℃时1L水溶解2.5g溴氯海因，0.1％水溶液的pH值为2.88。
干燥时稳定，有轻微的刺激气味。
质量指标主含量≥96％，溴氯摩尔比值1∶1.02，活性溴含量≥32％，活性氯含量≥14％。
作用机理溴氯海因在水中能够通过溶解不断释放出活性Br-离子和活性Cl-离子，形成次溴酸和次氯酸，生成的次溴酸和次氯酸具有强氧化性，将微生物体内的生物酶氧化而达到杀菌的目的。
贮存本品应在阴凉、干燥的环境中，严禁与有毒有害物品混放，以免污染，保质期一年。
2、工业磷酸三钠(十二水级)(HG/T2517-93)，含量(以Na3PO4·12H2O计)≥95.0％，PH值(1％溶液)11.5。
3、有机干扰物3％牛血清白蛋白。
4、中和剂含7.5g/L硫代硫酸钠和5.0g/L吐温80的PBS缓冲液。
二、消毒液的配制 按实际消毒时作用浓度的1.25倍配制消毒液。分别称取一定量的溴氯海因和磷酸三钠，用无菌硬水充分溶解后备用。
三、供试蚕 1、品种秋丰、白玉，秋丰×白玉； 2、龄期2、3龄起蚕； 3、设区各处理重复3区，每区50头蚕；安全性试验重复2区，每区400头蚕。
四、指示微生物 1、NPV、CPV、N.b、白僵菌分生孢子、黄曲霉分生孢子用无菌水将实验用的病原微生物配制成浓度1×109个/mL的菌悬液，NPV、CPV、N.b可在4℃冰箱内保存6个月，黄曲霉分生孢子悬液可提前1天配制，白僵菌分生孢子悬液当天配制。
2、苏芸金芽孢杆菌毒素将市售B.t菌粉用无菌水配成10％的菌悬液，当天配制。
五、消毒处理 1、取消毒试验用无菌大试管，先加入0.5ml试验用菌悬液，再加入0.5ml有机干扰物，混匀，置20℃±1℃水浴中5min后，用无菌吸管吸取上述浓度消毒液4.0ml注入其中，迅速混匀并立即记时。
2、中和反应作用至预定时间后，分别吸取0.5mL菌-药混合液加入预先准备好的含有4.5mL中和剂的试管中，中和10分钟。所用中和剂为含7.5g/L硫代硫酸钠和5.0g/L吐温80的PBS缓冲液。
3、阴性对照(病原不经消毒液处理，毒对)以无菌水代替消毒液按照以上程序进行。
六、病原接种 1、中和反应结束后，分别从各试管中吸取50μl中和产物液涂抹于直径2cm的圆形桑叶背面，每试验区用6片桑叶，晾干后给供试蚕喂饲； 2、阴性对照组(感染不处理组)用经无菌水稀释的菌悬液涂抹桑叶，晾干后给蚕喂饲； 3、空白对照组(不感染不处理组)用无菌水涂抹桑叶，晾干后给蚕喂饲； 4、待试验蚕将以上各种处理的桑叶全部吃完后，改用洁净桑叶喂饲。
七、发病调查 试验蚕在常规温湿度条件下饲养，根据各种病的发病时间进行试验蚕的发病调查，并统计各区的发病率。
八、消毒效果计算 1、以灭活率表示消毒剂对病原体的杀灭作用。
阴性对照组平均发病率≥95％。
九、试验结果 1、溴氯海因单剂对家蚕病原体NPV、CPV、N.b的灭活作用 表1不同浓度溴氯海因对家蚕NPV、CPV、N.b的灭活作用
注NPV、CPV、N.b接种浓度1×107个/ml，作用时间30分钟。
用不同浓度(稀释倍数)的溴氯海因对家蚕主要病原体NPV、CPV、N.b进行消毒试验，研究溴氯海因单剂对家蚕主要病原体的消毒效果，试验结果见表1。240-3840mg/L的溴氯海因溶液对NPV、CPV的灭活率在28.57-55.41％之间，而且灭活率不会随着溴氯海因浓度的增加而提高；对N.b进行消毒试验时，30mg/L以上浓度的溴氯海因溶液对N.b都有100％的灭活率。试验结果表明，溴氯海因对N.b具有很好的消毒效果，而对家蚕病原NPV、CPV消毒效果较差。
分析原因是因为溴氯海因溶液为酸性，0.1％水溶液的PH值为2.88，不能溶解多角体蛋白，所以不能完全杀灭由多角体蛋白包埋的病毒。从这一试验结果分析，溴氯海因对N.b有很好的消毒效果，只要配伍碱性的辅剂，将消毒液调为碱性，估计对NPV、CPV也能达到好的消毒效果。所以以下的试验主要是选择合适的辅剂，找到最佳的配伍处方。
2、磷酸三钠单剂对家蚕病原体NPV、CPV、N.b的杀灭作用 磷酸三钠工业上主要作为洗涤剂等，由于其强碱性，1％wt溶液pH值11.5，能溶解病毒多角体蛋白，蚕药上经常用作消毒药剂的辅剂。本试验主要是研究磷酸三钠单剂对家蚕病原体有无杀灭作用，从试验结果看(表2)，不同浓度的磷酸三钠溶液对家蚕主要病原体NPV、CPV、N.b的灭活率都为0，单独使用时对家蚕病原体无任何消毒效果。
表2不同浓度磷酸三钠对家蚕NPV、CPV、N.b的杀灭作用
注NPV、CPV、N.b接种浓度1×107个/ml，作用时间30分钟。
3、溴氯海因与磷酸三钠配伍对家蚕NPV、CPV、N.b的杀灭作用 从对NPV消毒试验结果(表3)可以看出，溴氯海因浓度为960mg/L(稀释1000倍)时，需要用0.75％wt以上浓度的磷酸三钠进行配伍才能达到对NPV100％的灭活率，溴氯海因浓度480mg/L(稀释2000倍)和240mg/L(稀释4000倍)时，0.45％wt以上浓度的磷酸三钠与之配伍能达到对NPV100％的灭活率，溴氯海因浓度120mg/L(稀释8000倍)时，需要0.5％wt以上浓度的磷酸三钠与之配伍能达到对NPV 100％的灭活率。
表3溴氯海因与磷酸三钠不同配比对家蚕NPV的杀灭作用
注NPV接种浓度1×107个/ml，作用时间30分钟。
从对CPV消毒试验结果(表4)可以看出，溴氯海因浓度为960mg/L(稀释1000倍)时，需要用0.75％wt以上浓度的磷酸三钠进行配伍才能达到对NPV100％的灭活率，溴氯海因浓度480mg/L(稀释2000倍)和，0.45％wt以上浓度的磷酸三钠与之配伍能达到对NPV100％的灭活率，溴氯海因浓度240mg/L(稀释4000倍)和120mg/L(稀释8000倍)时，0.5％wt的磷酸三钠与之配伍，对NPV的灭活率分别为92.0％和96.87％。
表4溴氯海因与磷酸三钠不同配比对家蚕CPV的杀灭作用
注CPV接种浓度1×107个/ml，作用时间30分钟。
从对N.b消毒试验结果(表5)可以看出，溴氯海因浓度在120mg/L、磷酸三钠浓度在0.25％wt以上的各种配伍对N.b都有100％的灭活作用，说明两种药剂配伍后对N.b仍有理想的消毒效果。
表5溴氯海因与磷酸三钠不同配比对家蚕N.b的杀灭作用
注N.b接种浓度1×107个/ml，作用时间30分钟。
经过以上试验，溴氯海因浓度在480mg/L或240mg/L时，磷酸三钠浓度在0.5％wt或0.45％wt时，作用30min，对3种家蚕主要的病原体N.b、NPV、CPV均有很好的杀灭作用。
4、溴氯海因与磷酸三钠配伍作用不同时间对家蚕主要病原体的杀灭作用 为了找到最佳的配伍，在以上试验结果的基础上，设计4种配伍组合，作用不同时间，进一步对家蚕3种主要病原体进行消毒试验。
从对N.b的消毒试验结果(表6)可以看出，4个组合作用10min以上对N.b都要100％的灭活效果。
表6溴氯海因与磷酸三钠配伍作用不同时间对家蚕N.b的杀灭作用
注N.b接种浓度1×107个/ml。
从对NPV的消毒试验结果(表7)可以看出，480mg/L溴氯海因与0.5％wt磷酸三钠配伍作用10min以上，480mg/L溴氯海因与0.45％wt磷酸三钠配伍需要作用30min对NPV有100％的灭活作用；240mg/L溴氯海因与0.5％wt磷酸三钠配伍作用5min以上，240mg/L溴氯海因与0.45％wt磷酸三钠配伍需要作用15min对NPV有100％的灭活作用。说明溴氯海因浓度在240mg/L和480mg/L时对NPV均有很好的消毒效果，其中与0.5％wt磷酸三钠配伍时作用时间更短。
表7溴氯海因与磷酸三钠配伍作用不同时间对家蚕NPV的杀灭作用
注NPV接种浓度1×107个/ml。
从对CPV的消毒试验结果(表8)可以看出，480mg/L溴氯海因与0.5％wt和0.45％wt磷酸三钠配伍需要作用30min对NPV有100％的灭活作用；240mg/L溴氯海因与0.5％wt和0.45％wt磷酸三钠配伍也需要作用30min对NPV有100％的灭活作用，说明溴氯海因浓度在240mg/L和480mg/L时对CPV均有很好的消毒效果，但作用时间必须在30min以上。
表8溴氯海因与氯化磷酸三钠配伍作用不同时间对家蚕CPV的杀灭作用
注CPV接种浓度1×107个/ml。
分析以上的试验结果，4个组合对家蚕3种主要病原体N.b、NPV、CPV均有很好的杀灭作用，但从综合因素看，以480mg/L溴氯海因浓度+0.5％wt磷酸三钠的配伍为最佳组合。因此，初步确定480mg/L溴氯海因浓度与0.5％wt磷酸三钠配伍为最佳候选处方，并进一步对其它病原体进行消毒试验。
从试验结果(表9)看，480mg/L溴氯海因浓度与0.5％wt磷酸三钠配伍对白僵菌作用5min，对黄曲霉、苏芸金杆菌芽孢和毒素作用60min，可以达到100％的杀灭作用。
表9溴氯海因与磷酸三钠配伍作用不同时间 对家蚕白僵菌、黄曲霉、苏芸金杆菌芽孢和毒素的杀灭作用
注白僵菌、黄曲霉、苏芸金杆菌芽孢接种浓度1×107个/ml，苏芸金杆菌毒素接种浓度0.1％。
5、溴氯海因、磷酸三钠配伍浸泡桑叶不同次数后对微孢子虫的杀灭作用 用480mg/L溴氯海因与0.5％wt磷酸三钠配制消毒液50L，用足量的桑叶(以能把桑叶全部浸泡为度)浸泡，取浸泡桑叶不同次数后的消毒液对家蚕微孢子虫进行消毒试验(方法同上)，以清水浸泡作为阴性对照，调查溴氯海因、磷酸三钠对家蚕微孢子虫的杀灭能力以及能否用于桑叶叶面消毒。从试验结果(表10)看，连续10次浸泡桑叶后的消毒液对家蚕微孢子虫仍有100％的杀灭效果，说明该消毒剂可用于桑叶叶面消毒，适用于微孢子虫防治。
表10溴氯海因、磷酸三钠配伍浸泡桑叶不同次数后对微孢子虫的杀灭作用
注N.b接种浓度1×107个/ml。
6、溴氯海因、磷酸三钠对家蚕的安全性试验 自三龄起蚕始分别用消毒液(溴氯海因480mg/L，磷酸三钠0.5％wt)和清水洗桑叶10分钟，晾半干后喂蚕至上蔟结茧，分别调查处理区和对照区的幼生率、死笼率、虫蛹率、单蛾产卵数、不良卵率、孵化率，以及全茧量、茧层量和茧层率，以考察溴氯海因、磷酸三钠消毒液用于桑叶叶面消毒后对家蚕生命力和经济性状的影响。从表11、12可知，溴氯海因、磷酸三钠消毒液处理区与对照区的5项主要生命力指标基本一致，表示家蚕主要经济性状的3项指标也很接近，说明用溴氯海因、磷酸三钠消毒液浸洗消毒的桑叶喂蚕，对家蚕的生命力和经济性状无明显影响，该消毒剂可用于桑叶消毒。
表11溴氯海因、磷酸三钠对家蚕生命力的影响 注自三龄起蚕始分别用消毒液(浓度为溴氯海因480mg/L，磷酸三钠0.5％)和清水洗桑叶10分钟，晾半干后喂蚕，每处理重复2区，每区400头。
表12溴氯海因、磷酸三钠对家蚕的经济性状的影响
注自三龄起蚕始分别用消毒液(浓度为溴氯海因480mg/L，磷酸三钠0.5％wt)和清水洗桑叶10分钟，晾半干后喂蚕，每处理重复2区，每区400头。
实施例1溴氯海因和磷酸三钠配伍对蚕室蚕具消毒 按配方比例溴氯海因480mg/L，磷酸三钠0.5％wt，配制消毒液50L，蚕室蚕具喷洒消毒。消毒后的蚕室蚕具用于家蚕饲育，未发生蚕病。
实施例2溴氯海因和氯化磷酸三钠配伍对蚕室蚕具消毒 按配方比例溴氯海因480mg/L，氯化磷酸三钠0.5％，配制消毒液50L，蚕室蚕具喷洒消毒。消毒后的蚕室蚕具用于家蚕饲育，未发生蚕病。
实施例3溴氯海因和碳酸氢钠配伍对蚕室蚕具消毒 按配方比例溴氯海因480mg/L，碳酸氢钠0.5％wt，配制消毒液50L，蚕室蚕具喷洒消毒。消毒后的蚕室蚕具用于家蚕饲育，未发生蚕病。
实施例4溴氯海因和磷酸三钠配伍对桑叶消毒 按配方比例溴氯海因480mg/L，磷酸三钠0.5％wt，配制消毒液50L，桑叶添食前在消毒液中浸泡30min，晾半干后喂蚕。未发生蚕病。
实施例5溴氯海因和磷酸三钠配伍粉剂的制备 按配方比例溴氯海因480mg/L，磷酸三钠0.5％wt，称取48kg溴氯海因，500kg磷酸三钠，混和成均匀的粉剂。使用时称取548g混合药剂溶解到100L水中，随后进行消毒作业。
权利要求
1.一种养蚕用消毒药剂，其特征在于，以溴氯海因为主剂，以碱性钠盐为辅剂，当以水为溶剂配成溶液时，其中溴氯海因的质量体积浓度为120mg/L～960mg/L，辅剂的质量百分比浓度为0.25％～0.75％；
当配制成粉剂时，溴氯海因的质量百分比浓度为5％～20％，相应辅剂的质量百分比浓度为80％～95％。
2.根据权利要求书1所述的养蚕用消毒药剂，其特征在于，所述的碱性钠盐为磷酸三钠、氯化磷酸三钠或碳酸氢钠中的任意一种。
3.根据权利要求书1所述的养蚕用消毒药剂，其特征在于，配成溶液时，溴氯海因的质量体积浓度为240mg/L～480mg/L，碱性钠盐为的质量百分比浓度为0.45％～0.5％。
全文摘要
本发明涉及一种养蚕用消毒药剂，以溴氯海因为主剂，以碱性钠盐为辅剂，当以水为溶剂配成溶液时，其中溴氯海因的质量体积浓度为120mg/L～960mg/L，辅剂的质量百分比浓度为0.25％～0.75％。当配制成粉剂时，溴氯海因的质量百分比为5％～20％，相应辅剂的质量百分比为80％～95％。碱性钠盐为磷酸三钠、氯化磷酸三钠或碳酸氢钠中的任意一种。更优选的溴氯海因的质量体积浓度为240mg/L～480mg/L，碱性钠盐为的质量百分比浓度为0.45％～0.5％。开发了已有药物溴氯海因的新用途，溴氯海因和磷酸三钠或氯化磷酸三钠或碳酸氢钠等碱性化合物配伍制成的蚕药安全可靠，对家蚕主要病原体NPV、CPV、N.b、白僵菌、黄曲霉、苏芸金杆菌芽孢和毒素都有很好的杀灭作用，是高效广谱养蚕用消毒剂。
文档编号A01P3/00GK101810178SQ201010156219
公开日2010年8月25日 申请日期2010年4月23日 优先权日2010年4月23日
发明者沈中元, 徐莉, 唐旭东, 戎枝林, 崔世明, 姜德义 申请人:江苏科技大学