专利名称：丝光绿蝇幼虫的培养与消毒方法
技术领域：
本发明涉及一种昆虫的培养与昆虫活体的消毒方法，具体的说是一种丝光绿蝇幼 虫的培养与消毒方法。
背景技术：
临床上用于治疗感染创面的昆虫幼虫主要是丝光绿蝇的幼虫。丝光绿蝇别名绿头 苍蝇，呈世界性分布。属双翅目，成蝇体长5mm 10mm。体色绿，带金属光泽，颊部银白色， 中胸背板上的鬃毛发达，腋瓣上无毛。肩鬃后区小毛在6根以上，在额的最狭处。第五腹板 茎部的长度大于侧叶长的1/2。肛尾叶后视端部向末端尖削。丝光绿蝇一生要经过卵、幼虫 (蛆)、蛹、成虫(蝇)四个时期，其幼虫期可作为医用昆虫，具有食腐性，自然环境中繁殖生 长能力很强，但在室内人工饲养、繁殖和消毒没有成熟的方法。目前有应用亚硫酸和甲醛联 合对虫卵消毒，然后在无菌的环境下孵化，用消毒的食物饲养，并应用于临床，这样可以避 免继发感染，但是应用亚硫酸和甲醛对虫卵消毒会导致虫卵死亡的几率增大，不利于稳定 传代。也有应用3%煤酚皂溶液对虫卵进行消毒，并且无菌饲养传代，但是仍然有20-30% 的死亡率。因此，目前临床上急需开发一种既能保持虫体有效传代，又能使消毒后的丝光绿 蝇幼虫保持活力的制备方法。参考文献[1]Mumcuoglu KY. Clinical applications formaggots in wound care[J]. Am J Clin Dermatol, 2001，2 :219-227.[2]Sherman RA. Maggot versus conservative debridement therapy for the treatment of ρ ressure ulcers[J]. Wound RepairRegen, 2002,10 :208-214.[3]Smith KE, Wal1R. The use of carrion as breeding sites by the blowfly Lucilia sericata and other Calliphoridae[J]. Med Vet Entmol,1997,11(1) :38-44.[4]Amin AR, Shoukry A, Morsy TA, et al. Studies of wound myiasis among sheep and goats in North Sonai Governorate [J]. J Egyp t SocParasitol,1997, 27(3) :719-737.[5]许兵红，陈正跃，艾予川.丝光绿蝇饲养初步研究[J].新乡医学院学报，1999， 16(1) :30-31.
发明内容
本发明提供了一种丝光绿蝇幼虫的培养与消毒方法，在室内条件下对丝光绿蝇进 行人工饲养并有效传代，对虫卵和幼虫进行消毒，获得了具有生命活力的活体丝光绿蝇幼 虫。本发明的技术方案包括丝光绿蝇虫卵收集、虫卵消毒、幼虫饲养与传代、幼虫的选 择与无菌处理，其具体步骤如下第一步、丝光绿蝇虫卵收集
根据现有技术，本领域的技术人员熟知如何操作收集虫卵，本发明人建议收集丝 光绿蝇在蓝点马鲛鱼(鲅鱼)鱼目中所产的虫卵；第二步、虫卵消毒①将卵块浸入0. 5-1%的亚硫酸钠溶液中摇晃3-5min，使粘着的卵块相互分离， 避免在消毒过程中有害物质残留于卵块之间；②在无菌条件下滤出液体，将虫卵浸入5-6%次氯酸钠溶液中消毒3-5min ；③虫卵用无菌生理盐水漂洗3-5次；④无菌吸水纸吸干虫卵表面水分；⑤取500ml无菌瓷罐作为养虫罐，罐中放入经过高温灭菌的鲤鱼鱼目研磨而成的 鱼目粉50g，无菌蒸馏水40ml，作为饲料，将卵块接种入养虫罐中，每罐约接种虫卵300-500 粒，再用无菌透气黑色棉布包扎罐口 ；第三步、幼虫饲养与传代①饲养条件丝光绿蝇饲养室的室内面积为IOmX 10m，室内温度保持22_25°C，空 气湿度为50-55% ；室内放置饲养笼，其大小为IOOcmX IOOcmX 120cm，四面为纱窗，底面采 用铁制，正面开口处用网布做成袖状，以便手伸入笼内换取材料；在蝇笼上方设置两个40 瓦日光灯管，平行放置在饲养笼顶端，每日持续保持光照8-10小时，蝇笼中需要放置水盘 (放入吸水的棉花或海棉，水面不要超过棉花以避免成虫溺毙)、成蝇食盘(配料鲤鱼鱼目 粉20克)、养虫罐(鲤鱼鱼目粉50克、无菌蒸馏水40ml)；水盘及食盘每晚八点进行更换， 养虫罐保持潮湿；②饲养方法发现有丝光绿蝇幼虫长成，需要每天更换饲料，将幼虫连同饲料倒入 无菌盆中，幼虫有避光性，会渐渐潜到盆底，移走上面的饲料分离出幼虫，更换饲料；虫体化 蛹前颜色开始变黄，将幼虫转移到装有无菌细沙的瓷罐(500ml)中，用无菌透气黑棉布扎 紧瓶口 ；幼虫化蛹后，收集蝇蛹，置于蝇笼中，每笼置蛹500个，待蛹羽化成蝇后，丝光绿蝇 第一次传代结束；每天察看蝇笼，若发现新生的虫卵，则将其放入新的养虫罐中，重复上述 虫卵消毒、幼虫饲养和传代过程，每代需更换新的无菌饲养设备；连续培养三代，发现了人 工无菌培养的丝光绿蝇从卵(1天)、幼虫(各虫龄期，5-7天)、蛹(7-8天)到成虫(13-14 天)的时间规律及稳定传代特点；第四步、幼虫的选择与无菌处理①丝光绿蝇幼虫的选择与虫龄观察丝光绿蝇幼虫有三个龄期1龄幼虫体长1 3mm，仅有后气门；蜕皮后变为2龄 幼虫，长3 5mm，有前气门，后气门有2裂；再次蜕皮即为3龄幼虫，长5 13mm，后气门 3裂；鉴于幼虫各龄期的特点，3龄幼虫虫体较大，摄食和分泌能力较强，本制备方法选择在 无菌环境下，培养的丝光绿蝇3龄幼虫；②丝光绿蝇幼虫虫体消毒法I将在无菌环境下培养的3龄幼虫放在0. 3-0. 5%碘伏溶液中4-5min，然后用蒸馏 水洗涤三遍，每遍anin ；II再将幼虫放入0. 新洁尔灭溶液中4-6min，然后用蒸馏水洗涤三遍，每遍 2min ；其中所有百分数为质量分数。
采用以上方法消毒后的幼虫均保持生命活力，随机选取虫体100条充分勻浆，浆 液成分经细菌检验(平板培养法)和病毒学检验(酶联免疫吸附试验)，未见细菌和病毒生 长(见表)。表(丝光绿蝇幼虫细菌和病毒学检测)
权利要求
1.丝光绿蝇幼虫的培养与消毒方法，包括丝光绿蝇虫卵收集、虫卵消毒、幼虫饲养与传 代、幼虫的选择与无菌处理；其特征在于虫卵消毒的方法是①将卵块浸入0.5-1%的亚硫酸钠溶液中摇晃3-5min，使粘着的卵块相互分离；②在无菌条件下滤出液体，将虫卵浸入5-6%次氯酸钠溶液中消毒3-5min；③虫卵用无菌生理盐水漂洗3-5次；④无菌吸水纸吸干虫卵表面水分。
2.根据权利要求1所述的丝光绿蝇幼虫的培养与消毒方法，其特征在于幼虫的选择与 无菌处理方法是①将在无菌环境下培养的3龄幼虫放在0.3-0. 5%碘伏溶液中4-5min，然后用蒸馏水 洗涤三遍，每遍anin ；②再将幼虫放入0.新洁尔灭溶液中4-6min，然后用蒸馏水洗涤三遍，每遍aiiin。
3.根据权利要求1或2所述的丝光绿蝇幼虫的培养与消毒方法，其特征在于所收集的 虫卵是丝光绿蝇在蓝点马鲛鱼鱼目中所产的卵。
4.根据权利要求1或2所述的丝光绿蝇幼虫的培养与消毒方法，其特征在于所用饲料 为鲤鱼鱼目粉。
5.根据权利要求1或2所述的丝光绿蝇幼虫的培养与消毒方法，其特征在于所述的幼 虫的饲养条件是每日光照8-10小时，室内温度22-25°C，空气湿度50-55%。
全文摘要
本发明提供了一种丝光绿蝇幼虫的培养与消毒方法，尤其涉及培养过程中对虫卵的消毒以及幼虫的消毒。本发明所述的虫卵消毒方法是先将卵块浸入0.5-1％的亚硫酸钠溶液中摇晃3-5min，使粘着的卵块相互分离，过滤后再将虫卵浸入5-6％次氯酸钠溶液中消毒3-5min；幼虫消毒方法是采用0.3-0.5％碘伏溶液和0.1％新洁尔灭溶液分两步对幼虫进行消毒。本发明所述的方法对蝇卵的生命活力影响小，死亡率为0％，幼虫消毒作用迅速而持久，毒性低，受有机物影响小；既能保持虫体有效传代，又能使消毒后的丝光绿蝇幼虫保持活力，而且操作简单，容易掌握，适合大范围的推广应用。
文档编号A01K67/033GK102106316SQ201010611090
公开日2011年6月29日 申请日期2010年12月29日 优先权日2010年12月29日
发明者吕德成, 张振, 王寿宇 申请人:大连医科大学附属第一医院