专利名称：一种鲳鱼稚幼鱼性腺固定与获取方法
技术领域：
本发明属鱼类组织学研究技术领域，特别是涉及一种鲳鱼稚幼鱼性腺固定与获取方法。
背景技术：
鱼类的性腺是生殖系 统中的重要器官，通过性腺组织切片技术可以从显微层次研究鱼类性腺组织中的细胞学特征及其变化，弄清其发生、发育和成熟的过程及规律。因此， 鱼类性腺的组织学研究在鱼类繁殖生物学中具有重要的意义，目前已经被广泛地应用于多种鱼类研究中。对于鲳鱼成鱼来说，由于其性腺体积较大且容易找到，因而取得与固定过程较容易；然而，对于鲳鱼稚幼鱼来说，由于其个体小，性腺组织也较小，有的甚至仅为细丝线状， 在解剖时不仅难以辨认，而且不容易完整的剥离下来。在鲳鱼的稚幼鱼性腺发育的研究过程中，往往需要取得完整的性腺组织，并对其进行固定和组织学切片以观察其细胞学特征， 这就需要找到简单快捷而有效的获得与固定鲳鱼稚幼鱼性腺的方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种鲳鱼稚幼鱼性腺固定与获取方法，针对鲳鱼稚幼鱼性腺的特点，通过先固定再剥离的方法获取性腺组织，所需试剂少，操作步骤也较简单，并能完整获得较小的鱼体中的性腺组织。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是提供一种鲳鱼稚幼鱼性腺固定与获取方法，包括下列步骤，(1)取新鲜鲳鱼稚幼鱼尸体，对其进行生物学数据测定并编号；(2)对于全长< 6cm的稚幼鱼尸体，从肛门往前端方向剪开其腹部表皮，全鱼浸泡于波恩氏固定液中进行固定；对于全长> 6cm的稚幼鱼尸体，将其头部、尾部、背部肌肉及其前半腹部切除，然后将剩余的后腹部进行固定；(3)固定24h后，将稚幼鱼尸体从波恩斯固定液中取出置于解剖镜下，减去腹部上方的表皮，在胃肠内脏团的后面找到与肾脏和肛门上端的直肠相连接的被固定为黄色的鲳鱼性腺组织，用镊子将其完整地剥离出来；(4)将剥离出来的鲳鱼性腺组织置于70%的乙醇中长期固定，待组织切片用。所述的波恩氏固定液为苦味酸饱和水溶液75ml、甲醛25ml、冰醋酸5ml。所述的前半腹部包括上端贴近肾脏前侧和下端贴近肛门。有益效果本发明流程简单，操作简单，首先以波恩氏固定液将鲳鱼稚幼鱼中极小的性腺组织进行固定；然后再进行剥离，整个操作过程的费时少；完整性腺取得容易，无须特殊或昂贵的仪器。本发明可以用于鲳鱼稚幼鱼性腺组织学切片，也适用于其它水产鱼类性腺组织学研究，具有广泛的适用性。
具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员 可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。实施例11)取新鲜鲳鱼稚幼鱼尸体(全长4. 5cm)，对其进行生物学数据测定并编号；2)将新鲜鲳鱼稚幼鱼尸体置于操作台上，用剪刀从肛门往前端方向剪开其腹部表皮，之后将整条鲳鱼进入波恩氏固定液中固定24h ；3)在固定24h后，将新鲜鲳鱼稚幼鱼尸体从波恩斯固定液中取出置于解剖镜下， 减去腹部上方的表皮，在胃肠内脏团的后面找到与肾脏和肛门上端的直肠相连接的被固定为黄色的细丝状的鲳鱼性腺组织，用镊子将其完整地剥离出来；4)将剥离出来的鲳鱼性腺组织置于70%的乙醇中长期固定，待组织切片用。实施例21)取新鲜鲳鱼稚幼鱼尸体(全长7. 5cm)，对其进行生物学数据测定并编号；2)将新鲜鲳鱼稚幼鱼尸体置于操作台上，用剪刀从肛门往前端方向剪开其腹部表皮，之后用解剖刀切除鲳鱼的头部尾部及背部肌肉留下腹部组织，再以肾脏的前端和肛门为界，将前半个腹部切除，将剩余的后半腹部固定于波恩斯固定液中24h ；3)在固定24h后，将新鲜鲳鱼稚幼鱼尸体从波恩斯固定液中取出置于解剖镜下， 减去腹部上方的表皮，找到胃肠内脏团，并在其后面找到与肾脏和肛门上端的直肠相连接的被固定为淡黄色的细线状的鲳鱼性腺组织，用镊子将其完整地剥离出来；4)将剥离出来的鲳鱼性腺组织置于70%的乙醇中长期固定，待组织切片用。
权利要求
1.一种鲳鱼稚幼鱼性腺固定与获取方法，其特征在于包括下列步骤，(1)取新鲜鲳鱼稚幼鱼尸体，对其进行生物学数据测定并编号；(2)对于全长<6cm的稚幼鱼尸体，从肛门往前端方向剪开其腹部表皮，全鱼浸泡于波恩氏固定液中进行固定；对于全长> 6cm的稚幼鱼尸体，将其头部、尾部、背部肌肉及其前半腹部切除，然后将剩余的后腹部进行固定；(3)固定24h后，将稚幼鱼尸体从波恩斯固定液中取出置于解剖镜下，减去腹部上方的表皮，在胃肠内脏团的后面找到与肾脏和肛门上端的直肠相连接的被固定为黄色的鲳鱼性腺组织，用镊子将其完整地剥离出来；(4)将剥离出来的鲳鱼性腺组织置于70%的乙醇中长期固定，待组织切片用。
2.根据权利要求1所述的一种鲳鱼稚幼鱼性腺固定与获取方法，其特征在于所述的波恩氏固定液为苦味酸饱和水溶液75ml、甲醛25ml、冰醋酸5ml。
3.根据权利要求1所述的一种鲳鱼稚幼鱼性腺固定与获取方法，其特征在于所述的前半腹部包括上端贴近肾脏前侧和下端贴近肛门。
全文摘要
本发明涉及一种鲳鱼稚幼鱼性腺固定与获取方法，首先对新鲜的鲳鱼稚幼鱼尸体测定，将其腹部表皮剪开并切除不含性腺的部分组织与器官，再采用波恩斯固定液对含有性腺的部分进行固定，最后取出固定好的组织块，在解剖镜下在胃肠内脏团后面找到鲳鱼的性腺组织。本发明可以用于鲳鱼稚幼鱼性腺组织学切片，也适用于其它水产鱼类性腺组织学研究，具有广泛的适用性。
文档编号A01K61/00GK102217564SQ20111010122
公开日2011年10月19日 申请日期2011年4月21日 优先权日2011年4月21日
发明者孙鹏, 尹飞, 彭士明, 施兆鸿 申请人:中国水产科学研究院东海水产研究所