专利名称：家蚕无滞育期多化性品种的冬季安全保存方法
技术领域：
本发明涉及禽类、鱼类、昆虫的管理，具体是指一种采用人工注射滞育激素方法， 使家蚕无滞育期多化性品种能够产下滞育卵，从而达到高效、安全保存的家蚕无滞育期多化性品种的冬季安全保存方法。
背景技术：
家蚕为卵态滞育，在自然条件下，按照一年中发生世代不同分为一化、二化和多化性品种。多化性蚕品种又分为有滞育期多化性品种和无滞育期多化性品种。有滞育期多化性品种在各个世代均有部分卵滞育，而无滞育期多化性蚕品种发育快，生活周期短，各世代均产无滞育卵，全年需要不间断地饲养7 8代才能继代保存。由于地理气候原因，全国大部分地区每年只能用桑叶养蚕4 5次，在当年的11月至次年3月没有桑叶生产期，只能利用家蚕人工饲料进行饲养继代保存，给无滞育期多化性蚕品种的保存带来很大困难。而且利用人工饲料养蚕技术要求高、成本高，以及不同蚕品种对人工饲料适应性不同，用人工饲料饲养保存无滞育期多化性蚕品种存在很大风险。因此，有必要在不影响保存品种的化性、主要特征特性和经济性状的条件下，对无滞育期多化性蚕品种冬季的保存技术进行创新，以保证无滞育期多化性品种冬季能够得到安全、高效的保存；且能减少2-3次的养蚕次数，节约大量的人力、物力和财力，大大提高保存工效。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对无滞育期多化性蚕品种冬季保存存在的问题，提供一种在蚕蛹期采用注射人工合成的昆虫滞育激素(diapause hormone，DH)，使无滞育期多化性蚕品种产下非遗传性的滞育卵，在冬季能够得到安全、高效保存的家蚕无滞育期多化性品种的冬季安全保存方法。本发明的家蚕无滞育期多化性品种的冬季安全保存方法以微量注射器为注射工具，以人工合成的昆虫滞育激素的稀释液为注射液，采用在蚕蛹期注射人工合成的昆虫滞育激素，使无滞育期多化性蚕品种产下非遗传性的滞育卵，在冬季得到保存；保存方法的具体实施步骤和控制条件如下1、选择注射时期在家蚕无滞育期多化性品种进行桑叶饲养至最后一个蚕期的蛹期进行；2、蛹期经过时间的确定家蚕无滞育期多化性品种在环境温度为25. 5°C的条件下，蛹期经过9天左右，蜇中经过11天左右；待熟蚕吐丝完毕结成茧后，削开尚未化蛹的蚕茧，平铺于恒温箱中，温度控制在25°C -26°C，相对湿度70%-75%,观察并记载每头蚕的实际化蛹时间，以备注射所用，雄性蚕蛹正常保护，供化蛾交配用，以小时计算雌蛹在化蛹后所经过的时间；3、配制注射液在注射前采用无菌水稀释人工合成的昆虫滞育激素(diapause hormone, DH)，配制成有效成分含量为0. 5 μ g/ μ 1的注射液；昆虫滞育激素原剂需在_70°C的条件下保存，配制稀释液时要将原剂缓慢解冻后，再现配现用；4、注射将已选出的在有效注射期内的雌蚕蛹，用经体积百分含量浓度为75%的酒精浸渍的酒精药棉，将整个蚕蛹体擦拭消毒，同时消毒实验用具和双手，然后选用10 μ 1 的微量注射器进行注射，注射有效期为从化蛹后经过18h至120h，个体注射有效剂量在 0. 5 μ g/蛹至2 μ g/蛹之间，用微量注射器抽取滞育激素稀释液，注射器针头对准蚕蛹腹部的第四和第五腹节间平行刺入蚕蛹体内，刺入深度约1cm，定量注入注射液后缓慢拔出针头，然后再对蚕蛹体的注射伤口用经体积百分含量浓度为75%的酒精浸渍的酒精药棉进行消毒；5、注射滞育激素液后的蚕蛹及蚕卵的保护将已注射滞育激素液后的蚕蛹分摊于消过毒的透气容器盒内，在25°C _26°C的温度和70-75%的相对湿度条件下保护至羽化，与正常雄蛾交配，产下的非遗传性滞育蚕卵，按常规方法进行保护。人工合成的昆虫滞育激素(diapause hormone, DH)，是一种多肽激素，由24个氨基酸残基组成，C末端酰胺化，氨基酸序列为H-Thr-Asp-Met-Lys-Asp-Glu-Ser-Asp-Arg-G ly-Ala-His-Ser-Glu-Arg-Gly-Ala-Leu-Cys-Phe-Gly-Pro-Arg-LeuNH2,分子量为 2645。稀释人工合成昆虫滞育激素的无菌水采用三角瓶装蒸馏水，并用高压蒸汽灭菌法灭菌，灭菌控制条件压力103. 4KPa，温度121°C，时间20分钟。注射消毒药棉为经体积百分含量浓度为75%的酒精浸渍的酒精药棉。注射器为10μ 1的微量注射器。注射的最佳时期为化蛹后经过24h至86h。根据实验结果，0. 5μ g/蛹为注射滞育激素的个体有效剂量的最低值，0. 5 μ g/蛹剂量和1 μ g/蛹剂量的滞育卵率，分别平均为 57. 61%和69. 52% ；2μ g/蛹剂量的滞育率基本可以达到94%以上。经注射滞育激素后对所产卵的滞育性和滞育卵后代的性状的调查，滞育激素注射对无滞育期多化性品种后代的化性不会产生任何影响，仍然保持着其固有的无滞育期多化性的特性。当进行家蚕无滞育期多化性品种的冬季安全保存时，选择在家蚕无滞育期多化性品种进行桑叶饲养至最后一个蚕期的蛹期为注射时期。在注射期内，家蚕无滞育期多化性品种在环境温度为25. 5°C的条件下，蛹期经过9天左右，蜇中经过11天左右；待熟蚕吐丝完毕结成茧后，削开尚未化蛹的蚕茧，平铺于恒温箱中，温度控制在25V _26°C，相对湿度 70% -75% ；观察并记载每头蚕的实际化蛹时间，以备注射所用，雄性蚕蛹正常保护，供化蛾交配用；以小时计算雌蛹在化蛹后所经过的时间。在注射前，采用无菌水稀释人工合成的昆虫滞育激素(diapause hormone, DH)，配制成有效成分含量为0. 5 μ g/μ 1的注射液； 昆虫滞育激素原剂需在_70°C的条件下保存，配制稀释液时要将原剂缓慢解冻后，再现配现用。配制好注射液后，将已选出的在有效注射期内的雌蚕蛹，用经体积百分比含量浓度为 75%的酒精浸渍的酒精药棉，将整个蚕蛹体擦拭消毒，同时消毒实验用具和双手，然后选用 10 μ 1的微量注射器进行注射，注射有效期为从化蛹后经过18h至120h，个体注射有效剂量在0. 5 μ g/蛹至2 μ g/蛹之间，用微量注射器抽取滞育激素稀释液，注射器针头对准蚕蛹腹部的第四和第五腹节间平行刺入蚕蛹体内，刺入深度约lcm，定量注入注射液后缓慢拔出针头，然后再对蚕蛹体的注射伤口用经体积百分比含量浓度为75%的酒精浸渍的酒精药棉进行消毒。注射滞育激素液完毕后，将已注射滞育激素液后的蚕蛹分摊于消过毒的透气容器盒内，在温度为25°C _26°C和相对湿度为70-75%的条件下保护至羽化，与正常雄蛾交配， 产下的非遗传性滞育蚕卵，按常规方法进行保护。完成家蚕无滞育期多化性品种的冬季安全保存工作。本发明的优点就在于采用人工注射滞育激素的方法，使无滞育期多化性蚕品种在冬季能够得到高效、安全的保存。克服了传统的无滞育期多化性蚕品种需要全年不间断地进行饲养才可以继代保存，特别是每年冬季没有桑叶生产给无滞育期多化性蚕品种的保存带来的很大困难。不仅降低了品种保存成本，而且避免了不同蚕品种对人工饲料适应性的不同而给无滞育期多化性蚕品种冬季保种带来的风险。本发明利用蚕卵的滞育性是在蛹体卵巢成熟过程中决定的特性，给雌蚕蛹注射昆虫滞育激素(diapausehormone，DH)，得到非遗传性的滞育卵，有利于无滞育期多化性蚕品种的继代保存。同时，在不影响品种的化性及特征特性和经济性状的条件下，既能够降低家蚕无滞育期多化性品种的保存风险，而且还减少了 2-3次的养蚕次数，大幅度地提高了工效，节约了人力、物力和财力。因此本发明方法是一种安全、有效的冬季保存无滞育期多化性蚕品种的方法，具有广阔的推广应用前景。
具体实施例方式实施例1，家蚕无滞育期多化性品种的冬季安全保存方法采用本发明家蚕无滞育期多化性品种的冬季安全保存方法。保存方法以微量注射器为注射工具，以人工合成的昆虫滞育激素的稀释液为注射液，采用在蚕蛹期注射人工合成的昆虫滞育激素，使无滞育期多化性蚕品种产下非遗传性的滞育卵，在冬季得到保存。保存方法的具体实施步骤和控制条件如下1、选择注射时期在家蚕无滞育期多化性品种进行桑叶饲养至最后一个蚕期的蛹期进行；2、蛹期经过时间的确定家蚕无滞育期多化性品种在环境温度为25. 5°C的条件下，蛹期经过9天左右，蜇中经过11天左右；待熟蚕吐丝完毕结成茧后，削开尚未化蛹的蚕茧，平铺于恒温箱中，温度控制在25°C -26°C，相对湿度70%-75%,观察并记载每头蚕的实际化蛹时间，以备注射所用，雄性蚕蛹正常保护，供化蛾交配用，以小时计算雌蛹在化蛹后所经过的时间；3、配制注射液在注射前采用无菌水稀释人工合成的昆虫滞育激素(diapause hormone, DH)，配制成有效成分含量为0. 5 μ g/ μ 1的注射液；昆虫滞育激素原剂需在_70°C 的条件下保存，配制稀释液时要将原剂缓慢解冻后，再现配现用；4、注射将已选出的在有效注射期内的雌蚕蛹，用经体积百分含量浓度为75%的酒精浸渍的酒精药棉，将整个蚕蛹体擦拭消毒，同时消毒实验用具和双手，然后选用10 μ 1 的微量注射器进行注射，注射有效期为从化蛹后经过18h至120h，个体注射有效剂量在 0. 5 μ g/蛹至2 μ g/蛹之间，用微量注射器抽取滞育激素稀释液，注射器针头对准蚕蛹腹部的第四和第五腹节间平行刺入蚕蛹体内，刺入深度约1cm，定量注入注射液后缓慢拔出针头，然后再对蚕蛹体的注射伤口用经体积百分比含量浓度为75%的酒精浸渍的酒精药棉进行消毒；5、注射滞育激素液后的蚕蛹及蚕卵的保护将已注射滞育激素液后的蚕蛹分摊于消过毒的透气容器盒内，在25°C _26°C的温度和70-75%的相对湿度条件下保护至羽化，与正常雄蛾交配，产下的非遗传性滞育蚕卵，按常规方法进行保护。对采用材料的说明
1、蚕品种来源及特性由中国农业科学院蚕业研究所近几年从国外引进保存的家蚕无滞育期多化性品种共13份(见表1)，具有耐高温高湿、体质强健、发育经过短等特点。表1、中国农业科学院蚕业研究所保存的无滞育多化性蚕品种
权利要求
1.一种家蚕无滞育期多化性品种的冬季安全保存方法，其特征在于以微量注射器为注射工具，以人工合成的昆虫滞育激素的稀释液为注射液，采用在蚕蛹期注射人工合成的昆虫滞育激素，使无滞育期多化性蚕品种产下非遗传性的滞育卵，在冬季得到保存；保存方法的具体实施步骤和控制条件如下(1)、选择注射时期在家蚕无滞育期多化性品种进行桑叶饲养至最后一个蚕期的蛹期进行；⑵、蛹期经过时间的确定家蚕无滞育期多化性品种在环境温度为25. 5°C的条件下， 蛹期经过9天，蜇中经过11天；待熟蚕吐丝完毕结成茧后，削开尚未化蛹的蚕茧，平铺于恒温箱中，温度控制在25°C — 26°C，相对湿度70% — 75%，观察并记载每头蚕的实际化蛹时间，以备注射所用，雄性蚕蛹正常保护，供化蛾交配用，以小时计算雌蛹在化蛹后所经过的时间；⑶、配制注射液在注射前采用无菌水稀释人工合成的昆虫滞育激素，配制成有效成分含量为0. 5μδ/μ1的注射液；昆虫滞育激素原剂需在-70°C的条件下保存，配制稀释液时要将原剂缓慢解冻后，再现配现用；⑷、注射将已选出的在有效注射期内的雌蚕蛹，用经体积百分含量浓度为75%的酒精浸渍的酒精药棉，将整个蚕蛹体擦拭消毒，同时消毒实验用具和双手，然后选用10μ1的微量注射器进行注射，注射有效期为从化蛹后经过18h至120h，个体注射有效剂量在0. 5μδ/ 蛹至蛹之间，用微量注射器抽取滞育激素稀释液，注射器针头对准蚕蛹腹部的第四和第五腹节间平行刺入蚕蛹体内，刺入深度约1cm，定量注入注射液后缓慢拔出针头，然后再对蚕蛹体的注射伤口用经体积百分含量浓度为75%的酒精浸渍的酒精药棉进行消毒；(5)、注射滞育激素液后的蚕蛹及蚕卵的保护将已注射滞育激素液后的蚕蛹分摊于消过毒的透气容器盒内，在25°C — 260C的温度和70-75%的相对湿度条件下保护至羽化，与正常雄蛾交配，产下的非遗传性滞育蚕卵，按常规方法进行保护。
2.根据权利要求1所述的家蚕无滞育期多化性品种的冬季安全保存方法，其特征在于所使用的人工合成的昆虫滞育激素为一种多肽激素，由24个氨基酸残基组成，C末端酰胺化，氨基酸序列为 H-Thr-Asp-Met-Lys-Asp-Glu-Ser-Asp-Arg-Gly-Ala-His-Ser-Glu-Arg-Gly-Ala-Leu-Cys-Phe-Gly-Pro-Arg-Leu-NH2,分子量为 2645。
3.根据权利要求1所述的家蚕无滞育期多化性品种的冬季安全保存方法，其特征在于稀释人工合成昆虫滞育激素的无菌水采用三角瓶装蒸馏水，并用高压蒸汽灭菌法灭菌，灭菌控制条件压力=103. 4KPa，温度121°C，时间20分钟。
4.根据权利要求1所述的家蚕无滞育期多化性品种的冬季安全保存方法，其特征在于注射时期选择化蛹后经过24h至86h。
5.根据权利要求1所述的家蚕无滞育期多化性品种的冬季安全保存方法，其特征在于蚕蛹个体注射剂量为0. 5μδ/蛹。
6.根据权利要求1所述的家蚕无滞育期多化性品种的冬季安全保存方法，其特征在于蚕蛹个体注射剂量为蛹。
7.根据权利要求1所述的家蚕无滞育期多化性品种的冬季安全保存方法，其特征在于蚕蛹个体注射剂量为Wg/蛹。
8.根据权利要求1所述的家蚕无滞育期多化性品种的冬季安全保存方法，其特征在于注射时期选择化蛹后经过24h，蚕蛹个体注射剂量为蛹。
9.根据权利要求1所述的家蚕无滞育期多化性品种的冬季安全保存方法，其特征在于注射时期选择化蛹后经过55h，蚕蛹个体注射剂量为蛹。
10.根据权利要求1所述的家蚕无滞育期多化性品种的冬季安全保存方法，其特征在于注射时期选择化蛹后经过86h，蚕蛹个体注射剂量为蛹。
全文摘要
本发明提供了一种家蚕无滞育期多化性品种的冬季安全保存方法，保存方法以微量注射器为注射工具，以人工合成的昆虫滞育激素的稀释液为注射液，采用在蚕蛹期注射人工合成的昆虫滞育激素，使无滞育期多化性蚕品种产下非遗传性的滞育卵，在冬季得到保存。本发明的保存方法克服了传统的无滞育期多化性蚕品种需要全年不间断地进行饲养才可以继代保存，特别是每年冬季没有桑叶生产给无滞育期多化性蚕品种的保存带来的困难。不仅降低了品种保存成本，而且避免了不同蚕品种对人工饲料适应性的不同而给无滞育期多化性蚕品种冬季保种带来的风险。
文档编号A01K67/04GK102217571SQ201110100668
公开日2011年10月19日 申请日期2011年4月21日 优先权日2011年4月21日
发明者孙平江, 宋红生, 张月华, 徐安英, 李木旺, 李龙, 钱荷英 申请人:江苏科技大学