专利名称：利用钴60辐射处理提高子实体产量和氨基酸总量的秀珍菇菌种生产方法
技术领域：
本发明涉及一种食用菌栽培技术，具体地讲是一种利用钴60辐射处理提高子实体产量和氨基酸总量的秀珍菇菌种生产方法(即一种利用钴60 (6tlCo-γ射线)辐射处理的秀珍菇菌种生产方法)。(二)、背景技术
秀珍菇(别名小平菇、姬菇，型态菇色近似凤尾菇)是热带和亚热带地区的一种食用菌，原产于印度，福建省的秀珍菇是从台湾引进并逐步发展起来，由于其菇形秀小、 白漂，口感柔嫩，美味爽口，营养丰富，富含蛋白质、多糖、粗脂肪、维生素和微量矿物质元素等，秀珍菇含有17种以上氨基酸，更为可贵的是，它含有人体自身不能制造，而在食物中通常又缺乏的苏氨酸、赖氨酸、亮氨酸等(非常适宜孕妇适当的食用)，秀珍菇鲜美可口，具有独特的风味，是一种高蛋白、低脂肪的营养食品，因此成为深受消费者喜爱的绿色健康食品。目前，秀珍菇栽培已成为我国食用菌产业的一个新兴品种，全国各地都在竞相发展秀珍菇生产，成为农民增产增收的一个重要途径。
当前，福建省的秀珍菇栽培主要以专业户为主的工厂化栽培模式，经过多年的发展，已经初具规模，并由此辐射到全国各地。据调查，福建省已成为全国最大的秀珍菇种植基地，其中罗源县的栽培面积在全国居于首位，拥有生产能力达100万包以上的企业6家， 15万包以上企业177家，一年的生产量达1亿袋左右，占全国市场份额的50%以上，年创产值4亿元。但随着产业的发展，由于重生产轻科技，在菌种选育、栽培技术、病虫害防治等方面未投入力量予以解决和提升，同时由于生产基地过于集中，导致了菌种褪化，黄枯病时常发生，菌袋杂菌污染率高，菌种产品优良率下降，使得经济效益没有得到保障，降低了专业户的积极性，也曾发生因菌种原因的法律纠纷，致使秀珍菇产业发展步伐趋缓。
众所周知，要发展食用菌产业，关键前提是优良菌种(或品种)先行，只有优良的菌种才能达到优质高产(食用菌菌种生产制作过程包括生产母种，也就是从子实体中提纯复壮获得母种(又称为一级种)；生产原种，即是指将母种扩繁到原种(二级种)；生产栽培种，有了原种还要把它扩大到栽培种(即三级种)，栽培种就是利用原种的菌丝体再扩大繁殖一次后成为可直接投入生产的菌种)，要突破我省目前的秀珍菇发展的窘境，必须进行秀珍菇的菌种改良，同时基于我省的秀珍菇发展现状，应以选育有利于工厂化栽培的高优品种为主，这是秀珍菇高产的第一个要素。但秀珍菇是近几年才发展起来的新兴品种，为此相关的研究工作多以秀珍菇的生物学特性、品种引种筛选、培养料的筛选、栽培管理及相关菌株的遗传特性研究为主，较少涉及秀珍菇优良菌种(秀珍菇新品种)选育，如农业部食用菌遗传育种重点开放实验室的有关科研人员对收集的秀珍菇菌株的某些生物学特性，是利用现代分子生物学技术RAPU对其遗传性状进行分析，8个秀珍菇菌株存在较大的遗传差异，亲缘关系相差较大。但也有浙江大学农业与生命技术学院和浙江省农科院园艺所的有关科研人员在生产中筛选了 “农秀1号”秀珍菇优良菌种(秀珍菇新品种)，发现它无论在食用价值、栽培、产量等方面均比通常栽培的平菇有更多的优点，菌丝生活活力旺盛，具有极强的腐生能力。岳阳职业技术学院生物科技系的有关科研人员研究了不同因素对秀珍菇原生质体分离与再生效果的影响，为建立秀珍菇原生质体制备的优化系统及秀珍菇细胞融合远缘杂交育种提供了有益参考。
另据调查，目前中国大陆栽培的秀珍菇品种主要是1998年从台湾引进的，距今已有10多年时间。期间，大多的经历均集中在发展秀珍菇的生产栽培及市场开发，尚未在秀珍菇优良菌种和品种的选育改良方面下大力气去研究，为此目前发现有的品种在引进多年后出现退化，表现为出菇期推迟，低温处理后出菇不齐，甚至不出菇，因此，为提高产品质量和竞争力，必须在优良菌种即秀珍菇新品种研究上下足功夫。另、钴60放射源的应用非常广泛，几乎遍及各行各业，在农业上，常用于辐射育种、刺激增产、辐射防治虫害和食品辐照保藏与保鲜等，但是还未见到利用钴60射线源辐射处理秀珍菇菌种的有关报道。(三)、发明内容
本发明的任务是提供一种利用钴60辐射处理提高子实体产量和氨基酸总量的秀珍菇菌种生产方法(即利用钴60 (6tlCo-Y射线)辐射处理的秀珍菇菌种生产方法)，使得不仅具有辐射处理方便，工艺简单，省工省力，有利秀珍菇菌种新品种选育改良，扩大秀珍菇生产规模，增加产量，达到稳产高产以取得较好社会经济效益，还有利增加各类氨基酸总量，进一步明显改善秀珍菇的营养品质。
本发明的创新思路是鉴于秀珍菇是一项无污染的绿色农业，可以长期发展，我省秀珍菇的发展多以集约化、工厂化栽培的居多，研究出优良的食用菌菌种，不仅可以带来一个产业的提升，创造巨大的经济效益，通过菌种上的改良，还能获得高产优质的秀珍菇菌株，其可以解决我省秀珍菇产业的面临的问题，为产业的发展提供种质资源，并降低生产成本，从而有利提升秀珍菇产业的出口竞争力，继续保持我省秀珍菇产业的龙头地位添砖加瓦。本发明是以如下技术方案实现的
本发明这种利用钴60辐射处理提高子实体产量和氨基酸总量的秀珍菇菌种生产方法，即一种利用钴60 (6tlCo-Y射线)辐射处理的秀珍菇菌种生产方法，该方法仍包括以下工艺步骤一是生产母种，也就是从秀珍菇子实体中提纯复壮获得母种(又称为一级种)、二是生产原种，也就是利用母种的菌丝体接入原种培养基中，扩大繁殖培养成原种 (又称二级种)、三是利用原种生产栽培种，就是利用原种的菌丝体再扩大繁殖一次后成为生产用的栽培种(即三级种)，其特征在于其中所述的在生产母种时，其制作的工艺步骤为备料，包括加工制作母种培养基，将母种培养基装入试管中；从长势良好的秀珍菇子实体中提纯复壮后获得母种(即一级母种)，将母种菌丝体接入母种培养基上；菌丝体满管后进行钴60 (6tlCo-Y)辐射诱变育种处理，辐射诱变时间为30-60分钟、辐射剂量掌控为 0. 4KGY-0. 6KGY (如 0. 5KGY 左右)。
本发明的上述技术特征可以进一步具体为
一、在所述的钴60 (6tlCo-Y)辐射诱变育种处理时，在进行辐照(即辐射)诱变前， 要多次重复定点测定剂量，辐射剂量分散度控制在5%之内；
二、在所述的钴60 (6tlC0-Y)辐射诱变育种处理时，由于钴60是放射性同位素，本身具有特定的半衰期，要根据其衰变规律计算出对应时间和对应点的剂量率，再按照设定剂量，最后确定辐照(即辐射)时间⑴；
三、在所述的进行钴60 (60Co- Y )辐射诱变育种操作处理时，具体是将装有菌种的试管放在试管架上，使之与射线方向垂直，辐照t/2时间(二分之一辐射诱变时间)后，降源，并将辐照中的试管连同试管架旋转180度，即将远离辐射源的一面转到正对辐射源的方向，再辐照t/2时间，以确保辐照剂量的均勻。
四、所述的母种培养基是采用PDA培养基。
利用本发明方法的钴60辐射(为辐射秀珍菇的专用fwCo-Y射线辐射剂量) 诱变育种处理后的秀珍菇菌种进行工厂化栽培生产(可按照秀珍菇常规生产栽培方法栽培)，经过有关部门分析测定，可以明显提高秀珍菇子实体产量和各类氨基酸总量，可使秀珍菇子实体产量和硫氨基酸总量、支链氨基酸总量、儿童氨基酸总量、必需氨基酸总量、鲜味氨基酸总量、甜味氨基酸总量和氨基酸总量分别提高为26. 87% -28. 76%, 37.20 % -62. 22 %,21. 38 % -28.08 %,55.08 % -77.60 %,26.63 % -30. 1822. 84% -30. 89%,30. 32% -33. 93%和 28. 26% -34. 69%。
具体实施方式
以下是利用本发明技术方案的一种具体实施例，本发明的这种利用钴60辐射处理提高子实体产量和氨基酸总量的秀珍菇菌种生产方法，即利用钴60 (6tlCo-Y射线)辐射处理的秀珍菇菌种生产方法，该方法仍包括以下工艺步骤一是生产母种，也就是从秀珍菇子实体中提纯复壮获得母种(又称为一级种)、二是生产原种，也就是利用母种的菌丝体接入原种培养基中，扩大繁殖培养成原种(又称二级种)、三是利用原种生产栽培种，就是利用原种的菌丝体再扩大繁殖一次后成为生产用的栽培种(即三级种)，其特征在于其中所述的在生产母种时，其制作的工艺步骤为备料，包括加工制作母种培养基，将母种培养基装入试管中；从长势良好的秀珍菇子实体中提纯复壮后获得母种(即一级母种)，将母种菌丝体接入母种培养基上；菌丝体满管后进行钴60辐射诱变育种处理，辐射诱变时间为 30—60分钟、辐射剂量掌控为0. 4KGY-0. 6KGY (如0. 5KGY左右)。
本发明的上述技术特征可以进一步具体为
一、在所述的钴60 (可简写为60Co)辐射诱变育种处理时，在进行辐照(即辐射) 诱变前，要多次重复定点测定剂量(为常规方法的定点测定)，辐射剂量分散度在控制在 5%之内。
二、在所述的钴60辐射诱变育种处理时，由于钴60是放射性同位素，本身具有特定的半衰期，要根据其衰变规律计算出对应时间和对应点的剂量率，再按照设定剂量，最后确定辐照(即辐射)时间⑴。
三、在所述的进行钴60辐射诱变育种操作处理时，具体是将装有菌种的试管放在试管架上，使之与射线方向垂直，辐照t/2时间(二分之一辐射诱变时间)后，降源，并将辐照中的试管连同试管架旋转180度，即将远离辐射源的一面转到正对辐射源的方向，再辐照t/2时间，以确保辐照剂量的均勻。
四、所述的母种培养基是采用PDA培养基(注常规PDA母种培养基配方比例是由马铃薯200g切成薄片，加水IOOOml、琼脂20g和白糖20g，经过水煮加热过滤等步骤制成)。
利用本发明方法的钴60辐射(为辐射秀珍菇的专用6tlCo-Y射线辐射剂量)诱变育种处理后的秀珍菇菌种进行工厂化栽培生产(可按照秀珍菇常规生产栽培方法栽培)，栽培配方为木屑58%，棉籽壳20%，麦皮20%,CaCO3I%，糖1%，ρΗ自然。试验按照 1 1.5的料水比加入培养料中拌勻后装入塑料袋，每袋装干料230g，套上封口环，环内塞棉花，高压灭菌。待料温度冷却至^rc左右接种(接入经过钴60辐射诱变育种处理后的秀珍菇菌种)，接种后的菌袋直立于培养室架上避光培养。培养温度22 23°C，空气相对湿度70 75%，菌丝满袋后移入栽培室。栽培室温度控制在18 21°C，空气相对湿度控制在90 93 %之间，待子实体菌盖长至2. 5cm左右，盖边缘内卷，孢子尚未弹射前采收(可作为测定样品)。其中子实体的蛋白质和氨基酸含量分别采用凯氏定氮法和日立8800型氨基酸自动分析测定，可达到前述的明显提高秀珍菇子实体中的产量和各类氨基酸总量。
权利要求
1.一种利用钴60辐射处理提高子实体产量和氨基酸总量的秀珍菇菌种生产方法，该方法包括以下工艺步骤一是生产母种，也就是从秀珍菇子实体中提纯复壮获得母种、二是生产原种，也就是利用母种的菌丝体接入原种培养基中，扩大繁殖培养成原种、三是利用原种生产栽培种，就是利用原种的菌丝体再扩大繁殖一次后成为生产用的栽培种，其特征在于其中所述的在生产母种时，其制作的工艺步骤为备料，包括加工制作母种培养基，将母种培养基装入试管中；从长势良好的秀珍菇子实体中提纯复壮后获得母种，将母种菌丝体接入母种培养基上；菌丝体满管后进行钴60辐射诱变育种处理，辐射诱变时间为30-60 分钟、辐射剂量掌控为0. 4KGY-0. 6KGY。
2.根据权利要求1所述的利用钴60辐射处理提高子实体产量和氨基酸总量的秀珍菇菌种生产方法，其特征在于在所述的钴60辐射诱变育种处理时，在进行辐照诱变前，要多次重复定点测定剂量，辐射剂量分散度在控制在5%之内。
3.根据权利要求1所述的利用钴60辐射处理提高子实体产量和氨基酸总量的秀珍菇菌种生产方法，其特征在于在所述的钴60辐射诱变育种处理时，要根据钴60衰变规律计算出对应时间和对应点的剂量率，再按照设定剂量，最后确定辐照时间(t)。
4.根据权利要求1所述的利用钴60辐射处理提高子实体产量和氨基酸总量的秀珍菇菌种生产方法，其特征在于在所述的进行钴60辐射诱变育种操作处理时，具体是将装有菌种的试管放在试管架上，使之与射线方向垂直，辐照t/2时间，即二分之一辐射诱变时间后，降源，并将辐照中的试管连同试管架旋转180度，即将远离辐射源的一面转到正对辐射源的方向，再辐照t/2时间，以确保辐照剂量的均勻。
5.根据权利要求1所述的利用钴60辐射处理提高子实体产量和氨基酸总量的秀珍菇菌种生产方法，其特征在于所述的母种培养基是采用PDA培养基。
全文摘要
一种利用钴60辐射处理提高子实体产量和氨基酸总量的秀珍菇菌种生产方法，包括以下工艺步骤生产母种、生产原种、利用原种生产栽培种，其特征是在生产母种时，其制作步骤为备料，包括制作母种培养基，将母种培养基装入试管中；从秀珍菇子实体中提纯复壮后获得母种，将母种菌丝体接入母种培养基上；菌丝体满管后进行钴60辐射诱变育种处理，辐射诱变时间为30-60分钟、辐射剂量掌控为0.4KGY-0.6KGY。与已有技术比较，本发明可明显提高秀珍菇子实体产量和各类氨基酸总量，包括硫氨基酸总量、支链氨基酸总量、儿童氨基酸总量、必需氨基酸总量、鲜味氨基酸总量、甜味氨基酸总量和氨基酸总量显著提高。
文档编号A01H1/06GK102499070SQ20111031757
公开日2012年6月20日 申请日期2011年10月17日 优先权日2011年10月17日
发明者叶大春, 彭瑞琴, 林怀礼, 江枝和, 王丹红, 王义祥, 王正荣, 翁伯琦, 肖淑霞, 郑向华, 鄢铮, 陈坚, 雷锦桂 申请人:福州市农业科学研究所, 福建省农业科学院土壤肥料研究所