专利名称：一种发酵床霉菌抑制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种复合型的霉菌抑制剂，具体地说是一种针对禽类粪便发酵床的霉菌抑制剂及其制备方法，属于霉菌抑制剂领域。
背景技术：
生态养殖的发展，促使了禽类发酵床的发展，但禽类粪便中水分很大，发酵床床体很低，所以很容易出现霉菌污染的现象。霉菌和霉菌毒素对畜禽的危害巨大，所以发酵床的霉囷抑制剂和霉囷毒素清除制剂的研究开发迫在眉睦。国内发酵床禽养殖技术最近几年刚刚开始，在发酵床中防霉剂的研究方面还没有看到具体的报道。但对于饲料的防霉工作国内外都做了很大的工作，为预防饲料贮存期间营养成分损失，防止饲料霉变并延长贮存时间，当饲料水分含量高于13%时，一般在贮存时都会添加防霉剂，用以降低饲料中霉菌的数量，抑制霉菌毒素产生。防霉剂除了有机化学药物外，还从中草药中提取有效成分作为天然霉菌抑制剂来对原材料保鲜。目前，对于发酵床的霉菌抑制剂产品，市场上多为有机物或无机物，成分单一，抗冲击能力不强，处理效果不佳。
发明内容
为了解决上述问题，本发明设计了一种发酵床霉菌抑制剂及其制备方法，该抑制剂是由有机物、无机物和微生物菌体混合搭配而成的针对发酵床霉菌抑制的复合物，对发酵床中产生的霉菌进行抑制，对霉菌产生的霉菌毒素进行吸附，减少霉菌和霉菌毒素对畜禽的危害，具有高强度抑制力和清除能力，发酵床霉菌中霉菌的清除率达90%以上，霉菌毒素吸附率为70%，且不影响发酵床中有益菌群的生长。本发明的技术方案为
一种发酵床霉菌抑制剂，由复合化学制剂和复合微生物菌剂组成；
所述复合化学制剂和复合微生物菌剂的质量g数与体积ml数比为I 3 I ；
所述复合化学制剂和复合微生物菌剂的复配质量体积比最佳为1:1;
所述复合化学制剂，由硅藻土、双醋酸钠、碘化钾组成；所述硅藻土、双醋酸钠、碘化钾的质量比为3 6 : I 2 : I 2;其中，优选为3 :1:1;
所述复合微生物菌剂由啤酒酵母菌iSac-charomyces cerevisiae)菌液、枯草芽孢杆舊{Bacillus菌液、德氏乳酸菌(Z.菌液组成；所述啤酒酵母菌
菌液、枯草芽孢杆菌菌液、德氏乳酸菌菌液的体积比为I 2 : 2 4 : 3 6，其中，优选为 I : 2 : 3。所述复合微生物菌剂为单菌种纯发酵，发酵后进行复配得到的。上述发酵床霉菌抑制剂的制备方法，包括以下步骤
(O按照上述配比混合硅藻土、双醋酸钠、碘化钾，得到复合化学制剂；
(2)分别制备啤酒酵母菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液、德氏乳酸菌菌液；所述啤酒酵母菌菌液的制备方法为所需培养基为酵母膏lO.Og、蛋白胨20.0g、葡萄糖20. 0g、蒸馏水IOOOml ;培养温度为28 38°C ;好氧发酵24 48h，得到啤酒酵母菌菌液；
所述枯草芽孢杆菌菌液的制备方法为所需培养基为蛋白胨15.0g、牛肉膏O. 50g、葡萄糖20. 0g、氯化钠5. 0g、蒸馏水1000ml ;培养温度为30 36°C ;好氧发酵48 72h，得到枯草芽孢杆菌菌液；
所述德氏乳酸菌菌液的制备方法为所需培养基为麦芽汁70mL、牛肉膏9. 99g、酵母膏5. 07 g、大豆蛋白粉5. 14 g、加水至1000ml、初始pH值为6. 27 ;培养温度为38 42°C;好氧发酵48 72h，得到德氏乳酸菌菌液；
(3)按照上述体积比混合啤酒酵母菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液、德氏乳酸菌菌液，得到复合微生物菌剂；
(4)将上述步骤(I)得到的复合化学制剂和上述步骤(3)得到的复合微生物菌剂按照上述质量g与体积ml比的比例要求混合即可。上述发酵床霉菌抑制剂的使用方法为使用时，按照复合化学制剂和复合微生物菌剂的质量g与体积ml比为I 3 1，按照污染发酵原料质量的0. 2%，混匀拌到霉变的发酵床原料里，达到抑制霉菌生长和吸附霉菌毒素的效果。硅藻土是由无定形的SiO2构成的多孔材料，结构中无同质取代现象，因硅藻土的纳米微孔数多，其孔隙中含有一定量的有机物，增强了对霉菌毒素的亲和力。双醋酸钠即双乙酸钠，分子内的单分子乙酸可以降低物质的pH值，并且与酯化合物相溶性较好，因而可以透过细胞壁，有效地渗透进入菌类组织的细胞中，干扰细胞间酶的相互作用，促使菌体蛋白质的变性，且改变细胞形态和结构，达到菌体脱水死亡目的，起到抗菌防腐的作用。 碘化钾能够增强组织的溶解和消化作用，抗真菌活性。酵母菌主要和霉菌在营养与空间的竞争、对病原菌的直接寄生作用及诱导寄主产生抗病性，酵母细胞壁能吸附黄霉菌毒素，从而去除已存在的霉菌毒素。枯草芽孢杆菌为拮抗病原微生物，能够维持和调整肠道微生态平衡；枯草芽孢杆菌可以产生有益代谢产物，使空肠内PH值下降，乳酸、丙酸、乙酸的含量上升，并且枯草芽孢杆菌具有较强的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性。乳酸菌在培养过程中产生能够乳酸，从而抑制霉菌的生长及毒素的产生；乳酸菌的细胞壁能吸附黄霉菌毒素，从而去除已存在的霉菌毒素。未来的防霉剂研究和开发应朝着优质高效、低成本的方向发展，从单一型向复合型发展，从化学合成防霉剂向天然防霉剂方向发展，防霉剂的载体由接触型向气雾型方向发展。因此，开发复合型天然防霉剂、菌体防霉剂和选择有利于防霉剂扩散的载体。提高防霉剂的使用效果，研制无毒副作用，无残留的绿色环保型饲料防霉剂将成为今后研究和开发的热点。
本发明的优点在于发酵床中霉菌的清除率达90%以上，霉菌毒素吸附率为70%，减少了霉菌和霉菌毒素对禽类的危害，解决了畜禽饲养过程中，由于环境因素或饲料因素而造成的畜禽霉菌或霉菌毒素中毒问题，达到药物治疗之功效，从而改变畜禽肠道菌群平衡问题，解决了现在畜禽养殖中，抗生素滥用问题，用普通的化学药品和微生态制剂共同作用，解决了只有抗生素才能解决的问题，从而减少或不用抗生素，达到养殖的无抗标准；由于近年来饲料向生物无抗饲料发展，可作为生物饲料的核心料。
具体实施例方式实施例I 一种发酵床霉菌抑制剂，由复合化学制剂和复合微生物菌剂组成；
所述复合化学制剂和复合微生物菌剂的质量g数与体积ml数比为3 I ；
所述复合化学制剂，由硅藻土、双醋酸钠、碘化钾组成；所述硅藻土、双醋酸钠、碘化钾的质量比为6:2:1;
所述复合微生物菌剂由啤酒酵母菌iSac-charomyces cerevisiae")菌液、枯草芽孢杆舊{Bacillus菌液、德氏乳酸菌(Z.菌液组成；所述啤酒酵母菌
菌液、枯草芽孢杆菌菌液、德氏乳酸菌菌液的体积比为I 2 2 4 3 6。所述复合微生物菌剂为单菌种纯发酵，发酵后进行复配得到的。实施例2
一种上述实施例I所述发酵床霉菌抑制剂的制备方法，包括以下步骤
(1)按照硅藻土、双醋酸钠、碘化钾的质量比6 2 I混合，得到复合化学制剂；
(2)分别制备啤酒酵母菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液、德氏乳酸菌菌液；
所述啤酒酵母菌菌液的制备方法为所需培养基为酵母膏10. Og、蛋白胨20. 0g、葡萄糖20. 0g、蒸馏水1000ml ;培养温度为28 38°C ;好氧发酵24 48h，得到啤酒酵母菌菌液；
所述枯草芽孢杆菌菌液的制备方法为所需培养基为蛋白胨15.0g、牛肉膏O. 50g、葡萄糖20. 0g、氯化钠5. 0g、蒸馏水IOOOml ;培养温度为30 36°C ;好氧发酵48 72h，得到枯草芽孢杆菌菌液；
所述德氏乳酸菌菌液的制备方法为所需培养基为麦芽汁70mL、牛肉膏9. 99g、酵母膏5. 07 g、大豆蛋白粉5. 14 g、加水至1000ml、初始pH值为6. 27 ;培养温度为38 42°C ；好氧发酵48 72h，得到德氏乳酸菌菌液；
(3)按照啤酒酵母菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液、德氏乳酸菌菌液的体积比I: 2 6混合，得到复合微生物菌剂；
(4)将上述步骤(I)得到的复合化学制剂和上述步骤(3)得到的复合微生物菌剂按照质量g与体积ml比为3 : I混合即可。实施例3
发酵床霉菌抑制剂的霉菌的清除率实验 一、仪器与设备
空气浴振荡器、蒸汽消毒器、电热恒温培养箱、表面皿、脱脂棉团、锥形瓶、接种环、电子天平。二、实验材料
实验菌种啤酒酵母菌cerevisiae)(山东大学微生物研究所提供)、枯草芽孢杆菌iBacillus subtil is、(山东大学微生物研究所提供)、德氏乳酸菌(Z.Delbrueckii )(中国科学院微生物研究所提供)；实验化学制剂硅藻土、双醋酸钠、碘化钾；
培养基饲料中霉菌总数的测定(GB\T13092-2006)中的高盐察氏培养基；
实验霉菌材料霉变的发酵床原料。三、实验方法
取霉变的发酵床原料2kg充分混匀，然后平均分成两份，其中一组为阳性对照组，另一组为空白对照组。在阳性对照组按照O. 2%的比例将实施例2得到的复合化学制剂和复合微生物菌剂充分搅拌混匀，空白对照组中不加任何物质。将处理过得阳性对照组和空白对照组装三角瓶，在室温条件下，处理48h。若不添加任何防霉剂，霉变发酵床原料的霉菌继续生长，若在霉变发酵床原料中添加防霉剂就会抑制其生长，防霉效果越好对霉菌的生长抑制作用也越大。等待霉菌总数的试验测定，根据结果差值计算出该抑制剂对霉菌生长的霉菌抑制率。四、实验步骤
1、取霉变的发酵床原料2kg充分混匀，然后平均分成两份，其中一组为阳性对照组，另一组为空白对照组。在阳性对照组按照O. 2%的比例将实施例2得到的复合化学制剂和复合微生物菌剂充分搅拌混匀，空白对照组中不加任何物质。将处理过得阳性对照组和空白对照组装三角瓶，在室温条件下，处理48h ；
2、48h后，以无菌操作称取实验霉菌材料检样各25g，分别放入两个含有225ml灭菌稀释液的玻璃三角瓶中，置振荡器上，摇荡30min，分别制出空白对照组和阳性对照组的I :10的稀释液；
3、用灭菌吸管吸取I:10的稀释液10ml，注入带玻璃珠的试管中，置微型混合器上混合3min,使霉菌孢子分散开；
4、用ImL无菌吸管吸取I: 10样品均液lmL，缓慢加入盛有9mL无菌蒸馏水的无菌试管中，用振荡器振荡，混合均匀，制成I :100的样品稀释均液；
5、按照4操作程序，制备10倍系列样品稀释液，每递增稀释一次，换用一次ImL无菌吸管。根据对样品活菌数量的估计，选择适宜稀释度的样品均液，进行接种计数；
6、取100、I000、10 000倍的稀释液各I ml入无菌平皿，每个稀释度做三个重复，再在培养皿中分别倒入10 15mL已融化并冷却至45 50°C的培养基，盖好平皿盖子，趁热轻轻转动培养皿，使菌液与培养基充分混合均匀，冷凝后在25 28°C恒温培养箱中倒置培养3d后开始观察。五、实验结果
I、计数结果见下表
权利要求
1.一种发酵床霉菌抑制剂，其特征在于由复合化学制剂和复合微生物菌剂组成； 所述复合化学制剂和复合微生物菌剂的质量g与体积ml比为I 3 I ； 所述复合化学制剂，由硅藻土、双醋酸钠、碘化钾组成；所述硅藻土、双醋酸钠、碘化钾的质量比为3 6 I 2 I 2 ; 所述复合微生物菌剂由啤酒酵母菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液、德氏乳酸菌菌液组成；所述啤酒酵母菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液、德氏乳酸菌菌液的体积比为I 2 2 4 3 6。
2.根据权利要求I所述的发酵床霉菌抑制剂，其特征在于所述复合化学制剂和复合微生物菌剂的复配质量体积比为1:1。
3.根据权利要求I所述的发酵床霉菌抑制剂，其特征在于所述硅藻土、双醋酸钠、碘化钾的质量比为3 : I : I。
4.根据权利要求I所述的发酵床霉菌抑制剂，其特征在于所述啤酒酵母菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液、德氏乳酸菌菌液的体积比为1:2:3。
5.根据权利要求I所述的发酵床霉菌抑制剂，其特征在于所述复合微生物菌剂为单菌种纯发酵，菌种发酵后进行复配得到的。
6.一种如权利要求1-5中任意一项所述的发酵床霉菌抑制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤 (O按照质量比称量硅藻土、双醋酸钠、碘化钾，并混合，得到复合化学制剂； (2)分别制备啤酒酵母菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液、德氏乳酸菌菌液； 所述啤酒酵母菌菌液的制备方法为所需培养基为酵母膏10. Og、蛋白胨20. 0g、葡萄糖20. 0g、蒸馏水1000ml ;培养温度为28 38°C ;好氧发酵24 48h，得到啤酒酵母菌菌液； 所述枯草芽孢杆菌菌液的制备方法为所需培养基为蛋白胨15.0g、牛肉膏O. 50g、葡萄糖20. 0g、氯化钠5. 0g、蒸馏水IOOOml ;培养温度为30 36°C ;好氧发酵48 72h，得到枯草芽孢杆菌菌液； 所述德氏乳酸菌菌液的制备方法为所需培养基为麦芽汁70mL、牛肉膏9. 99g、酵母膏.5.07 g、大豆蛋白粉5. 14 g、加水至1000ml、初始pH值为6. 27 ;培养温度为38 42°C;好氧发酵48 72h，得到德氏乳酸菌菌液； (3)按照啤酒酵母菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液、德氏乳酸菌菌液的体积比混合，得到复合微生物菌剂； (4)将上述步骤(I)得到的复合化学制剂和上述步骤(3)得到的复合微生物菌剂按照质量g与体积ml比混合即可。
全文摘要
本发明公开了一种发酵床霉菌抑制剂及其制备方法，所述制剂由复合化学制剂和复合微生物菌剂组成，通过将有机物和无机物混合得到复合化学制剂，通过对微生物进行单菌种纯发酵后混合得到复合微生物菌剂；本发明的优点在于所述抑制剂在发酵床中霉菌的清除率达90%以上，霉菌毒素吸附率为70%，减少了霉菌和霉菌毒素对禽类的危害，解决了畜禽饲养过程中，由于环境因素或饲料因素而造成的畜禽霉菌或霉菌毒素中毒问题，达到药物治疗之功效，从而改变畜禽肠道菌群平衡问题，解决了现在畜禽养殖中，抗生素滥用问题。
文档编号A01N37/02GK102613251SQ201210059010
公开日2012年8月1日 申请日期2012年3月8日 优先权日2012年3月8日
发明者燕淑海 申请人:燕淑海