专利名称：一种水产养殖用水体消毒剂及其使用方法
技术领域：
本发明涉及ー种消毒剤，尤其是ー种水产养殖池塘用消毒剤。
背景技术：
中国是水产养殖大国。据统计，我国水产养殖量占世界水产养殖总量的三分之ニ以上。然而，水产疾病问题一直是阻碍水产养殖业健康发展的严重问题。据不完全统计，我国每年水产养殖病害发病率在50%以上，损失率高达20%，造成直接经济损失达100亿元以上。近年来，随着高密度集约化养殖的发展，水产疾病日趋严重，从而给水产养殖业造成巨大的经济损失，其中由病毒疾病造成的损失也日益增加。在水产病害防控过程中，通过水体消毒杀灭水体或养殖动物体表的病原微生物(病毒、细菌等)以改善水生动物生存环境是有效防控水产病害的重要技术手段。目前，常见的水产消毒剂主要有卤素类(分别有含氯消毒剂、含溴消毒剂和含碘消毒剤)、酚醛醇类、酸碱类、季铵盐类等几大类，如中国专利CN03113687. 7 ( —种水产养殖用消毒剂组合物及其应用)、CN00115919. 4 (用于水产养殖业 的消毒剂)、CN200610015379. 9 ( ニ氧化氯消毒剂),CN200710028424. 9 (复合氧化胺络合碘消毒剂)、CN200310104184. 8 (水产专用三氯异氰尿酸复合消毒剂)XN200310104181. 4 (水产用双长链季铵络合碘异噻唑啉酮复合消毒剂)、CN200610031925. 8( —种高效、低成本ニ氧化氯消毒剂的生产方法)、CN200810179622. X( —种新型聚六亚甲基胍复方消毒剂及制备方法)和CN201110185495. 6 (池塘水体复合消毒剂及其应用)等。就目前来看，现有的消毒剂还存在许多不足之处，如含氯消毒剂易受水体有机物和酸碱度变化的影响，且对器具有腐蚀作用，对鱼体毒性也较大；季铵盐类杀菌效果易受水质硬度影响；碘制剂效果易受光线、温度等条件影响，且易挥发失效等(黄小丽和邓永強，2004)。目前生产上所用的大部分消毒剂种类単一、制剂单一、多数是从人药、兽药和水处理剂等方面转向而来，专门针对水产养殖池塘和水产养殖动物开发的消毒剂还很有限。此夕卜，随着人们对水产品质量的要求越来越高，开发高效、低毒、无残留、无公害的新型水产消毒剂也是大势所趋。
发明内容
本发明的目的是针对以上水体消毒剂存在的问题，提供一种既能有效杀灭水产养殖池塘中主要病原微生物，又对养殖动物无不良影响，且无残留的水产池塘消毒剂产品。为达到以上技术目的，本发明提供了以下技术方案本发明提供的水产养殖池塘水体消毒剂的组分及重量百分比范围分别是单过硫酸氢钾，45-75% ;氨基磺酸，15-25% ;苹果酸，3-15% ;氯化钠，2-10% ;多聚偏磷酸钠，1-3% ;黄连提取物，4-10%。制备时，将上述组成按重量百分比混合均匀即可。使用时,按照所需浓度配成水溶液使用。池塘彻底消毒时,其使用浓度为水体的1% ;表面消毒时，其使用浓度为O. 5% ;养殖池塘中细菌和病毒的常规控制时，其使用浓度为O. 5ppm ;疾病高发期使用时，其使用浓度为lppm。经实验结果证明，本发明产品具有如下优点(1)原料易得，配制简单；(2)可有效预防多种水产病菌，包括细菌(弧菌)、病毒和真菌、用于各类海、淡水鱼虾养殖；(3)使用方便、作用迅速，作用方式多祥；(4)对养殖动物安全的，对环境友好。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作进ー步的详述。本发明提供的水产池塘水体消毒剤，针对养殖虾塘水化学和病原微生物生理特点，选择高效的氧化剂单过硫酸氢钾作为消毒剂主要成分可对细菌和病毒进行有效杀灭；氯化钠在单过硫酸氢钾的氧化作用下产生氯气，并通过与氨基磺酸反应产生NHClSO3H，在水解作用下逐渐产生次氯酸进行水体的消毒反应，达到长久高效消毒的作用；且经消毒后，这些化学物质又转变成氯化钠，达到对水体和养殖动物无毒性、无残留的效果；此外，苹果酸作为ー种有机酸，添加到水体中可达到降低PH的作用，增强消毒剂的消毒效果；多聚偏·磷酸钠是ー种表面活性剂，可使消毒活性成分有效深入到有机物中，达到高效杀灭病毒和细菌的作用；黄连提取物的有效成分是盐酸小檗碱，经试验验证可有效杀灭水体中的病毒，且对养殖动物无毒副作用。实施例I :按照以下各组分重量百分比配制ー种水产养殖池塘用水体消毒剂单过硫酸氢钾，75% ;氨基磺酸，15% ;苹果酸，3% ;氯化钠，2% ;多聚偏磷酸钠，1% ;黄连提取物，4%。将上述组成按重量百分比混合均匀即可。使用以上实施例I所述的水体消毒剤，进行针对气单胞菌杀灭效果的实验。将消毒剂配制成浓度为O. 5ppm的消毒液；培养基为牛肉膏液体及固体培养基，pH7. 0±0. 2 ;所用试剂均为分析纯。供试菌株为气单胞菌标准菌株(Aeromonas hydrophila) ATCC7966 (购自中国农业微生物保藏中心)菌悬液的制备。将每株纯培养气单胞菌用单倍肉汤培养，经过增菌摇床过夜培养，取24h新鲜培养物加甘油置于_80°C冰箱中保存备用。试验前I天取出，保存于_80°C冰箱中的菌株，分别接种于营养琼脂斜面，置28°C温箱中培养24h后取出，用胰蛋白胨生理盐水溶液(TPS)洗下菌苔，制成菌悬液，分别取各菌悬液与有机干扰物(3%牛血清白蛋白)以I : I混合后制备成试验菌悬液,备用。配制试验用菌悬液，浓度为5X 105 5X 106cfu/ml。将消毒剂用蒸懼水稀释成浓度为O. lppm、0. 3ppm、0. 5ppm、lppm和2ppm的受试液，取各稀释度受试液2. 5ml加入到含2. 5ml双倍浓度营养肉汤的试管中。取O. Iml含菌量约为lX108cfu/ml的菌悬液接种于消毒剂的营养肉汤的试管中，作为试验组样本；以同样方法接种于不含消毒剂的营养肉汤的试管，作为阳性对照组样本；取2支只含营养肉汤的试管，作为阴性对照组样本。将试验组、阳性对照组及阴性对照组样本放置28°C培养箱中，培养24h，观察结果。通过细菌的生长与否，确定消毒剂抑制受试菌生长的最低浓度(MIC)。当阳性对照管有细菌生长(混浊)，阴性对照管无菌生长(透明)，试验用菌悬液的作用浓度为5X105 5X106cfu/ml时，试验组无菌生长的最高稀释度所对应的抑菌剂浓度为该样品对受试菌的MIC。最小杀菌浓度(MBC)的測定可在MIC測定试验的基础上进行。MIC测定试验培养24h后，观察結果，吸取试验组无菌生长的各个稀释度所对应的抗(抑)菌剂O. 5ml，加入含4. 5ml中和剂溶液管中，混匀，作用lOmin。吸取该最终样液
2.5ml，加入到含2. 5ml双倍浓度营养肉汤的试管中。同时设立阳性对照组、阴性对照组和中和剂对照组。将各试验组和对照组放置28°C培养箱中，培养24h，观察結果。当阳性对照管有细菌生长(混浊)，阴性对照管无菌生长(透明)，中和剂对照管无菌生长(透明)，试验组无菌生长的最高稀释度所对应的抗菌剂浓度为该样品对受试菌的MBC。实验结果显示，本发明消毒剂浓度在O. 3ppm以上吋，即可起到抑制气单胞菌的作用，当本发明消毒剂浓度在Ippm以上吋，即可起到杀灭气单胞菌的作用。说明该发明的消毒剂在较低浓度条件下对致病菌有较好的杀灭效果。实施例2:按照以下各组分重量百分比配制ー种水产养殖池塘用水体消毒剂单过硫酸氢钾，50% ;氨基磺酸，15% ;苹果酸，15% ;氯化钠，10% ;多聚偏磷酸钠，3% ;黄连提取物，7%。 将上述组成按重量百分比混合均匀即可。使用实施例2所述的水体消毒剤，2010年5月在杭州萧山某对虾池塘进行对虾养殖的实验。对虾放苗放养前15天，按照I %浓度配制消毒液对池塘进行全面消毒。然后按正常步骤投放对虾苗种及进行养殖。放苗后每15天，按照O. 5ppm浓度配制消毒剂对虾塘进行常规消毒。实验共进行123天，实验过程中对虾生长正常，全程未发现病毒性疾病及对虾猝死现象。实践证明使用该消毒剂对提高对虾养殖成功率，減少对虾病害发生有非常有效的作用。使用实施例2所述的水体消毒剤，进行针对水霉菌抑制效果的实验。挑取保藏于试管的水霉菌丝转接于马铃薯葡萄糖琼脂培养基(即PDA，马铃薯块200-300g、葡萄糖20g、琼脂20g、水IOOOmL)平板上，25°C下培养48h。待铺满整个培养皿后，用O. Olmol/L的PBS缓冲液洗涤3次，经4层纱布过滤，加入pH值为7. 4的M199细胞培养液，分别调整孢子浓度为1*104、1*106、1*108个/mL，待用。以不同梯度浓度的消毒剂2mL加至18mL，经溶化，56°C的马铃薯葡萄糖琼脂培养基使之均匀，迅速倾倒于培养皿中待凝固后用于实验，即药物PDA平板浓度为原浓度的1/10。采用多点接种方法，每点接种IuL水霉孢子菌悬液于凝固的培养基上。设空白对照组，25°C下培养5d。孵育期内每24h观察I次，肉眼判定无菌落生长的培养皿内的最低药物浓度为MIC (最低抑菌浓度)。每个浓度设2个对照，同时设不加药液的空白PDA培养基为对照。将经马铃薯葡萄糖琼脂培养基培养48h后，铺满平板的水霉用无菌刀片切成约l、2、3cm2的小块，将切好的水霉小块放入盛有各种浓度消毒剂倍释液的试管中浸泡O. 17、0.5、l、2h。用无菌镊子取出浸泡过的水霉小块置于马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，25°C下培养观察5d。孵育期每24h观察一次，肉眼判定无水霉菌落生长的，表示此种消毒剂在该浓度该作用时间下对水霉具有杀灭作用。每个浓度设2个对照，同时设经生理盐水浸泡过的水霉块空白对照。实验结构显示浓度为O. 5ppm以上的消毒剂溶液对水霉病菌丝有明显的抑制作用。实施例3 按照以下各组分重量百分比配制ー种水产养殖池塘用水体消毒剂单过硫酸氢钾，45% ;氨基磺酸，25% ;苹果酸，15% ;氯化钠，2% ;多聚偏磷酸钠，3% ;黄连提取物，10%。
将上述组成按重量百分比混合均匀即可。使用实施例3所述的水体消毒剂，进行针对草鱼呼肠孤病毒(Grass carpreovirus,GCRV)杀灭效果的实验。草鱼呼肠孤病毒用草鱼肾脏(CIK)细胞培养，维持液为无血清DMEM培养基(含TPCK处理胰酶2g/ml、2%胎牛血清)。按Reed-Meuench计算病毒对细胞半数感染剂量(TCID50)。用维持液2倍系列稀释消毒剂12个稀释度，加入到CIK细胞96孔培养板中，26°培养箱培养，每天观察细胞病变。确定对细胞无毒性的消毒剂最高稀释度。用维持液2倍系列稀释I : 2、1 : 4、1 : 8、1 : 16、1 : 32五个浓度，共稀释三组。消毒剂每组的5个浓度分别与草鱼呼肠孤病毒(100TCID50/0. Iml)按9 : I的比例混合作用，每组作用时间不同，分别5min、10min、30min。作用一定时间后,用维持液做10倍系列稀释，加入到96孔CIK细胞板中滴定样品中的残留病毒量，每个稀释度3孔，26°培养箱培养3d，观察细胞病变。根据Reed-Meuench法确定消毒剂每一浓度不同时间的病毒感染滴度(TCID50)。在测试消毒剂灭活病毒实验的同时，测试50%乙醇灭活病毒的作用，方 法与消毒剂的测试方法相同。试验结果显示，O. 5ppm及以上浓度的消毒剂对草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus, GCRV)有明显的杀灭效果。2倍系列稀释的消毒剂与草鱼呼肠孤病毒作用5min、10min和30min，观察细胞病变判断指标确定各组的病毒感染滴度。计算消毒剂对草鱼呼肠孤病毒的平均灭活对数值，确定消毒剂实验室消毒合格的浓度和作用时间。结果显示消毒剂作用于草鱼肾(CIK)细胞的最大无毒浓度为I : 200。I : 2、1 : 4和I : 8稀释的消毒剂与草鱼呼肠孤病毒作用5min、IOmin和30min的平均灭活对数值>4.00。实验结果表明该消毒剂I : 2、I 4、I 8与病毒作用5min后可以100%杀草鱼呼肠孤病毒。上述实施例中，上述黄连提取物可以选择亳州市乾元动物药业有限责任公司生产的类似产品(含盐酸小檗碱30% )。实验结果显示，本发明提供的水产养殖池塘水体消毒剂针对性强，具有高效、低毒、无残留、无公害的特点。以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明保护的范围之内。
权利要求
1.一种水产养殖池塘水体消毒剂，各组分按重量百分比包括 单过硫酸氢钾，45-75% ； 氨基磺酸，15-25% ； 苹果酸，3-15% ； 氯化钠，2-10% ； 多聚偏磷酸钠，1-3% ； 黄连提取物，4-10%。
2.根据权利要求I所述的水产养殖池塘水体消毒剂，其特征在于，各组分按重量百分比包括 单过硫酸氢钾，75% ； 氨基磺酸，15% ； 苹果酸，3% ； 氯化钠，2% ； 多聚偏磷酸钠，I % ; 黄连提取物，4%。
3.根据权利要求I所述的水产养殖池塘水体消毒剂，其特征在于，各组分按重量百分比包括 单过硫酸氢钾，50% ； 氨基磺酸，15% ； 苹果酸，15% ； 氯化钠，10% ； 多聚偏磷酸钠，3% ； 黄连提取物，7%。
4.根据权利要求I所述的水产养殖池塘水体消毒剂，其特征在于，各组分按重量百分比包括 单过硫酸氢钾，45% ； 氨基磺酸，25% ； 苹果酸，15% ； 氯化钠，2% ； 多聚偏磷酸钠，3% ； 黄连提取物，10%。
5.权利要求1-4所述的水产养殖池塘水体消毒剂的使用方法，其特征在于，池塘彻底消毒时，其使用浓度为水体的1%。
6.权利要求1-4所述的水产养殖池塘水体消毒剂的使用方法，其特征在于，表面消毒时，其使用浓度为水体的O. 5%。
7.权利要求1-4所述的水产养殖池塘水体消毒剂的使用方法，其特征在于，养殖池塘中细菌和病毒的常规控制时，其使用浓度为O. 5ppm。
8.权利要求1-4所述的水产养殖池塘水体消毒剂的使用方法，其特征在于，疾病高发期使用时，其使用浓度为lppm。
全文摘要
本发明涉及一种水产养殖池塘用消毒剂。本发明提供的水产养殖池塘水体消毒剂各组分按重量百分比包括单过硫酸氢钾，45-75％；氨基磺酸，15-25％；苹果酸，3-15％；氯化钠，2-10％；多聚偏磷酸钠，1-3％；黄连提取物，4-10％。本发明提供的水产养殖池塘水体消毒剂具有高效、低毒、无残留、无公害的特点。
文档编号A01N59/00GK102835424SQ201210363610
公开日2012年12月26日 申请日期2012年9月25日 优先权日2012年9月25日
发明者许丹, 吕利群, 沈晓宝 申请人:上海海洋大学