专利名称：一种草莓根尖脱毒与组培方法
技术领域：
本发明涉及植物脱毒与组培技术领域，尤其一种草莓根尖脱毒与组培方法。
背景技术：
草莓作为一种经济作物，其种苗的茎尖脱毒组培快繁，是一种常规采用的技术。但在草莓茎尖组培快繁的过程中，存在有操作难度大、工作效率低(在显微镜下，用手术工具剥离O. 02mm茎尖)，难以彻底消毒，组培苗污染率高。至目前，关于采用以草莓的根尖为外植体进行脱毒和组培的技术，尚未见有成熟技术的文献报导。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种草莓根尖脱毒与组培方法，可以解决草莓 组培传统茎尖脱毒技术所存在的效率低、消毒难彻底、组培苗污染率高等问题，操作效率高、消毒彻底、组培苗污染率低。为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是一种草莓根尖脱毒与组培方法，该方法包括以下步骤
I)培养基的制备以MS培养基为基本培养基，附加6 -苄氨基嘌呤5 7. 5mg/L, 2，4 -二氯苯氧乙酸O. 3 O. 5mg/L后制得pH值为5. 8 6. O的根尖诱导培养基；
以MS培养基为基本培养基，附加6-苄氨基嘌呤5 7. 5mg/L，a-萘乙酸O. 2
O.5mg/L后制得pH值为5. 8 6. O的继代增殖培养基；
以1/2MS培养基为基本培养基，附加吲哚乙酸O. 2 O. 5mg/L后制得pH值为5. 8 6. O的生根培养基；
2)材料预处理和根尖外植体的选取、灭菌将草莓放入灭菌细沙内于38°C ±2°C下进行热处理4 6周至抽生出新根系；取I 2cm长主根根尖，用无菌滤纸吸干表面水分，在显微镜下将主根根尖前端长I 2mm的根尖切下作为外植体；
3)根尖诱导再生植株培养将外植体接种在根尖诱导培养基上，在28±2°C、光强8001ux、光照12小时/d下培养，至四周后其余条件不变光强增强到16001uX，六周后光强增强到32001uX，八周后光强减弱到12001uX下继续培养直至从根尖诱导出再生植株幼芽，此阶段总共需培养2 3个月；
4)幼芽增殖培养将植株幼芽接种在继代增殖培养基上，在28±2°C，光强2000 30001ux、光照12小时/d下培养至长成8 IOcm长小苗；
5)继代生长培养将小苗剪成2 2.5cm长小段接种在生根培养基上，在28±2°C，光强2000 30001ux、光照12小时/d下培养至长成8 IOcm长小苗；以后每隔3 4周将小苗按同上述方法进行一次继代扩繁，直到满足苗数要求；
6)生根培养将继代扩增小苗接种在生根培养基上，在28±2°C，光强2000 30001ux、光照12小时/d下培养，I周后长出根系成为完整试管苗。步骤2)中，对长主根根尖消毒的方法为放入70%酒精中浸泡30秒，再用质量百分浓度为 ο. 5%次氯酸钠溶液消毒8分钟及无菌水洗6次。MS培养基的成分为(mg/L)
i) NH4NO3 33000、KNO3 38000、CaCl2 · 2H20 8800、MgSO4 · 7H20 7400、KH2PO4 3400 ；
ii) KI 166、H3BO3 1240、MnSO4 · 4H20 4460、ZnSO4 · 7H20 1720、Na2 · MoO4 · 2H20 50、CuSO4 · 5H20 5、CaCl2 · 6H20 5 ；
iii) FeSO4 · 7H20 5560、Na2 · EDTA · 2H20 7460 ；
将配制好的MS培养基用水稀释两倍后得到1/2MS培养基。本发明提供的一种草莓根尖脱毒与组培方法，有益效果如下 I、操作容易，效率显著提高因为现有的草莓采用种苗的茎尖脱毒组培快繁技术，但在茎尖组培快繁的过程中，用手术工具剥离O. 02mm茎尖是一项难度较大且工作效率低的工作，而草莓的根尖直接暴露在外，在显微镜下切除其根尖的尖端就十分容易，效率大大提闻。2、消毒彻底、组培苗污染率低茎尖脱毒由于其外围茎片不易清除，消毒难以彻底，导致组培苗污染率往往高达60%左右；而根尖脱毒由于其外围无任何包裹，消毒容易彻底，组培苗污染率低。3、简化了操作，提高了工作效率，且接种体分化好，试管苗繁殖速度快，脱毒彻底，草莓长势良好。
具体实施例方式一种草莓根尖脱毒与组培方法，该方法包括以下步骤
1)培养基的制备以MS培养基为基本培养基，附加6-苄氨基嘌呤5 7. 5mg/L, 2，4 -二氯苯氧乙酸O. 3 O. 5mg/L后制得pH值为5. 8 6. O的根尖诱导培养基；
以MS培养基为基本培养基，附加6-苄氨基嘌呤5 7. 5mg/L，a-萘乙酸O. 2 O. 5mg/L后制得pH值为5. 8 6. O的继代增殖培养基；
以1/2MS培养基为基本培养基，附加吲哚乙酸O. 2 O. 5mg/L后制得pH值为5. 8 6. O的生根培养基；
2)材料预处理和根尖外植体的选取、灭菌将草莓放入灭菌细沙内于38°C±2°C下进行热处理4 6周至抽生出新根系；取I 2cm长主根根尖，用无菌滤纸吸干表面水分，在显微镜下将主根根尖前端长I 2mm的根尖切下作为外植体；
3)根尖诱导再生植株培养将外植体接种在根尖诱导培养基上，在28±2°C、光强8001ux、光照12小时/d下培养，至四周后其余条件不变光强增强到16001uX，六周后光强增强到32001uX，八周后光强减弱到12001uX下继续培养直至从根尖诱导出再生植株幼芽，此阶段总共需培养2 3个月；
4)幼芽增殖培养将植株幼芽接种在继代增殖培养基上，在28±2°C，光强2000 30001ux、光照12小时/d下培养至长成8 IOcm长小苗；
5)继代生长培养将小苗剪成2 2.5cm长小段接种在生根培养基上，在28±2°C，光强2000 30001ux、光照12小时/d下培养至长成8 IOcm长小苗；以后每隔3 4周将小苗按同上述方法进行一次继代扩繁，直到满足苗数要求；
6)生根培养将继代扩增小苗接种在生根培养基上，在28±2°C，光强2000 30001ux、光照12小时/d下培养，I周后长出根系成为完整试管苗。步骤2)中，对长主根根尖消毒的方法为放入70%酒精中浸泡30秒，再用质量百分浓度为10. 5%次氯酸钠溶液消毒8分钟及无菌水洗6次。MS培养基的成分为(mg/L)
i) NH4NO3 33000、KNO3 38000、CaCl2 · 2H20 8800、MgSO4 · 7H20 7400、KH2PO4 3400 ；
ii) KI 166、H3BO3 1240、MnSO4 · 4H20 4460、ZnSO4 · 7H20 1720、Na2 · MoO4 · 2H20 50、CuSO4 · 5H20 5、CaCl2 · 6H20 5 ；
iii) FeSO4 · 7H20 5560、Na2 · EDTA · 2H20 7460 ；
将配制好的MS培养基用水稀释两倍后得到1/2MS培养基。
权利要求
1.一种草莓根尖脱毒与组培方法，其特征在于该方法包括以下步骤 1)培养基的制备以MS培养基为基本培养基，附加6-苄氨基嘌呤5 7. 5mg/L, 2，4 -二氯苯氧乙酸O. 3 O. 5mg/L后制得pH值为5. 8 6. O的根尖诱导培养基； 以MS培养基为基本培养基，附加6-苄氨基嘌呤5 O. 75mg/L，a -萘乙酸O. 2 O.5mg/L后制得pH值为5. 8 6. O的继代增殖培养基； 以1/2MS培养基为基本培养基，附加吲哚乙酸O. 2 O. 5mg/L后制得pH值为5. 8 6.O的生根培养基； 2)材料预处理和根尖外植体的选取、灭菌将草莓放入灭菌细沙内于38°C±2°C下进行热处理4 6周至抽生出新根系；取I 2cm长主根根尖，消毒后吸干表面水分，将主根根尖前端长I 2mm的根尖切下作为外植体；3)根尖诱导再生植株培养将外植体接种在根尖诱导培养基上，在28±2°C、光强8001ux、光照12小时/d下培养，至四周后其余条件不变光强增强到16001uX，六周后光强增强到32001uX，八周后光强减弱到12001uX下继续培养直至从根尖诱导出再生植株幼芽，此阶段总共需培养2 3个月； 4)幼芽增殖培养将植株幼芽接种在继代增殖培养基上，在28±2°C，光强2000 30001ux、光照12小时/d下培养至长成8 IOcm长小苗； 5)继代生长培养将小苗剪成2 2.5cm长小段接种在生根培养基上，在28±2°C，光强2000 30001ux、光照12小时/d下培养至长成8 IOcm长小苗；以后每隔3 4周将小苗按同上述方法进行一次继代扩繁，直到满足苗数要求； 6)生根培养将继代扩增小苗接种在生根培养基上，在28±2°C，光强2000 30001ux、光照12小时/d下培养，I周后长出根系成为完整试管苗。
2.根据权利要求I所述的一种草莓根尖脱毒与组培方法，其特征在于步骤2)中，对长主根根尖消毒的方法为放入70%酒精中浸泡30秒，再用质量百分浓度为10. 5%次氯酸钠溶液消毒8分钟及无菌水洗6次。
全文摘要
一种草莓根尖脱毒与组培方法，该方法包括以下步骤1)培养基的制备；2)材料预处理和根尖外植体的选取、灭菌；3)根尖诱导再生植株培养；4)幼芽增殖培养；5)继代生长培养；6)生根培养。本发明提供的一种草莓根尖脱毒与组培方法，可以解决草莓组培传统茎尖脱毒技术所存在的效率低、消毒难彻底、组培苗污染率高等问题，操作效率高、消毒彻底、组培苗污染率低。
文档编号A01H4/00GK102893866SQ20121038937
公开日2013年1月30日 申请日期2012年10月15日 优先权日2012年10月15日
发明者刘开红 申请人:长阳勤劳农夫农产品有限公司