专利名称：金线莲无激素种苗快繁有机生产方法
技术领域：
本发明涉及农业科学领域，尤其是一种金线莲无激素种苗快繁有机生产方法。
背景技术：
我国兰科(Orchidaceae)开唇兰属ClffoeciocAiJiAs BI.)有23种左右,其中部分种全草民间作药用，为珍稀名贵中药材，通称金线莲。金线莲为多年生地生草本植物，现研究开发的有金线兰roxburghii (Wall.) Lindl.),又名花叶开唇兰；台iMi^nAnoectochilus formosanus Hayata)又名金线莲(台湾植物志)、台湾金线莲(台湾植物志、台湾兰科植物彩色图志)\头匕金钱SHAnoectochiIus xingrenensis Z. H. Tsiet X. H. Jin)等。民间多用于治疗糖尿病、高血脂、乙型肝炎等疾病，有“药王”“金草”之称。据研究报道，金线莲富含有多糖、微量元素、强心苷类、氨基酸、有机酸、留体化合物、黄酮类化合物、生物碱等多种成分，其中生物碱有较强的生物活性，如镇痛等。药效学研究证实了 金线莲全草水煎液具有优良的降血糖作用，所含丰富的微量元素、氨基酸、多糖等具有抗衰老、提高机体免疫能力的作用。金线莲种子在野外只有在真菌共生的情况下才能萌发，萌发率极低。由于市场需求巨大，野生金线莲受到竭泽而渔式的采挖，已造成野生资源的枯竭。近年来，金线莲组培技术和人工种植技术获得突破，通过丛生芽培养等组培技术可获得大量种苗。金线莲作为一种价格昂贵的保健类中药材，产品质量和安全更为重要，现有组培技术均添加植物激素，会造成激素富集到金线莲种苗中，由于人工种植金线莲从种植到采收的时间较短，激素残留难以解决，产品质量达不到有机产品的标准。
发明内容
本发明的目的是提供一种金线莲无激素种苗快繁有机生产方法，它在培养过程中不添加任何激素，能获得绿色的优质金线莲种苗，产品能达到有机标准。本发明是这样实现的金线莲无激素种苗快繁有机生产方法，包括以下步骤 步骤一、种子无菌萌发将金线莲蒴果进行消毒处理后取出种子，将取出的种子接种于
培养基I上进行培养，至种子萌发成原球茎；
步骤二、原球茎增殖分化将种子萌发形成的原球茎转到培养基II上进行增殖分化培
养;
步骤三、壮苗生根在原球茎分化出芽长至I. 5 2. 5cm高时，转入培养基III上进行壮苗生根培养，当苗长到5 6cm高、根长2 3cm时进行炼苗移栽。步骤一中所述的培养基I为1/2MS培养基，蔗糖为30g/L，活性炭为O. 5 lg/L，琼脂为6g/L，PH为5. 8。步骤二中增殖分化培养基II为MS培养基，蔗糖为30g/L，活性炭为O. 5 Ig/L,琼脂为6g/L，马铃薯汁为100 150g/L, PH为5. 8。步骤三中壮苗生根培养基III为MS培养基，蔗糖为30g/L，活性炭为O. 5 Ig/L,琼脂为6g/L，马铃薯汁为50 100g/L,香蕉泥为100 150g/L, PH为5. 8。
所有的培养条件均为温度为25±2°C，光照为1500 2500Lx，光照时间为12h/d0由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，本发明采用“种子一原球茎一种苗”的技术路线，在培养过程中使用的培养基不加入任何激素，在保证金线莲种子能快速出苗的基础上，又能保证广出的种苗不会残留超标，能为生广金线莲有机广品提供优质种苗。本发明方法简单，易于产业化，使用效果好。
具体实施例方式
具体实施例方式金线莲无激素种苗快繁有机生产方法，包括以下步骤
步骤一、种子无菌萌发在金线莲开花后，选择健壮的植株，通过人工辅助受粉获得蒴
果，在受粉5个月后，蒴果尖部开如变黄时即可取下进行播种，暂时不用的蒴果可对表面进行消毒，用保鲜袋保存于冰箱里；将用于播种的金线莲蒴果用自来水洗净，用75%的酒精表面消毒30s，再用O. 1%的升汞液消毒15min，无菌水冲洗5次，再浸入95%的酒精ls，取出后于酒精灯上点燃，烧尽表面酒精后，在超净工作台上剖开蒴果取出种子，将取出的种子接种于1/2MS培养基上进行培养，培养20天胚开始萌发，变绿，逐步膨大成原球茎。采用的1/2MS培养基中，蔗糖为30g/L，活性炭为O. 5 lg/L，琼脂为4 6g/L，PH为5. 8 ;
步骤二、原球茎增殖分化当原球茎长至在培养基表面形成致密的颗粒状后，转到培养基II上及时进行增殖分化培养；转接的次数和时间视情况而定，主要依据一是当培养瓶里的原球茎或芽过密时要及时转瓶，确保有足够的生长空间；二是培养超过3个月或培养基明显减少，养分不足时要及时转瓶；增殖分化培养采用的培养基II为MS培养基，其中蔗糖为30g/L，活性炭为O. 5 lg/L,琼脂为4 6g/L，马铃薯汁为100 150g/L, PH为5. 8 ；步骤三、壮苗生根当金线莲芽长至2 3cm时，及时转入培养基III进行壮苗生根培养；接种要选择生长一致的芽接在一瓶，芽之间的间距I. 5cm，确保有足够的生长空间；培养基III为MS培养基，其中蔗糖为30g/L，活性炭为O. 5 lg/L，琼脂为4 6g/L，马铃薯汁为50 100g/L,香蕉泥为 100 150g/L, PH 为 5. 8 ；
步骤四、炼苗移栽当苗长至5 6cm，根长2 3cm时，将培养瓶移到常温大棚炼苗10天左右，从瓶里小心将苗取出，清洗干净植株上的培养基后进行移栽；种植基质以草炭土或腐殖土为最佳；
以上所有的培养条件均为温度为25±2°C，光照为1500 2500Lx，光照时间为12h/
d0培养基配制可用自来水、纯净水或深井水。琼脂用量可根据其质量酌情调整，有的琼脂粉每升用4g就足够了，蔗糖用食用白砂糖。马铃薯汁和香蕉泥的制备选品质较好不变质的马铃薯，将皮削净，去除芽眼，切成适当小块，用家用打浆机打出汁液(要过滤汁液)；香蕉泥直接用打浆机打碎即可。MS培养基的配制(见表I )，1/2MS培养基的配制在MS的基础上大量元素减半，微量元素及其他不变(见表2)
表 I MS (Murashige 和 Skoog, 1962)培养基
权利要求
1.一种金线莲无激素种苗快繁有机生产方法，其特征在于包括以下步骤 步骤一、种子无菌萌发将金线莲蒴果进行消毒处理后取出种子，将取出的种子接种于培养基I上进行培养，至种子萌发成原球茎； 步骤二、原球茎增殖分化将种子萌发形成的原球茎转到培养基II上进行增殖分化培养; 步骤三、壮苗生根在原球茎分化出芽长至I. 5 2. 5cm高时，转入培养基III上进行壮苗生根培养，当苗长到5 6cm高、根长2 3cm时进行炼苗移栽。
2.根据权利要求I所述的金线莲无激素种苗快繁有机生产方法，其特征在于步骤一中所述的培养基I为1/2MS培养基，蔗糖为30g/L，活性炭为O. 5 lg/L，琼脂为6g/L，PH为 5. 8。
3.根据权利要求I所述的金线莲无激素种苗快繁有机生产方法，其特征在于步骤二中增殖分化培养基II为MS培养基，蔗糖为30g/L，活性炭为O. 5 lg/L，琼脂为6g/L，马铃薯汁为100 150g/L, PH为5. 8。
4.根据权利要求I所述的金线莲无激素种苗快繁有机生产方法，其特征在于步骤三中壮苗生根培养基III为MS培养基，蔗糖为30g/L，活性炭为O. 5 lg/L，琼脂为6g/L，马铃薯汁为50 100g/L,香蕉泥为100 150g/L, PH为5. 8。
5.根据权利要求I所述的金线莲无激素种苗快繁有机生产方法，其特征在于所有的培养条件均为温度为25±2°C，光照为1500 2500Lx，光照时间为12h/d。
全文摘要
本发明公开了一种金线莲无激素种苗快繁有机生产方法，包括以下步骤步骤一、种子无菌萌发将金线莲蒴果进行消毒处理后取出种子，将取出的种子接种于培养基Ⅰ上进行培养，至种子萌发成原球茎；步骤二、原球茎增殖分化将种子萌发形成的原球茎转到培养基Ⅱ上进行增殖分化培养；步骤三、壮苗生根在原球茎分化出芽长至1.5～2.5cm高时，转入培养基Ⅲ上进行壮苗生根培养，当苗长到5～6cm高、根长2～3cm时进行炼苗移栽。本发明采用“种子→原球茎→种苗”的技术路线，在培养过程中使用的培养基不加入任何激素，在保证金线莲种子能快速出苗的基础上，又能保证产出的种苗不会残留超标，能为生产金线莲有机产品提供优质种苗。
文档编号A01H4/00GK102884982SQ201210426579
公开日2013年1月23日 申请日期2012年10月31日 优先权日2012年10月31日
发明者罗晓青, 张显波 申请人:贵州省亚热带作物研究所