专利名称：专性孤雌繁殖的轮虫种群培育方法
技术领域：
本发明涉及一种轮虫种群的培育方法，尤其是一种可显著提高轮虫培养密度、提高轮虫生产效率、缩小养殖水体积、降低生产成本的专性孤雌繁殖的轮虫种群培育方法。
背景技术：
不论是海水鱼还是淡水鱼，在育苗及幼体培育期间，其开口活饵料主要选用轮虫。按照每尾育苗每天摄食20飞0只轮虫来计算，I个生产5000万尾鱼苗的中小型育苗企业，每天对轮虫的需求量就需要达到15 25亿只，按照1:1的比例采收轮虫来计算，育苗单位每天需要生产25 50亿只轮虫。轮虫包括海水的褶皱臂尾轮虫和淡水的萼花臂尾轮虫，是一种周期性孤雌繁殖动物，生活史由孤雌繁殖和有性繁殖两部分构成。通常情况下，轮虫通过高效的孤雌繁殖过程增加种群数量，但是在特定环境(如水体中轮虫密度超过1(T20只/毫升等不利环境)条件下，则启动有性繁殖，产生休眠卵来抵御不良环境条件。有性繁殖的产生大大限制了种群繁殖的效率，甚至有崩溃的危险，从而限制了轮虫的产量，所带来的是活饵料供应不足的问题。而为了避免轮虫有性繁殖，就必需将轮虫培育水体的培养密度限制为20只/毫升以下，随之就需要增加培养轮虫的水体，占用了大量养殖空间，使得育苗成本加大。
发明内容
本发明是为了解决现有技术存在的上述技术问题，提供一种可显著提高轮虫培养密度、提高轮虫生产效率、缩小养殖水体积、降低生产成本的专性孤雌繁殖的轮虫种群培育方法。本发明的技术解决方案是一种专性孤雌繁殖的轮虫种群培育方法，其特征在于按如下步骤进行
a.取轮虫的休眠卵放置于500毫升的培养液中，置于温度24度，光照30001x，光周期16 8的环境条件下孵化3-5天；
b.将孵化出来的轮虫进行单个体扩大培养，投喂微绿球藻密度为100万细胞 200万细胞/毫升培养液，温度24度，光照30001x，光周期16 8 ；
c.挑取100只新孵化出的个体分别进行扩大培养，形成100个克隆种群，每个克隆种群培养液体积为2000毫升，每天更新一次培养液和饵料；
d.当克隆种群的轮虫密度达到I只/毫升时，向各克隆种群培养液中加入a-生育酚，加入量为20微克/毫升培养液，继续进行扩大培养，同时每天更新一次培养液和饵料，并维持培养液中a -生育酚的浓度；当克隆种群的轮虫密度达到3 10只/毫升，将每个克隆种群的轮虫密度浓缩至100只/毫升，同时调整a -生育酚的浓度为100微克/毫升培养液，培养10 15天；
e.从100个克隆种群中，筛选出25 35个有性生殖比率小于1%的克隆种群，用脉冲频率2450M的微波辐射10秒；12小时后再用强度为1480 //ffcm^s^1的紫外线，照射60秒；12小时后，将克隆种群的轮虫群密度调整到I只/毫升，培养7天，此期间不添加a -生育酚；
f.重复d步骤的方法培育；
g.从25 35个轮虫的克隆种群中，继续筛选出1(T15个有性生殖比率小于0.1%的克隆种群，用脉冲频率2450M的微波辐射10秒；12小时后再用强度为1480 //ffcm^s^1的紫外线，照射60秒；12小时后，将克隆种群的轮虫群密度调整到I只/毫升，培养7天，此期间不添加a-生育酚；
h.重复d步骤的方法培育； i.从1(T15个轮虫的克隆种群中，可筛选出种群密度达到80(T1000只/毫升仍进行孤雌繁殖的轮虫克隆种群。本发明所培育的轮虫种群在繁殖和传代过程中，即使在密度为80(T1000只/毫升的培养液中，仍旧进行孤雌繁殖而不发生有性繁殖行为，可显著提高轮虫培养密度、提高轮虫生产效率、缩小养殖水体积、降低生产成本，可应用于室内进行轮虫高密度培养，同时也适合在室外进行轮虫敞池培育增殖，可为水产经济养殖动物的苗种和幼体培育，提供充足的活体饵料生物。
具体实施例方式实施例1 :
a.取f2公斤淡水养鱼池塘底泥，加入1000毫升高渗溶液(饱和食盐水和饱和蔗糖水混合液)，搅拌均匀后静置1(T15分钟，用塑料板轻轻蘸取表面上浮的萼花臂尾轮虫休眠卵若干，放置于500毫升经0. 45微米滤膜过滤的0.1pp湖水(培养液)中，置于温度24度，光照30001x，光周期16 8的环境条件下孵化3飞天；
b.将孵化出来的轮虫进行单个体扩大培养，投喂微绿球藻密度为100万细胞/毫升培养液，温度24度，光照30001x，光周期16 8 ；
c.挑取100只新孵化出的个体分别进行扩大培养，形成100个克隆种群，每个克隆种群培养液体积为2000毫升，每天更新一次培养液和饵料；
d.当克隆种群的轮虫密度达到I只/毫升时，向各克隆种群培养液中加入a-生育酚，加入量为20微克/毫升培养液，继续进行扩大培养，同时每天更新一次培养液和饵料，并维持培养液中a-生育酚的浓度；当克隆种群的轮虫密度达到3飞只/毫升，用孔径为120微米的筛絹网，将每个克隆种群的轮虫密度浓缩至100只/毫升，同时调整a -生育酚的浓度为100微克/毫升培养液，培养1(T15天，即诱导轮虫进行大规模有性繁殖；
e.从100个克隆种群中，筛选出25 35个有性生殖比率小于1%的克隆种群，用脉冲频率2450M的微波辐射10秒；12小时后再用强度为1480 //ffcm^s^1的紫外线，照射60秒；12小时后，加培养液将克隆种群的轮虫群密度调整到I只/毫升，培养7天，此期间不添加a-生育酚；
f.重复d步骤的方法培育；
g.从25 35个轮虫的克隆种群中，继续筛选出1(T15个有性生殖比率小于0.1%的克隆种群，用脉冲频率2450M的微波辐射10秒；12小时后再用强度为1480 //ffcm^s^1的紫外线，照射60秒；12小时后，加培养液将克隆种群的轮虫群密度调整到I只/毫升，培养7天，此期间不添加a-生育酚；h.重复d步骤的方法培育；1.从1(T15个轮虫的克隆种群中，筛选出了 3个种群密度达到80(T1000只/毫升仍旧进行孤雌繁殖的轮虫克隆种群。所述(Th步骤中的培养液均为经0.45微米滤膜过滤的0.1pp湖水；所述培养条件均为温度24度，光照30001x，光周期16 8 ;所述饵料为微绿球藻，投喂密度为100万细胞/晕升。本发明实施例1所筛选出的专性孤雌萼花臂尾轮虫克隆种群，在步骤b的条件下稳定培养、接种传代即可，可连续专性孤雌培养传代1. (Tl. 5年。
实施例2
a.取f2公斤海水河蟹育苗池塘底泥，加入1000毫升高渗溶液(饱和食盐水和饱和蔗糖水混合液)，搅拌均匀后静置1(T15分钟，用塑料板轻轻蘸取表面上浮的褶皱臂尾轮虫休眠卵若干，放置于500毫升经0. 45微米滤膜过滤的15ppt的海水(培养液)中，置于温度24度，光照30001x，光周期16 8的环境条件下孵化3飞天；
b.将孵化出来的轮虫进行单个体扩大培养，投喂微绿球藻密度为200万细胞/毫升培养液，温度24度，光照30001x，光周期16 8 ；
c.挑取100只新孵化出的个体分别进行扩大培养，形成100个克隆种群，每个克隆种群培养液体积为2000毫升，每天更新一次培养液和饵料；
d.当克隆种群的轮虫密度达到I只/毫升时，向各克隆种群培养液中加入a-生育酚，加入量为20微克/毫升培养液，继续进行扩大培养，同时每天更新一次培养液和饵料，并维持培养液中a -生育酚的浓度；当克隆种群的轮虫密度达到5 10只/毫升，用孔径为120微米的筛絹网，将每个 克隆种群的轮虫密度浓缩至100只/毫升，同时调整a -生育酚的浓度为100微克/毫升培养液，培养1(T15天，即诱导轮虫进行大规模有性繁殖；
e.从100个克隆种群中，筛选出25 35个有性生殖比率小于1%的克隆种群，用脉冲频率2450M的微波辐射10秒；12小时后再用强度为1480 //Wcn^s—1的紫外线，照射60秒；12小时后，加培养液将克隆种群的轮虫群密度调整到I只/毫升，培养7天，此期间不添加a-生育酚；
f.重复d步骤的方法培育；
g.从25 35个轮虫的克隆种群中，继续筛选出1(T15个有性生殖比率小于0.1%的克隆种群，用脉冲频率2450M的微波辐射10秒；12小时后再用强度为1480 //ffcm^s^1的紫外线，照射60秒；12小时后，加培养液将克隆种群的轮虫群密度调整到I只/毫升，培养7天，此期间不添加a-生育酚；
h.重复d步骤的方法培育；1.从1(T15个轮虫的克隆种群中，筛选出了 5个种群密度达到80(T1000只/毫升仍旧进行孤雌繁殖的轮虫克隆种群。所述(Th步骤中的培养液均为经0. 45微米滤膜过滤的15ppt的海水；所述培养条件均为温度24度，光照30001x，光周期16 8 ;所述饵料为微绿球藻，投喂密度为200万细胞
/晕升°本发明实施例1所筛选出的专性孤雌褶皱臂尾轮虫克隆种群，在步骤b的条件下稳定培养、接种传代即可，可连续专性孤雌培养传代4年。
权利要求
1. 一种专性孤雌繁殖的轮虫种群培育方法，其特征在于按如下步骤进行 a.取轮虫的休眠卵放置于500毫升的培养液中，置于温度24度，光照30001x，光周期.16 8的环境条件下孵化3~5天； b.将孵化出来的轮虫进行单个体扩大培养，投喂微绿球藻，投喂密度为100万细胞 200万细胞/毫升培养液，温度24度，光照30001x，光周期16 8 ； c.挑取100只新孵化出的个体分别进行扩大培养，形成100个克隆种群，每个克隆种群培养液体积为2000毫升，每天更新一次培养液及饵料； d.当克隆种群的轮虫密度达到1只/毫升时，向各克隆种群培养液中加入a-生育酚，加入量为20微克/毫升培养液，继续进行扩大培养，同时每天更新一次培养液及饵料，并维持培养液中a -生育酚的浓度；当克隆种群的轮虫密度达到3 10只/毫升，将每个克隆种群的轮虫密度浓缩至100只/毫升，同时调整a -生育酚的浓度为100微克/毫升培养液，培养10 15天； e.从100个克隆种群中，筛选出25 35个有性生殖比率小于1%的克隆种群，用脉冲频率2450M的微波辐射10秒；12小时后再用强度为1480 μWcm-2s—1的紫外线照射60秒；12小时后，将克隆种群的轮虫群密度调整到1只/毫升，培养7天，此期间不添加a -生育酚； f.重复d步骤的方法培育； g.从25 35个轮虫的克隆种群中，继续筛选出10~15个有性生殖比率小于0.1%的克隆种群，用脉冲频率2450M的微波辐射10秒；12小时后再用强度为1480 μWcm-2s-1的紫外线照射60秒；12小时后，将克隆种群的轮虫群密度调整到1只/毫升，培养7天，此期间不添加a-生育酚； h.重复d步骤的方法培育；1.从10~15个轮虫的克隆种群中，筛选出种群密度达到800~1000只/毫升仍进行孤雌繁殖的轮虫克隆种群。
全文摘要
本发明公开一种采用化学药物诱导、微波辐射诱变、紫外照射突变及人工选育专性孤雌繁殖的轮虫种群培育方法，所培育的轮虫种群在繁殖和传代过程中，即使在密度为800~1000只/毫升的培养液中，仍旧进行孤雌繁殖而不发生有性繁殖行为，可显著提高轮虫培养密度、提高轮虫生产效率、缩小养殖水体积、降低生产成本，可应用于室内进行轮虫高密度培养，同时也适合在室外进行轮虫敞池培育增殖，可为水产经济养殖动物的苗种和幼体培育，提供充足的活体饵料生物。
文档编号A01K67/033GK103053476SQ20121051519
公开日2013年4月24日 申请日期2012年12月5日 优先权日2012年12月5日
发明者殷旭旺, 赵乃锡, 谭冰冰, 朱美桦, 周艳春 申请人:大连海洋大学