专利名称：‘遗字138'甘薯脱毒茎尖苗ms专用培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及‘遗字138’甘薯脱毒茎尖苗MS专用培养基。
背景技术：
食用型甘薯品种‘遗字138’于1960年由中国科学院遗传研究所育成，含糖量较高，蒸烤品质极佳。适宜春、夏薯栽培，产量高，上市早，薯块大小较均匀适中，耐贮藏性好，多年来一直为北京郊区甘薯主栽品种，常年维持在3万亩左右，且深受城乡人民喜爱。
但近几年其生产面临着一个严峻的考验多年种植造成病毒在体内积累，出现严重的种性退化，抗病性减退，感染带毒率提高，产量降低，品质下降等问题。国内外研究表明，解决因病毒出现的一系列问题，主要有两种途径一、培育抗病毒品种；二、茎尖分生组织培养。利用茎尖分生组织携带病毒很少、甚至不带病毒的特点，进行离体培养，获得无病毒植株。茎尖分生组织培养环节中，MS培养基配方适应性，直接影响组培苗成活率，进而种薯(苗)的繁殖效率。研究‘遗字138’专用MS培养基，有助于提高种薯(苗)数量和质量，降低种薯(苗)生产成本，提升品种推广普及速度。
发明内容
本发明的目的是提供一种‘遗字138’甘薯脱毒茎尖苗MS专用培养基。为了实现本发明目的，本发明的一种‘遗字138’甘薯脱毒茎尖苗MS专用培养基，所述培养基配方为MS+IAA 0. 5 1. Omg/L+BAP1. 0mg/L+GA3 0 0. 5mg/L+ 蔗糖 30 40g/L+ 琼脂 8g/L。优选地，所述培养基配方为MS+IAA0. 5mg/L+BAP1. 0mg/L+GA3 Omg/L+鹿糖30g/L+ 琼脂 8g/L。本发明还提供所述专用培养基在‘遗字138’甘薯茎尖分生组织培养中的应用。从消毒后的茎尖上剥取较大的幼叶和叶原基，切取0. 3-0. 4mm含有1_2片叶原基的茎尖分生组织，接种在所述专用培养基上，置于26 28°C，光照强度3000LX，13h/d的条件下培养。其中，茎尖采用两步法消毒用水洗净,然后用75%酒精处理30秒，再用2%次氯酸钠溶液消毒5-6分钟，最后用无菌水冲洗2-3次。目前已报道的有关甘薯茎尖培养的培养基的筛选，基本上是随机选择激素配比，或单独改变培养基中某个激素的浓度，接种茎尖进行培养，从中筛选出出苗率最高的培养基配方，其属于随机性筛选，忽视了激素间的交互作用，筛选出的配方成苗率一般较低，并且工作量大。而本发明在筛选最佳培养基配方时，通过正交设计试验，选取4个因素生长素(IAA)、细胞分裂素(BAP)、赤霉素(GA3)和蔗糖，将含有1_2片叶原基的茎尖分生组织，接种在各处理组合的培养基上进行培养，观察成苗率和芽的生长表现，统计分析得到最佳水平的培养基配方。本发明通过正交设计试验和统计学方法，综合多个因素，同时考虑单个因素和多个因素的交互作用，最终筛选出符合试验目的的设计方案。本试验通过正交设计筛选出的‘遗字138’甘薯最佳的培养基配方为MS+O. 5mg/L IAA+1. Omg/L BAP+30g/L蔗糖+8g/L琼月旨，成苗率高，有助于提高种薯(苗)数量和质量，降低种薯(苗)生产成本，提升品种推广普及速度。
具体实施例方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。实施例‘遗字138’甘薯脱毒茎尖苗MS专用培养基筛选试验1.1茎尖消毒采用两步法消毒用流水冲洗数分钟后，在超净工作台上操作，先用75%酒精处理30秒，再用2%次氯酸钠溶液消毒5-6分钟,最后用无菌水冲洗2-3次。1. 2莖尖剥离和培养为研究激素和糖分对‘遗字138’甘薯茎尖培养的影响，筛选最佳培养基配方，进行了正交设计试验。取四个因素IAA、BAP、GA3和蔗糖，每个因素设三个位级(据相关研究，生长素和细胞分裂素是甘薯组织培养必需的两类激素，是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键，而赤霉素类主要作用是促进植物茎的伸长，在植物组培中并不常用，所以浓度梯度从0开始设置)，见表1，共有9个处理组合。把消毒好的茎尖放在显微镜下，用解剖刀一层一层剥取茎尖上较大的幼叶和叶原基，切取0. 3-0. 4mm含有1_2片叶原基的茎尖分生组织，接种在各处理组合的培养基上，每个处理3次重复，每个重复30个微茎尖。置于26 28°C，光照强度3000LX，13h/d的条件下培养。培养50天观察成苗率和芽的生长表现，统计分析得到最好水平的培养基配方，进入茎尖大量剥离和培养阶段。20天后，观察茎尖萌发生长情况，符合条件的转入无IAA+BAP激素的MS基本培养基上。表I茎尖培养正交设计试验
权利要求
1.‘遗字138’甘薯脱毒茎尖苗MS专用培养基，其特征在于，所述培养基配方为MS+IAAO.5 1. Omg/L+BAP1. 0mg/L+GA3 O O. 5mg/L+ 鹿糖 30 40g/L+ 琼脂 8g/L。
2.根据权利要求1所述的专用培养基，其特征在于，所述培养基配方为MS+IAA O. 5mg/L+BAP1. 0mg/L+GA3 Omg/L+ 鹿糖 30g/L+ 琼脂 8g/L。
3.权利要求1或2所述的专用培养基在‘遗字138’甘薯茎尖分生组织培养中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，从消毒后的茎尖上剥取较大的幼叶和叶原基，切取O. 3-0. 4_含有1-2片叶原基的茎尖分生组织，接种在所述专用培养基上，置于 26 28°C，光照强度3000LX，13h/d的条件下培养。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，茎尖消毒方法为用水洗净，然后用75% 酒精处理30秒，再用2%次氯酸钠溶液消毒5-6分钟，最后用无菌水冲洗2-3次。
全文摘要
本发明提供了一种‘遗字138’甘薯脱毒茎尖苗MS专用培养基，所述培养基配方为MS+IAA 0.5～1.0mg/L+BAP 1.0mg/L+GA3 0～0.5mg/L+蔗糖30～40g/L+琼脂8g/L。本发明通过正交设计试验和统计学方法，综合多个因素，同时考虑单个因素和多个因素的交互作用，最终筛选出出苗率最高的培养基配方。本发明提供的‘遗字138’甘薯脱毒茎尖苗MS专用培养基，有助于提高种薯(苗)数量和质量，降低种薯(苗)生产成本，提升品种推广普及速度。
文档编号A01H4/00GK103004597SQ20121054848
公开日2013年4月3日 申请日期2012年12月17日 优先权日2012年12月17日
发明者李仁崑, 周小丽, 王忠义, 杨殿伶 申请人:北京市农业技术推广站