专利名称：蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因ldc及其编码的蛋白与应用的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，主要涉及通过合成蛇足石杉cDNA、PCR和重组表达技术获得赖氨酸脱羧酶基因及其编码产物，属于药用植物基因工程领域。
背景技术：
药用植物有效成分(次生代谢产物)的形成是植物次生代谢途径中特有基因群的产物。随着植物功能基因组研究的广泛与深入，独具特色又有广阔应用前景的药用植物次生代谢合成相关功能基因的研究逐渐成为研究的热点，这些基因的克隆将为解析药用植物有效成分的生物合成途径及其调控机制和解释药材品质的形成提供理论基础，同时为利用生物技术提高目标成分含量或直接生产有效成分或中间体带来广阔的应用空间。蛇足石杉[Huperzia serrata(Thumb.)Trev.]是石松类石松科石松属植物,作为传统中草药在我国民间已有上千年的用药历史，其所含石杉碱甲次生代谢物是一类高效、低毒、可逆且具有选择性的乙酰胆碱酯酶(AchE)抑制剂，治疗重症肌无力和早老年性痴呆疗症效显著，是新一代炙手可热的治疗老年痴呆的药物。目前所知在蛇足石杉石松类生物碱生物合成途径中，赖氨酸脱羧酶(lysine decarboxylase,LDC)是蛇足石杉石杉碱甲合成途径的第一个酶，是植物次生代谢途径的关键酶之一，对蛇足石杉具有非常重要的生理意义。因此赖氨酸脱羧酶基因的获得，为用基因工程手段提高蛇足石杉有效部位的含量提供重要基础。在本次发明被公布之前，尚未有任何公开或报道过本专利申请中所提及的蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因及其氨基酸序列。
发明内容
本发明的目的在于提供一种蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因(LDC)。本发明的第二个目的是提供该基因编码的蛋白质。本发明还提供了含有该基因的重组载体和宿主细胞。本发明的另一个目的在于提供该基因的应用。本发明所提供的蛇足石杉赖氨酸脱羧酶(LDC)，为以下核苷酸序列之一:(I) SEQ ID N0.1 和 SEQ ID N0.3 的 DNA 序列；(2)在严格条件下与SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.3的DNA序列杂交且编码具有蛇足石杉赖氨酸脱羧酶活性的蛋白质分子的DNA分子；(3)编码SEQ ID N0.2和SEQ ID N0.4所示氨基酸序列的核苷酸序列；(4)编码对SEQ ID N0.2和SEQ ID N0.4经添加、取代、插入或缺失一个或多个氨基酸且具有蛇足石杉赖氨酸脱羧酶活性的蛋白质的核苷酸序列。本发明所提供的蛇足石杉赖氨酸脱羧酶(LDC)，其特征在于，是以下氨基酸序列之具有SEQ ID N0.2和SEQ ID N0.4所示的氨基酸序列；SEQ ID N0.2和 SEQ ID N0.4经添加、取代、插入或缺失一个或多个氨基酸且具有蛇足石杉赖氨酸脱羧酶活性的序列；含有本发明的蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因全序列或部分序列的重组载体，如原核类载体，真核类表达载体及RNAi载体均属于本发明的保护范围；含有本发明的蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因全序列或部分序列的宿主细胞，如含有上述的重组载体的宿主细胞也属于本发明的保护范围；所述宿主细胞为有价值的活性材料。本发明的蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因的应用，包括用所述的重组载体，如植物表达载体转化植物细胞；或者用所述含有该基因的农杆菌与植物细胞共培养，得到转基因的植物发根系；或者用所述的发根细胞再生植株；或者用所述的蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因全序列或部分序列转化获得转基因生物体。本发明技术方案中涉及的概念具体内容如下:所说的蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因的DNA分子包括:编码具有赖氨酸脱羧酶活性的多肽的核苷酸序列，而且所述的核苷酸序列与SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.3中的核苷酸序列有至少70%的同源性；或者所述的核苷酸序列能在40-55°C条件下与SEQ IDN0.1和SEQID N0.3中从核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码具有SEQ ID N0.2和SEQ ID N0.4所示的氨基酸序列的多肽。更佳地，所述的序列具有SEQ ID N0.1中从核苷酸第1-639位和SEQ ID N0.3中从核苷酸第1-609位的核苷酸序列。本发明分离出的蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因多肽包括:具有SEQ ID N0.2和SEQ ID N0.4氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID N0.2和SEQ ID N0.4序列的多肽。 本发明中术语“蛇足石杉赖氨酸脱羧酶(或多肽)”基因(LDC)指:编码具有蛇足石杉赖氨酸脱羧酶活性的多肽的核苷酸序列，如SEQ ID N0.1中第1-639位核苷酸序列及简并序列，和SEQ ID N0.3中第1-609位核苷酸序列及简并序列。该简并序列是指，位于SEQID N0.1序列编码框第1-639位和SEQ ID N0.3序列编码框第1_609位核苷酸中，有一个或多个密码子被编码相同氨基酸的简并密码子所取代后而产生的序列。由于密码子的简并性，所以与SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.3中核苷酸序列同源性低至约70%的简并序列也能编码出SEQ ID N0.2和和SEQ ID N0.4所述的序列。还包括能在中度严谨条件下，更佳的在高度严谨条件下与SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.3中的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。还包括与SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.3中的核苷酸序列的同源性至少70%，较佳地至少80%，更佳地至少90%，最佳地至少95%的核苷酸序列。还包括能编码具有与天然的蛇足石杉赖氨酸脱羧酶相同功能的蛋白的SEQ IDN0.1和SEQ ID N0.3中开放阅读框序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于):若干个(通常为，1-90个，较佳地，1-60个，更佳地1-20个，最佳地，1-10个)核苷酸的缺失、插入和/或取代，以及在5’和/或3’端添加数个(通常为60个以内，较佳地为30个以内，更佳地为10个以内，最佳地为5个以内)核苷酸。本发明术语“蛇足石杉赖氨酸脱羧酶蛋白或多肽(LDC) ”指:具有蛇足石杉赖氨酸脱羧酶活性的SEQ ID N0.2和SEQ ID N0.4序列的多肽。该术语还包括具有与天然蛇足石杉赖氨酸脱羧酶相同功能的SEQ ID N0.2和SEQ ID N0.4序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于):若干个(通常为1-50个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一个或数个(通常为20个以内，较佳地为10个以内，更佳地为5个以内)氨基酸。例如在本领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变蛋白质的功能。有比如，在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸通常也不会改变蛋白质的功能。该术语还包括蛇足石杉赖氨酸脱羧酶的活性片段和活性衍生物，还包括能够可操作地连于信号肽、启动子或者核糖体结合位点序列所组成的衍生物。本发明的蛇足石杉赖氨酸脱羧酶多肽的变异形式包括:同源序列、保守性变异体、等位变异体、天然突变体、诱导变异体、在高或低的严谨条件下能与蛇足石杉赖氨酸脱羧酶DNA杂交的DNA所编码的蛋白、以及利用蛇足石杉赖氨酸脱羧酶多肽的血清获得的多肽或蛋白。本发明中蛇足石杉赖氨酸脱羧酶保守性变异多肽指:与SEQ ID N0.2和SEQIDN0.4的氨基酸序列相比，有至多10个，较佳地至多8个，更佳地至多5个氨基酸性质相似或相近的氨基酸所替代而形成的多肽。本发明还包括赖氨酸脱羧酶或多肽的类似物。这些类似物与天然蛇足石杉赖氨酸脱羧酶多肽的差别可以是氨基酸序列上的差异，也可以是不影响序列的修饰形式上的差异，或者兼而有之。这些多肽包括天然或诱导的遗传变异体。诱导变异体可以通过各种技术得到，如通过辐射或暴露于诱导剂而产生随机诱变，还可以通过定点诱变法或其他已知分子生物学的技术。应理解，本发明的多肽并不限于上述例举的代表性的多肽。所述修饰(通常不改变一级结构)形式包括:体内或体外的多肽的化学衍生形式如乙酰化或羧基化。修饰还包括糖基化，如那些在多肽的合成和加工中或进一步加工步骤中进行糖基化修饰而产生的多肽。这种修饰可以通过将多肽暴露于进行糖基化修饰的酶(如哺乳动物的糖基化酶或去糖基化酶)而完成。修饰形式还包括具有磷酸化氨基酸残基(如磷酸酪氨酸，磷酸丝氨酸，磷酸苏氨酸)的序列。还包括被修饰从而提高了其蛋白水解性能或优化了溶解性能的多肽。本发明中，可选用本领域已知的各种载体，如市售的载体，包括质粒，粘粒等。在生产本发明中的蛇足石杉赖氨酸脱羧酶多肽时，可以将蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因的核苷酸序列可操作地连 于表达调控序列，从而形成蛇足石杉赖氨酸脱羧酶表达载体。所述“可操作地连于”指这样一种状况，即线性DNA序列的某些部分能够影响同一线性DNA序列其他部分的活性。例如，如果信号肽DNA作为前体表达并参与多肽的分泌，那么信号肽(分泌前导序列)DNA就是可操作地连于多肽DNA ;如果启动子控制序列的转录，那么它是可操作地连于编码序列。一般，“可操作地连于”意味着相邻，而对于分泌前导序列则意味着在阅读框中相邻。本发明中宿主细胞为原核细胞或真核细胞。常用的原核宿主细胞包括大肠杆菌；常用的真核宿主细胞包括酵母细胞、烟草细胞和其他植物细胞。本发明还可用Northern印迹法技术分析蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因产物的表达，即分析蛇足石杉赖氨酸脱羧酶的RNA转录物在细胞中的存在和数量。此外，本发明可用作探针的核酸分子通常具有蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因核苷酸编码序列的8-100个连续核苷酸，较佳地具有15-50个连续核苷酸。该探针可用于检测样品中是否存在编码蛇足石杉赖氨酸脱羧酶的核酸分子。本发明涉及检测样品中是否存在蛇足石杉赖氨酸脱羧酶核苷酸序列的方法，它包括用上述的探针与样品进行杂交，然后检测探针是否发生了结合。较佳地，该样品是PCR扩增后的产物，其中PCR扩增引物对应于蛇足石杉赖氨酸脱羧酶核苷酸编码序列，并可位于该编码序列两侧或中间。引物长度一般为15-50个核苷酸。此外，根据本发明的蛇足石杉赖氨酸脱羧酶核苷酸序列和氨基酸序列，可以在核酸同源性或表达蛋白质的同源性基础上，筛选蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因或同源蛋白。本发明的蛇足石杉赖氨酸脱羧酶的基因家族的核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本发明所公开的有关核苷酸序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。一旦获得了有关序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。此外，还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。除了用重组法产生之外，本发明的蛋白片段还可用固相技术，通过直接合成肽而加以生产。在体外合成蛋白可以用手工或自动进行。可以分别化学合成本发明蛋白的各片段，然后用化学方法加以连接以产生全长的分子。利用本发明的蛇足石杉赖氨酸脱羧酶，通过各种常规筛选方法，可筛选出与蛇足石杉赖氨酸脱羧酶发生相互作用的物质，或者受体、抑制剂或拮抗剂等。本发明提供的蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因是首次从蛇足石杉中克隆制备的，填补了我国药用植物蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因的空白。赖氨酸脱羧酶是蛇足石杉中石杉碱甲生物合成途径的第一个酶，即入口酶，是植物次生代谢途径的关键酶之一，故通过赖氨酸脱羧酶基因的转基因技术将会提高石杉碱甲等石松生物碱类物质的含量。蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因可通过转基因技术用于提高蛇足石杉石杉碱甲含量的研究和产业化，尤其可用于中药材蛇足石杉品质的改良，对提高蛇足石杉石松类生物碱产量具有较好的促进作用，具有很好的应用前景。
图1:蛇足石杉cDNA的PCR扩增电泳图；图2:大肠杆菌重组表达载体pET_32a(+)/LDC构建图；图3:重组赖氨 酸脱羧酶表达SDS-PAGE图；M，蛋白质分子量标准；1、2、3，重组菌[pET-32a(+)/LDCl]破壁后的上清液和沉淀及全菌；4、5、6，重组菌[pET_32a(+)/LDC2]破壁后的上清液和沉淀及全菌；ct，空载体重组菌；图4:重组赖氨酸脱羧酶的纯化SDS-PAGE图；M，蛋白质分子量标准；LDC1:纯化的重组蛋白LDCl ；LDC2:纯化的重组蛋白LDC2 ；图5:重组赖氨酸脱羧酶活性TCL检测图；1，尸胺标准品；2、3，重组蛋白LDCl和LDC2 ;4、5，灭活的重组蛋白LDCl和LDC2 ;6、7，不添加赖氨酸底物；8，空载体重组菌液；9，赖氨酸标准品。Cad，尸胺。
具体实施例方式以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。实施例1、蛇足石杉cDNA的合成1、蛇足石杉总RNA的提取与检测取蛇足石杉(Huperzia serrata)嫩叶2g,在研钵中用液氮快速研磨成粉末，快速转移至 65°C 预热的 IOmL 提取缓冲液中[CTAB (W/V) 2 %，Tris-HCl (pH8.0) IOOmmoI/L，EDTA25mmol/L, NaC12.0mol/L，PVP402 %，亚精胺 0.5g/L，巯基乙醇 2% ]，充分振荡混匀；用等体积氯仿抽提2次，7500g离心15min。上清液加入1/4体积的IOM LiCl,混合后放置 4 °C 沉淀过夜；7500g 离心 20min,沉淀用 500 u L SSTE[SDS0.5 %, NaClImoI/L,Tris-HCl (pH8.0) 10mmol/L, EDTAlmmol/L],在 65°C溶解 5min。用等体积氯仿抽提，13000g离心5min，上清液加入2倍体积无水乙醇，_70°C放置2h，4°C 13000g离心20min，沉淀室温干燥IOmin后溶于100 u L DEPC处理的水中，用1.0%琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性，用Eppendorf核酸定量仪测定A260、A280比值和浓度。置于_80°C冰箱备用。2、反转录合成cDNA米用mRNA纯化试剂盒(PolyATractmRNA isolation system III,Promega公司)分离mRNA后,采用TaKaRa公司提供的PrimeScript反转录试剂盒,合成蛇足石杉mRNA第一互补链DNA。实施例2、赖氨酸脱羧酶基因的克隆从NCBI中搜索赖氨酸脱羧酶基因相关的核苷酸序列和EST序列，通过比对分析，利用vector NTI软件设计一对扩增引物LDC-F (ATGGAAGCGTTCATT GATCCG)和LDC-R(TTATACCAGACGITCAATCTCCC)。以蛇足石杉的cDNA为模板，按照以下体系[IOXEx PCRbuffer5.0uL, dNTP ( 2.5mM) 4.0 y L，引物 LDC-F 和 LDC-R(IOpmol)各 1.0y L, Ex Taq 聚合Bl0.25 u L，cDNA4.0uL,补加ddH20至终体积50.0uL]扩增LDC基因；反应程序:94°C预变性 5min ;94°C变性 30s，52°C退火 30s，72。。延伸 lmin,30 个循环；72°C终延伸 10min,4°C保存。扩增结果于I %琼脂糖凝胶电泳检测(图1)。利用TaKaRa公司的Agarose Gel DNAFragment Recovery Kit Ver.2.0纯化PCR产物,然后克隆至pMD 19-T载体，筛选阳性克隆子提取质粒送TaKaRa公司测序，获得蛇足石杉赖氨酸脱羧酶相关基因序列。利用VectorNTI软件分析，发现两序列均具有完整开放阅读框，长度分别为639bp和609bp，分别可编码212个和202个氨基酸，将两基因分别命名为LDCl和LDC2。实施例3、赖氨酸脱羧酶基因的原核表达1、原核表达载体的构建[45]分另Ij以T载体中的LDCl和LDC2为模板，利用引物Pl(CATGCCATGGAAGCGTTCATTGATCCG)和 P2(CCGCTCGAGTTATACCAGACGTTCAATCTC)进行 PCR反应，扩增产物经电泳检测和纯化后，用限制性内切酶Nco I和Xho I于37°C酶切2h，采用回收试剂盒(Takara公司，中国)纯化酶切产物；同时利用Nco I和Xho I在37°C酶切pET-32a(+)载体2h，利用试剂盒回收大片段。将回收的两个片段混合，在DNA连接酶作用下于16°C反应12h，连接产物利用CaCl2法转化大肠杆菌BL21 (DE3)，在氨苄和氯霉素抗性平板上进行抗性筛选，并对克隆子进行全菌PCR检测，将阳性克隆子接入LB液体培养基中培养，提取重组质粒，进行Nco I和Xho I双酶切分析，琼脂糖凝胶电泳鉴定完全酶切后存在两个片段，表明表达载体构建成功。分别命名为:pET-32a(+) /LDCl 和 pET_32a (+)/LDC2 (图 2)。2、赖氨酸脱羧酶基因的表达将筛选获得的阳性克隆子接种到含有氨苄青霉素(终浓度100 U g/mL)和氯霉素(终浓度170 u g/mL)的LB液体培养基中，37°C 150r/min培养3_4h后利用分光光度计检测菌体密度，0D_约为1.0时添加IPTG (终浓度260 u g/mL)诱导表达，继续培养4h，取ImL菌液于1.5mL离心管中，离心收集菌体，用ImL的PBS(50mM pH7.0)洗涤和重悬菌体，重悬菌液分2份，其中一份加入2 ii L溶菌酶(lOOmg/mL)，室温静置IOmin后在液氮中反复冻融3次，12000rpm离心IOmin,分别收集上清液和沉淀。分别在上清、沉淀、全菌中加入等体积的2Xloading buffer,沸水浴3min,短暂离心后使用12%的SDS-PAGE电泳检测分析(图3)。由图3可知，与空载体重组菌株[pET-32a(+)]比较，重组菌[pET_32a(+)/LDC1]和重组菌[pET-32a(+)/LDC2]均多出一条蛋白条带，表明LDCl和LDC2基因均获得表达；重组菌经过破壁处理分成上清液和沉淀两部分，其中上清部分目的蛋白表达量低于沉淀部分，表明LDCl和LDC2可溶性表达量比较低(见图3中的泳道I和4)。实施例4、重组赖氨酸脱羧酶的纯化和活性鉴定1、重组赖氨酸脱羧酶的纯化大量培养 重组菌株，经IPTG诱导表达，收集菌体，PBS反复洗涤3次，使用N1-NTASefinoseTM Resin蛋白纯化试剂盒(上海生工)中的binding buffer重悬菌体,溶菌酶酶解，冰浴超声破碎细胞，12000rpm离心30min收集上清；根据融合蛋白上的His-Tag采用N1-NTA纯化柱纯化重组赖氨酸脱羧酶，分管收集纯化液，12%的SDS-PAGE电泳检测纯化效果(图4泳道LDCl和LDC2)。2、重组赖氨酸脱羧酶活性鉴定在磷酸钾缓冲液(100mM，pH8.0)中配制酶反应体系，使各试剂终浓度分别为:磷酸吡哆醛(PALP)0.20mM、赖氨酸10.0mM、重组赖氨酸脱羧酶1.00mg/mL。将反应体系置于37°C水浴锅中至反应混合液出现浑浊时停止反应。薄层层析(TLC)检测:向反应液中加入I滴浓盐酸，然后加入少量氯仿剧烈震荡混匀，IOOOOrpm离心IOmin弃去不溶物，氮吹仪40°C吹干，干燥后的残渣用IM的HCl溶解，取溶解液利用丹磺酰氯进行衍生反应；同时对赖氨酸和尸胺标准品进行丹磺酰氯衍生。经过衍生后萃取浓缩衍生物进行TLC检测，采用全自动点样仪(CAMAG ATS4)点样、全自动展开仪(CAMAGADC2)展开(展开剂为氯仿、乙醚、三乙胺，配比为8: I: 2)，然后使用TLCVisualizer (CAMAG)进行检测成像。由图可知，重组蛋白LDCl和LDC2均能催化赖氨酸脱羧基生成尸胺(图5中泳道2和3);水煮灭活的重组蛋白(图5中泳道4和5)和不加底物赖氨酸的反应体系(图5中泳道6和7)以及空载体重组菌液反应体系(图5中泳道8)中均不产生尸胺。结果表明重组蛋白LDCl和LDC2均具有赖氨酸脱羧酶活性，更证明我们从蛇足石杉中克隆的两个基因LDCl和LDC2是赖氨酸脱羧酶基因。应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。
权利要求
1.一种蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因LDC，其特征在于，它是下列核苷酸序列之一:(1)SEQ ID N0.1 和 SEQ ID N0.3 的 DNA 序列； (2)在严格条件下与SEQID N0.1和SEQ ID N0.3的DNA序列杂交且编码具有 蛇足石杉赖氨酸脱羧酶活性的蛋白质分子的DNA分子； (3)编码SEQID N0.2和SEQ ID N0.4所示氨基酸序列的核苷酸序列； (4)编码对SEQID N0.2和SEQ ID N0.4经添加、取代、插入或缺失一个或多个氨基酸且具有蛇足石杉赖氨酸脱羧酶活性的蛋白质的核苷酸序列。
2.权利要求1所述的蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因LDC编码蛋白，其特征在于，是以下氨基酸序列之一: (1)具有SEQID N0.2和S EQ ID N0.4所示的氨基酸序列； (2)SEQ ID N0.2和SEQ ID N0.4经添加、取代、插入或缺失一个或多个氨基酸 且具有蛇足石杉赖氨酸脱羧酶活性的序列。
3.重组载体，其特征在于:含有权利要求1所述的蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因全部或部分序列。
4.宿主细胞，其特征在于:含有权利要求1所述的蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因全部或部分序列。
5.权利要求1所述的蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因LDC和权利要求2所述的氨基酸序列在蛇足石杉育种中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因LDC及其编码的蛋白与应用，该基因为首次从蛇足石杉的cDNA中获得，填补了我国传统中药材蛇足石杉中分子克隆出赖氨酸脱羧酶基因的空白。本发明所提供的赖氨酸脱羧酶基因具有SEQ ID NO.1和SEQID NO.3所示的核苷酸序列或者添加、取代、插入或者缺失一个或多个核苷酸的同源序列或其等位基因及其衍生的核苷酸序列。所述基因编码的蛋白质具有SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列或者添加、取代、插入或者缺失一个或多个氨基酸的同源序列。本发明提供的赖氨酸脱羧酶基因有可能通过生物技术提高蛇足石杉中生物碱类活性成分石杉碱甲的含量，或者进行品种选育，具有较好的应用前景。
文档编号A01H5/00GK103184227SQ201310051788
公开日2013年7月3日 申请日期2013年2月2日 优先权日2013年2月2日
发明者彭清忠, 杜次, 朱越, 李菁 申请人:吉首大学