一种青胫隐性白羽鸡品系的选育方法
【专利摘要】本发明公开了一种青胫隐性白羽鸡品系的选育方法，属于分子育种【技术领域】。本发明采用分子辅助选择的方法鉴定鸡显性白羽位点的基因型，可以快速判定出该位点的基因型，生产基因型为ii的青胫隐性白羽鸡品系，能有效避免测交选育的繁琐，缩短世代间隔，加快育种进程，降低培育成本。采用本发明方法选育的青胫隐性白羽鸡品系其肉质细嫩，肉味鲜美，生产性能高，既可以作为商品鸡直接投入生产，还可以与青胫黄麻羽进行配套应用。
【专利说明】—种青胫隐性白羽鸡品系的选育方法
【技术领域】
[0001]本发明具体涉及一种青胫隐性白羽鸡品系的选育方法，属于分子育种【技术领域】。【背景技术】
[0002]随着生活水平的提高，人们的消费观念从过去的数量型转变为质量型。人们对鸡肉肉质的要求也越来越高。我国的地方鸡具有肉质好的特点，但是其生长速度较慢，饲料转化率低。而国外的快大型肉鸡虽生长速度快、饲料转化率高，其肉质较差。为解决这一问题，将国外快大型肉鸡与国内地方优质肉鸡进行杂交，既能够改善国外快大型肉鸡的肉质也能加快地方优质肉鸡的生长速度和生产性能。但是，由于我国人民长期的饮食习惯的影响，中国消费者偏爱黄麻羽、黑羽等有色羽的鸡，尤其是南方城市不接受快速生长的白羽鸡。为了使杂交后鸡的表型符合中国消费者的需求，就需要纯合的隐性白羽鸡，隐性白羽鸡生产性能高，且与我国有色羽杂交后能保持有色羽的羽色，对于我国优质鸡的育种上具有重大的意义。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一种青胫隐性白羽鸡品系的选育方法。
[0004]为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是:
[0005]一种青胫隐性白羽鸡品系的选育方法，包括以下步骤:
[0006](I)利用青胫隐性白羽鸡作为父本，白来航鸡作`为母本进行杂交，生产出Fl代；
[0007](2) Fl代自交得到F2代，选留F2代青胫白羽公母鸡；
[0008](3)利用AS-PCR测定F2代青胫白羽公母鸡的基因型，选留显性白羽位点为ii基因型的个体，淘汰显性白羽位点为II和Ii基因型的个体，得到显性白羽位点为ii基因型的青胫白羽公母鸡；
[0009](4)取显性白羽位点为ii基因型的青胫白羽公母鸡自交，利用步骤(3)的方法测定自交后代的基因型，重复上述步骤至稳定遗传，得到显性白羽位点为ii基因型的青胫隐性白羽鸡品系。
[0010]所述步骤(1)中青胫隐性白羽鸡为青胫黄麻羽地方鸡突变后的青胫白羽鸡，经人工引入PvuII的RFLP-PCR方法测定显性白羽位点为ii基因型。
[0011]所述步骤(3)中利用AS-PCR测定F2代青胫白羽公母鸡基因型的方法，包括以下步骤:以包含PMEL17基因的待测鸡全基因组DNA为模板，以引物对Pl为引物PCR扩增鸡PMEL17基因I等位基因，以引物对P2为引物PCR扩增鸡PMEL17基因i等位基因；对扩增得到的片段进行琼脂糖凝胶电泳，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定鸡显性白羽位点的基因型；
[0012]所述的引物对Pl为:
[0013]上游引物，Pl-F:5’ -CCGGCCTCTACTGCCTCAACGTCTCGT-3’(如 SEQ ID N0.1 所示)，
[0014]下游引物，Pl-R:5’-GTGCCCAGAGCTTCGGCGATGAGCGGTG-3’(如 SEQ ID N0.2 所示)；
[0015]所述的引物对P2为:[0016]上游引物，P2-F:5’-CCACGCTCACCGTGGGGCTGCTGCTCAT-3’(如 SEQ ID N0.3 所示)，
[0017]下游引物，P2-R:5’ -GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3’(如 SEQ ID N0.4 所示)。
[0018]所述的PCR 扩增反应体系为:2XTaq PCR MasterMix 12.5μ L, ddH20 9.5 μ L,Pl-F 0.4 μ L，Pl-R 0.6 μ L，P2-F 0.6 μ L, P2-R 0.4 μ L，DNA 模板 1.0 μ L。
[0019]所述的2XTaq PCR MasterMix含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、氯化镁和PCR反应缓冲液，为市售商品，可购自上海生工、大连宝生物、北京百泰克、北京康为等公司。
[0020]所述的PCR扩增反应程序为:94°C预变性4min ;94°C变性30s，64°C退火30s，72°C延伸15s, 35个循环；72°C延伸IOmin0
[0021]所述的琼脂糖凝胶的质量浓度为1.5%。
[0022]所述的琼脂糖凝胶电泳的电压为120V，电泳时间为40min。
[0023]所述的鉴定鸡显性白羽位点基因型的方法为:11基因型表现为322bp和224bp条带；Ii基因型表现为322bp、224bp和144bp条带；ii基因型表现为322bp和144bp条带。
[0024]优选的，将步骤(4)得到的显性白羽位点为ii基因型的青胫隐性白羽鸡品系与青胫黄麻羽鸡品种杂交配套，生产出有色羽肉鸡。
[0025]所述的青胚黄麻羽鸡品种为固始鸡、边鸡、淮北麻鸡、淮南麻黄鸡、五华鸡、崇仁麻鸡、琅琊鸡、卢氏鸡、桃源鸡、瑶鸡、茶花鸡等。
[0026]本发明的有益效果:
[0027]本发明采用分子辅助选择的方法鉴定鸡显性白羽位点的基因型，可以快速判定出该位点的基因型，生产基因型为ii的青胫隐性白羽鸡品系，能有效避免测交选育的繁琐，缩短世代间隔，加快育种进程，降低培育成本。采用本发明方法选育的青胫隐性白羽鸡品系其肉质细嫩，肉味鲜美，生产性能高，既可以作为商品鸡直接投入生产，还可以与青胫黄麻羽进行配套应用。
[0028]本发明中用于检测鸡PMEL17基因显性白羽位点基因型的引物，是针对PMEL17基因第10外显子9bp插入(-CTGGGCACC-)设计等位基因I特异性引物Pl-R ;针对PMEL17基因第10外显子无9bp插入设计等位基因i特异性引物P2-F。这样引物Pl-R与Pl-F只能扩增I等位基因，扩增的片段大小为224bp ;引物P2-R与P2-F只能扩增i等位基因，扩增的片段大小为144bp。此外，由于上游引物Pl-F与下游引物P2-R的组合也可以扩增，扩增的片段大小为322bp，这个扩增不受9bp插入的影响。
【专利附图】
【附图说明】
[0029]图1为本发明实施例1中各样本PMEL17基因显性白羽位点的PCR电泳图；
[0030]注:自左至右泳道分别代表DNA Marker I和基因型i1、i1、I1、I1、I1、i1、I1、ii和Ii的电泳带型。
【具体实施方式】
[0031]下述实施例仅对本发明作进一步详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
[0032]实施例1
[0033]本实施例中青胫隐性白羽鸡品系的选育方法，包括以下步骤:
[0034](I)利用固始鸡群体中青胫隐性白羽鸡作父本，白来航鸡作母本进行杂交，生产出Fl代；
[0035] (2) Fl代自交得到F2代，选留F2代青胫白羽公母鸡；
[0036](3)利用AS-PCR的方法测定F2代青胫白羽公母鸡的基因型，具体包括以下步骤:
[0037]①样品的采集
[0038]对F2代选留的青胫白羽鸡翅静脉采血，加1/3抗凝剂，用蛋白酶K法提取血液DNA,将DNA样品保存于4°C冰箱保存备用；
[0039]②引物设计
[0040]以PMEL17 基因序列(GenBank Accession N0.AY636129)为模板设计引物对 Pl 和P2，如下所示；
[0041]所述的引物对Pl为:
[0042]上游引物，Pl-F:5’ -CCGGCCTCTACTGCCTCAACGTCTCGT-3’，
[0043]下游引物，P1-R: 5 ’ -GTGCCCAGAGCTTCGGCGATGAGCGGTG-3，；
[0044]所述的引物对P2为:
[0045]上游引物，P2-F: 5，-CCACGCTCACCGTGGGGCTGCTGCTCAT-3，，
[0046]下游引物，P2-R: 5，-GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3，；
[0047]③PCR扩增
[0048]以引物对Pl和P2为引物建立了 25.0 μ L扩增体系:2XTaq PCR MasterMix(购自北京百泰克公司)12.5 μ L，CldH2O 9.5 μ L, Pl-F 0.4 μ L，Pl-R 0.6 μ L, P2-F 0.6 μ L, P2-R0.4μ L, DNA 模板 1.0μ L ；
[0049]反应程序为:94°C预变性4min ;94°C变性30s，64°C退火30s，72°C延伸15s，35个循环；72°C延伸IOmin ；
[0050]④PCR扩增产物的检测与结果判定
[0051]取10.0μ L PCR扩增后产物，1.5%的琼脂糖凝胶电泳(电泳电压:120V ;电泳时间:40min)点样，电泳结束后，用凝胶成像系统对琼脂糖凝胶照相检测，电泳图谱参见图1 ;根据电泳图谱中出现的条带大小进行判定:当出现322bp和224bp片段，则为显性白羽纯合子(II基因型);当出现322bp和144bp的片段，则为野生型纯合子(ii基因型);当出现322bp、224bp和144bp的片段，则为显性白羽杂合子(Ii基因型)；
[0052](4)根据基因型判定结果，选留显性白羽位点为ii基因型的个体，淘汰显性白羽位点为II和Ii基因型的个体，得到显性白羽位点为ii基因型的公母鸡；
[0053](5)取显性白羽位点为ii基因型的青胫白羽公母鸡自交，利用步骤(3)的方法测定自交后代的基因型，重复上述步骤至稳定遗传，得到显性白羽位点为ii基因型的青胫隐性白羽鸡品系；
[0054](6)对步骤(5)得到的显性白羽位点为ii基因型的青胫隐性白羽鸡品系作为父本与青胫黄麻羽鸡品种杂交配套，生产出有色羽肉鸡。
【权利要求】
1.一种青胫隐性白羽鸡品系的选育方法，其特征在于:包括以下步骤: (1)利用青胫隐性白羽鸡作为父本，白来航鸡作为母本进行杂交，生产出Fl代； (2)Fl代自交得到F2代，选留F2代青胫白羽公母鸡； (3)利用AS-PCR测定F2代青胫白羽公母鸡的基因型，选留显性白羽位点为ii基因型的个体，淘汰显性白羽位点为II和Ii基因型的个体，得到显性白羽位点为ii基因型的青胫白羽公母鸡； (4)取显性白羽位点为ii基因型的青胫白羽公母鸡自交，利用步骤(3)的方法测定自交后代的基因型，重复上述步骤至稳定遗传，得到显性白羽位点为ii基因型的青胫隐性白羽鸡品系。
2.根据权利要求1所述的青胫隐性白羽鸡品系的选育方法，其特征在于:所述步骤(1)中青胫隐性白羽鸡为青胫黄麻羽地方鸡突变后的青胫白羽鸡。
3.根据权利要求1所述的青胫隐性白羽鸡品系的选育方法，其特征在于:所述步骤(3)中利用AS-PCR测定F2代青胫白羽公母鸡基因型的方法，包括以下步骤:以包含PMEL17基因的待测鸡全基因组DNA为模板，以引物对Pl为引物PCR扩增鸡PMEL17基因I等位基因，以引物对P2为引物PCR扩增鸡PMEL17基因i等位基因；对扩增得到的片段进行琼脂糖凝胶电泳，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定鸡显性白羽位点的基因型； 所述的引物对Pl为: 上游引物，Pl-F:5’ -CCGGCCTCTACTGCCTCAACGTCTCGT-3’，
下游引物，Pl-R:5 ’ -GTGCCCAGAGCTTCGGCGATGAGCGGTG-3’ ； 所述的引物对P2为: 上游引物，P2-F:5’ -CCACGCTCACCGTGGGGCTGCTGCTCAT-3，， 下游引物，P2-R:5’ -GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3’。
4.根据权利要求3所述的青胫隐性白羽鸡品系的选育方法，其特征在于:所述的PCR扩增反应体系为:2XTaq PCR MasterMix 12.5μ L, ddH20 9.5 μ L, Pl-F 0.4 μ L, Pl-R0.6 μ L，P2-F 0.6 μ L，P2-R 0.4 μ L，DNA 模板 1.0 μ L。
5.根据权利要求3所述的青胫隐性白羽鸡品系的选育方法，其特征在于:所述的PCR扩增反应程序为:94°C预变性4min ;94°C变性30s，64°C退火30s，72°C延伸15s，35个循环；72°C延伸 lOmin。
6.根据权利要求3所述的青胫隐性白羽鸡品系的选育方法，其特征在于:所述的琼脂糖凝胶的质量浓度为1.5%。
7.根据权利要求3所述的青胫隐性白羽鸡品系的选育方法，其特征在于:所述的琼脂糖凝胶电泳的电压为120V，电泳时间为40min。
8.根据权利要求3所述的青胫隐性白羽鸡品系的选育方法，其特征在于:所述的鉴定鸡显性白羽位点基因型的方法为:11基因型表现为322bp和224bp条带；Ii基因型表现为322bp、224bp和144bp条带；ii基因型表现为322bp和144bp条带。
9.根据权利要求1所述的青胫隐性白羽鸡品系的选育方法，其特征在于:将步骤(4)得到的显性白羽位点为ii基因型的青胫隐性白羽鸡品系与青胫黄麻羽鸡品种杂交配套，生产出有色羽肉鸡。
10.根据权利要求9所述的青胫隐性白羽鸡品系的选育方法，其特征在于:所述的青胫黄麻羽鸡品种为固始鸡、边鸡、淮北麻鸡、淮南麻黄鸡、五华鸡、崇仁麻鸡、琅琊鸡、卢氏鸡、桃源鸡、瑶鸡或茶花鸡。
【文档编号】A01K67/027GK103609527SQ201310589767
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年11月20日 优先权日:2013年11月20日
【发明者】康相涛, 田亚东, 李转见, 杨朋坤, 孙桂荣, 韩瑞丽, 蒋瑞瑞, 吕世杰, 李国喜, 刘小军, 闫峰宾, 王彦彬 申请人:河南农业大学