海带及多肋藻杂交新品种的制作方法
【专利摘要】本发明分涉及一种新的褐藻杂交新品种的育种技术。具体地说就是利用海带（Saccharinajaponica）雌配子体与多肋藻（Costariacostata）雄配子体杂交，获得杂交新品种的方法。可按如下步骤操作，1、分别克隆培养海带雌配子体与多肋藻雄配子体，获得可用于杂交育种的种质材料；2、取海带雌配子体与多肋藻雄配子体按1:1比例混合，倒入放有棕绳的烧杯中在适宜条件下培养；3、当棕绳上长出肉眼可见的幼孢子体（长度约0.5-1cm）时，转移到海上暂养；4、暂养一个月后，分苗，海上养殖5-6个月，获得成熟的“海多”新品种。本发明操作简单、成本低廉，可获得海带与多肋藻杂交新品种。
【专利说明】海带及多肋藻杂交新品种
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种褐藻种间杂交繁育的新品种。，具体地说就是通过海带雌配子体与多肋藻雄配子体杂交，海上养殖，获得了“海多”杂交新品种。
[0002]
【背景技术】
[0003]海带(51japonica)属于褐藻门(Phaeophyta),褐藻纲(Phaeophyceae),海带目(Laminariales),海带科(Laminariaceae),海带属iSaccharina)，原产于日本、朝鲜以及俄罗斯远东沿海地区。海带是我国主要的褐藻养殖品种，除了可以使用外，我国海带的褐藻胶年产量占全球总产量的60%左右。目前在我国已形成了一个包括海带良种繁育、栽培、食品加工、化工和生物制品开发的产业链。
[0004]多肋藻(Ccosiaia)属于褐藻门(Phaephyta),褐子纲(Phaeosporeae),海带目(Laminariales),海带科(Laminariaceae),多肋藻属(fiosiaria),是一种自然分布于太平洋北部沿岸潮间带或者潮下带浅海区的有较高经济价值的一年生大型褐藻，其富含碘以及多种人体必需的微量元素，营养价值高，口感好，味道鲜美，为海藻中的上等营养佳品。除了食用价值，多肋藻还是海藻工业的重要原材料，多肋藻具有提取褐藻胶、甘露醇、钾等化工原料以及制备褐藻淀粉的应用潜力。
[0005]目前，制约我国海藻养殖产业的主要瓶颈问题:第一养殖品种单一化；第二海带高值化开发和利用从上个 世纪五十年代到现在没有实质性的革新和发展。针对上述存在的瓶颈问题，“海多”新品的问世，可以丰富我国海藻养殖经济品种。另外，由于“海多”是海带和多肋藻的杂交种，具有二者的杂种优势，其中褐藻胶与岩藻聚糖硫酸酯中古洛糖醛酸和甘露糖醛酸的比例明显不同于其亲本海带和多肋藻，因而导致新品种的褐藻胶和岩藻聚糖硫酸酯的活性具有其特殊性，这将为海藻高值化利用提供具有潜在应用前景的活性化合物。
【发明内容】
[0006]本发明的目的运用海带及多肋藻配子体克隆杂交育苗技术，获得“海多”杂交新品种。
[0007]“海多”杂交新品种可按以下步骤操作:
1)克隆培养海带雌配子体和多肋藻雄配子体。取优良品系的海带雌配子体和多肋藻的雄配子体，搅拌器(JYD-P11S81，九阳)打碎10 s，将配子体打碎成长度约为200 μ m的配子体切段。将打碎的配子体悬浮扩增培养35 d，每周换一次无菌海水培养液，获得大量雌、雄配子体种质材料。海带雌配子体的培养条件为10 °C、40 μπιο?.um~2.s_S24 h光照；多肋藻雄配子体的培养条件为10 °C、20 μ mol.m_2.s'12:12 h (L:D)；.2)取雌、雄配子体按1:1混合，倒入放有直径3mm棕绳的烧杯中，10 °C、40μ mol.?α2.s'10:14 h (L:D)条件下培养28 d,每周换一次无菌海水培养液；3)当棕绳上长出肉眼可见的幼孢子体(长度约0.5-1 cm)时，转移到海上暂养；
4)暂养一个月后，分苗，海上养殖5-6个月，获得成熟的“海多”新品种。
[0008]所述无菌海水培养液组成为200 μ mol.L_1KN03, 20 μ mol.的无菌海水。
[0009]本发明具有以下优点
本发明利用配子体克隆杂 交技术，在实验 室条件下瞬间成功制备海藻新品种。
[0010]
【具体实施方式】
[0011]2012年8月24日，取实验室保存的海带雌配子体和多肋藻的雄配子体湿重各
2mg，搅拌器(JYD-P11S81，九阳)打碎10 s，将配子体打碎成长度约为200 μ m配子体切段，将打碎的配子体分别放入500 mL锥形瓶中进行悬浮扩增培养35 d。每周换一次无菌海水培养液，获得大量雌、雄配子体种质材料。海带雌配子体的培养条件为:10 °C、40μ mol.m_2.s_S 24 h光照。多肋藻雄配子体的培养条件为:10 °C、20 μ mol.m_2.s'12:12 h (L:D)。取海带雌配子体与多肋藻雄配子体湿重各15 mg混合，置于含有300 mL无菌海水以及直径3 mm棕绳的1 L烧杯中，10 °C、40 μ mol.m-2.s'10:14 h (L:D)条件下培养28 d，每周换一次无菌海水培养。2012年10月26日棕绳上长出肉眼可见的小孢子体(长度0.5-lcm)，将棕绳转移至海上暂养，一个月后分苗，海上养殖6个月，获得“海多”新品种。
【权利要求】
1.其特征在于:可按如下步骤操作，1)分别克隆培养海带雌配子体与多肋藻雄配子体，获得可用于杂交育种的种质材料；2)取海带雌配子体与多肋藻雄配子体按1:1比例混合，倒入放有棕绳的烧杯中在适宜条件下培养；3)当棕绳上长出肉眼可见的幼孢子体(长度约0.5-1 cm)时，转移到海上暂养；4)暂养一个月后，分苗，海上养殖5-6个月，获得“海多”孢子体。
2.按照权力1所述“海多”杂交新品种的育种方法，其特征在于海带雌配子体克隆培养的条件为:10 °C、40 μ mol.m^2.s'24 h光照；多肋藻雄配子体克隆培养条件:10 °C、20μ mol.m 2.s S 光周期为 12:12 h (L:D)。
3.按照权力1所述“海多”杂交新品种的育种方法，其特征在于取海带雌配子体与多肋藻雄配子体湿重各15 mg混合放入加有300 mL无菌海水和棕绳的烧杯中，培养条件为:10°C、40 μ mol.m 2.s S 光周期为 10:14 h (L:D)。
4.按照权力1所述“海多”杂交新品种的育种方法，其特征在于无菌海水培养液的组成为 200 μ mol.1 ΚΝ03, 20 μ mol.的无菌海水。
【文档编号】A01H1/02GK103651101SQ201310647469
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月6日 优先权日:2013年12月6日
【发明者】王高歌, 魏晓娇, 帅丽玫, 李丹丹, 张蕊, 路博钧 申请人:中国海洋大学