油茶叶提取物与金龟子绿僵菌复配杀虫剂及其制备方法
【专利摘要】油茶叶提取物与金龟子绿僵菌复配杀虫剂及其制备方法，所述复配杀虫剂由以下质量百分比的原料制成：油茶叶提取物30～60%、金龟子绿僵菌10～30%、表面活性剂5～20%、助剂10～20%、填料5～15%。本发明还包括所述复配杀虫剂的制备方法。本发明复配杀虫剂具有杀虫谱宽、活性高、效果稳定、杀虫效果快、抗药性强、残效期长、环境影响小、使用方便等特点；利用本发明，还可提高油茶的附加值，同时，也可推动绿僵菌的大规模应用。
【专利说明】油茶叶提取物与金龟子绿僵菌复配杀虫剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种植物源杀虫剂与微生物杀虫剂复配杀虫剂及其制备方法，尤其是涉及一种油茶叶提取物与金龟子绿僵菌复配杀虫剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002]目前在全球范围内，由于农业害虫所造成的农产品损失每年达到15~25%。大规模地使用化学农药是当前控制害虫的主要策略。但是化学农药的杀虫专一性差，田间残效期较长，同时容易诱发害虫对其产生抗药性，特别是残留化学农药对农产品和环境的污染，导致妇女流产、婴儿畸形以及诱发人类各种癌症等疾病，因此随着人类环境保护意识的增强，高效低毒的生物农药已成为当今农药的发展方向。相对于常规的化学农药而言，生物农药具有作用方式独特，防止对象专一，对天敌等有益生物安全，用量小，降解快，对人、畜、环境风险性低，特别适用于病、虫、草害综合防治等特点，是一种安全性更高的无污染农药或无公害农药，即与环境相容、作用机制独特的绿色农药。
[0003]W^iCamellia O/ei/era)起源于中国，为山茶科山茶属植物,在中国具有悠久的栽培历史，主要分布在湖南、江西、湖北、广西、安徽等17个省的丘陵地区，以湖南栽培最多。油茶是与橄榄、油棕树和椰子齐名的世界四大木本食用油源树种。油茶叶是油茶树的叶片，油茶叶所含的化学成分主要有皂苷类、黄酮类及鞣质类，是医药、农药工业的原料。其中皂苷类化合物是当今天然药物研究的热门领域，具有多种药理作用；而且茶皂素单独作为农业助剂，可提高农药的杀虫、杀菌效果，这些优点是化学合成表面活性剂所无法与之相比的；是当前市场重要的天然的非离子绿色表面活性剂；单独作为生物农药，茶皂素可直接用于防治某些病害虫。符合当前农药工业和农业绿色环保的可持续发展，具有良好的应用前景。但该属植物化学成分复杂，生物活性多样，长期以来，油茶的开发和应用都未涉及农药领域，它的药用价值被忽略，油茶叶大多掉落在油茶林地，直接腐烂而浪费。目前还没有报道利用油茶叶提取植物源杀虫剂，若能充分利用油茶叶资源，发掘其药用价值，开发出植物源杀虫剂，可以使其变废为宝，增加农村地区的农民收入，还利于促进我国油茶产业化的健康发展，产生良好的社会效益和经济效益。
[0004]绿層蔑(Metarhizium中文通用名:金龟子绿僵菌(简称绿僵菌),属子囊菌门、肉座菌目、麦角菌科、绿僵菌属，是一种广谱的昆虫病原菌。绿僵菌是能够寄生于多种害虫的一类杀虫真菌，通过体表入侵作用进入害虫体内，在害虫体内不断增繁殖通过消耗营养、机械穿透、产生毒素，并不断在害虫种群中传播，使害虫致死。绿僵菌具有一定的专一性，对人畜无害，同时还具有不污染环境、无残留、害虫不会产生抗药性、菌剂易生产等优点，具有广阔的应用前景，在国外应用其防治害虫的面积超过白僵菌，防治效果可与白僵菌媲美。目前白僵茵防治虫害的主要问题是绿僵菌单独使用，毒力不够，杀虫效率不高、杀虫速度较慢，受环境影响较大和效果不稳定等弱点，影响了其在农林害虫中的防治效果，因而在一定程度上限制了该类真菌杀虫剂的大规模应用。
[0005]近年来，复配杀虫剂对于解决单剂农药所带来的问题具有十分积极的作用。例如，CN200910225149.9公开了一种绿僵菌复配杀虫组合物及其应用，组合物的有效成分为金龟子绿僵菌和一种新烟碱类杀虫剂，其中组合物中绿僵菌的含量为I~100亿孢子/克，新烟碱类杀虫剂的含量为10~200克/千克，其余为农药辅助成分。这种绿僵菌与化学农药的复配组合物，与单用绿僵菌比较施用方便，药效稳定，速效性好；与单用化学农药相比，持效期长，减少化学农药的使用量，减少环境污染；组合物有效组分的作用机理不同，害虫不容易产生抗药性；但是这种复配农药与绿色农药要求有一定的距离。中国发明专科申请201310480725.0公开了一种杀虫剂组合物，该杀虫剂组合物包括以下重量份的原料:茶皂素25-30份；绿僵菌15-20份；伏虫隆6-9份；增效组分10-13份；乳化剂5_7份；这种绿僵菌与植物杀虫剂、化学杀虫剂的复配使得虫害大大减少，并且通过增效组分也可以大大提高药剂到达靶标的浓度，取得更好的杀虫效果。其中伏虫隆是苯甲酰脲类杀虫剂，虽然是一种重要的高效低毒杀虫剂，但是这种复配农药与绿色农药还是有一定的距离。
[0006]
【发明内容】
本发明要解决的技术问题是，提供一种油茶叶提取物与绿僵菌复配杀虫剂，该复配杀虫剂杀虫谱宽，活性高，效果稳定，杀虫效果快，残效期长，对环境影响小，使用方便；且为油茶叶资源的利用提供了一条有效途径。
[0007]本发明解决其技术问题采用的技术方案是:
本发明之一种油茶叶提取物与金龟子绿僵菌复配杀虫剂，由以下质量百分比的原料制成:油茶叶提取物30~60% ;金龟子绿僵菌10~30% ;表面活性剂5~20% ;助剂10~20% ；填料5~15%。
[0008]进一步，所述油茶叶提取物与金龟子绿僵菌复配杀虫剂，由以下质量百分比的原料制成:油茶叶提取物60% ;金龟子绿僵菌10% ;表面活性剂10% ;助剂15% ;填料5%。
[0009]进一步，所述油茶叶提取物与金龟子绿僵菌复配杀虫剂，所述由以下质量百分比的原料制成:油茶叶提取物40% ;金龟子绿僵菌20% ;表面活性剂20% ;助剂10% ;填料10%。
[0010]进一步，所述油茶叶提取物采用以下方法制成:
(O混合溶剂提取:将油茶叶经晒干后，经粉碎机粉碎，过200目筛，对过筛物用体积比:I~3:1 (优选2:1)甲醇和丙酮混合提取液加热至65~80°C (优选75°C )回流提取2~4次(优选3次)，每次加入甲醇和丙酮混合提取液的体积(ml):过筛物的质量(g)=7~9:1(优选8:1 )，每次提取时间为2~4小时(优选3小时)，合并每次的提取液后，用旋转蒸发仪进行减压蒸馏去除甲醇和丙酮，直至甲醇和丙酮全部挥发，得甲醇和丙酮提取物浸膏；挥发的甲醇和丙酮回收循环利用；
(2)水提:向步骤(1)所述甲醇和丙酮提取物浸膏中加水混匀，所加入水的体积(ml):甲醇和丙酮提取物浸膏质量(g)=2~4:1 (优选3:1);
(3)萃取:向步骤(2)所述甲醇和丙酮提取物水溶液中加入环己烷，所加入环己烷的体积:甲醇和丙酮提取物水溶液的体积=2~4:1 (优选3:1 )，搅拌5~10分钟(优选10分钟)，然后静置萃取2~4小时(优选3小时)后分层，取上层溶剂相进行减压蒸馏回收环己烷，收集下层水相，反复萃取3~5次(优选3次)，合并每次萃取的下层水相；
(4)二次萃取:向步骤(3)所得下层水相合并液中加入四氯化碳，所加入四氯化碳的体积:下层水相合并液的体积=2~4:1(优选3:1)，搅拌5~10分钟(优选10分钟)，然后静置萃取2~4小时(优选3小时)后分层，取下层溶剂相进行减压蒸馏回收四氯化碳，得下层浓缩液，反复萃取3~5次(优选3次)，合并每次萃取的下层浓缩液后，进行减压蒸馏去除残余的四氯化碳，得到油茶叶提取物浸膏，即为油茶叶提取物。
[0011]进一步，所述金龟子绿僵菌是活孢子的浓度为101°个/g~IO12个/g的孢子粉。
[0012]进一步,所述表面活性剂为十二烷基苯横酸纳、十二烷基硫酸纳、十二烷基苯横酸钙、壬基酚聚氧乙烯醚和山梨醇聚氧乙烯醚中的一种或几种的混合物。
[0013]进一步，所述助剂为聚乙烯醇、Morwet D-400、羧甲基纤维素、分散剂Z、木质素磺酸钙中的一种或几种的混合物。
[0014]进一步，所述填料为硅藻土、膨润土、凹凸棒土、淀粉、白炭黑和高岭土中的一种或几种的混合物。[0015]本发明之油茶叶提取物与金龟子绿僵菌复配杀虫剂的制备方法:将油茶叶提取物浸膏干燥后，经粉碎机粉碎，过200目筛，再将过筛物与金龟子绿僵菌
anisopIiae )、表面活性剂、助剂、填料按预定质量百分比混匀，即成。
[0016]研究表明，油茶叶提取物中的茶皂素杀虫剂药效持续时间超过其它植物型杀虫剂和化学农药，具有高效性，与其它农药复配，还可以节省原药的50%~70%。茶皂素与其它化学农药相比，一个显著的特点，就是对高级动物口服无毒性，克服了化学农药对人体的毒害作用。
[0017]本发明之油茶叶提取物的制备方法，采用混合溶剂提取与水提联合提取，环己烷、四氯化碳二次萃取，各部分萃取液经减压蒸馏，所得油茶叶提取物中茶皂素纯度更高，色泽更好，品质更高；同时实现了溶剂的循环利用，溶剂损耗少，提取时间短，大大地节约能源，工艺简单可靠，易于实现工业化。
[0018]本发明利用油茶叶提取物(植物源杀虫剂)与绿僵菌(微生物杀虫剂)进行复配制成一种新型杀虫剂，该复配杀虫剂具有杀虫谱宽、活性高、效果稳定、杀虫效果快、抗药性强、残效期长、环境影响小、使用方便的特点；试验证明，在喷洒稀释1000倍的本发明复配杀虫剂72小时后，平均杀虫率可达80%以上。该复配杀虫剂不但可以微生物农药速效性差的缺点，还可以提高植物源杀虫剂的杀虫活性。
[0019]本发明之油茶叶提取物与金龟子绿僵菌复配杀虫剂可用于果树、蔬菜、茶叶、甘庶或瓜类等经济作物害虫的防治。利用本发明，可充分利用山区丰富的油茶叶资源，解决目前生物农药缺乏的问题，而且可以促进山区经济的发展，同时，也可推动绿僵菌的大规模应用。
【具体实施方式】
[0020]以下结合实施例对本发明作进一步说明。
[0021]实施例1
本实施例复配杀虫剂由以下质量百分比的原料配制而成:油茶叶提取物60%、金龟子缘懂麗iMetarhiζium anisopliae)孢子粉(孢子粉中含活孢子的浓度为101°个/g) 10%、十二烷基苯磺酸钠10%、Morwet D-400 15%、硅藻土 5%。
[0022]所述油茶叶提取物按照以下方法制备而成:
(I)混合溶剂提取:将油茶叶经晒干后，用粉碎机粉碎，过200目筛，对过筛物加甲醇和丙酮混合提取液(甲醇和丙酮体积比8:1 )，加热至75°C回流提取3次，每次加入甲醇和丙酮混合提取液的体积(ml):过筛物的质量(g) =8:1，每次提取时间为3小时，合并每次的提取液后，用旋转蒸发仪进行减压蒸馏去除甲醇和丙酮，直至甲醇和丙酮全部挥发，得到甲醇和丙酮提取物浸膏；挥发的甲醇和丙酮回收利用；
(2)水提:向步骤(1)所述甲醇和丙酮提取物浸膏中加水混匀，得甲醇和丙酮提取物水溶液，所加入的水的质量相当于浸膏质量的3倍；
(3)萃取:向步骤(2)所述甲醇和丙酮提取物水溶液中加入环己烷，所加入环己烷的体积相当于甲醇和丙酮提取物水溶液的体积3倍，搅拌10分钟，然后静置萃取3小时后分层，取上层溶剂相进行减压蒸馏回收环己烷，收集下层水相，反复萃取3次，合并每次萃取的下层水相；
(4)二次萃取:向步骤(3)所得下层水相合并液中加入四氯化碳，所加入四氯化碳的体积相当于下层水相合并液的体积3倍，搅拌10分钟，然后静置萃取3小时后分层，取下层溶剂相进行减压蒸馏回收四氯化碳，得下层浓缩液，反复萃取3次，合并每次萃取的下层浓缩液后，进行减压蒸馏去除残余的四氯化碳，得到油茶叶提取物浸膏，烘干，即为油茶叶提取物。
[0023]本实施例复配杀虫剂制备:将所述油茶叶提取物用粉碎机粉碎，过200目筛，将所述过200目筛的油茶叶提取物粉与金龟子绿僵菌(ifeiarAiziw?孢子粉(孢子粉中含活孢子的浓度为IO12个/g)、十二烷基苯磺酸钠、Morwet D-400、娃藻土混匀，即成。
[0024]本实施例油茶叶提取物与金龟子绿僵菌复配杀虫剂杀虫药效如表1-3所示。
[0025](一)对斜纹夜蛾的毒杀作用
将实施例1复配杀虫剂用水按不同倍数(1000倍、1500倍、2000倍)稀释后，喷洒到甘蓝叶表面，然后将活的斜纹夜蛾饲养于甘蓝叶上进行杀虫药效试验，重复三次，另设3组对照组:对照组1:不喷洒实施例1复配杀虫剂；对照组2:喷洒稀释1000倍的油茶叶提取物杀虫剂(具体配方:油茶叶提取物浸膏粉、十二烷基苯磺酸钠、Morwet D-400、娃藻土按质量百分比70: 10: 15: 5混匀)；对照组3:喷洒稀释1000倍的金龟子绿僵菌杀虫剂(具体配方:金龟子绿僵菌aflisoWiae)孢子粉(活孢子的浓度为IO12个/g)、十二烧基苯磺酸钠、Morwet D-400、硅藻土按质量百分比70: 10: 15: 5混匀)。分别在不同的时间对杀虫效果进行统计，结果见表1。
【权利要求】
1.一种油茶叶提取物与金龟子绿僵菌复配杀虫剂，其特征在于，由以下质量百分比的原料制成:油茶叶提取物30~60%、金龟子绿僵菌10~30%、表面活性剂5~20%、助剂10~20%、填料5~15%。
2.如权利要求1所述的所述油茶叶提取物与金龟子绿僵菌复配杀虫剂，其特征在于，由以下质量百分比的原料制成:油茶叶提取物60% ;金龟子绿僵菌10% ;表面活性剂10% ;助剂15% ;填料5%
3.如权利要求1所述的所述油茶叶提取物与金龟子绿僵菌复配杀虫剂，其特征在于，所述油茶叶提取物与金龟子绿僵菌复配杀虫剂，其特征在于，由以下质量百分比的原料制成:油茶叶提取物40% ;金龟子绿僵菌20% ;表面活性剂20% ;助剂10% ;填料10%。
4.根据权利要求1或2或3所述的油茶叶提取物与金龟子绿僵菌复配杀虫剂，其特征在于，所述油茶叶提取物采用以下方法制成: (1)混合溶剂提取:将油茶叶晒干后，用粉碎机粉碎，加入甲醇和丙酮混合提取液，所述甲醇和丙酮混合提取液中，甲醇和丙酮的体积比为I~3: 1，加热至65~80°C回流提取2~4次，每次加入甲醇和丙酮混合提取液的体积(ml):过筛物的质量(g)=7~9:1，每次提取时间为2~4小时，合并每次的提取液后，用旋转蒸发仪进行减压蒸馏去除甲醇和丙酮，直至甲醇和丙酮全部挥发，得甲醇和丙酮提取物浸膏；挥发的甲醇和丙酮回收利用； (2)水提:向步骤(1)所述甲醇和丙酮提取物浸膏中加水混匀，得甲醇和丙酮提取物水溶液，所加入水的体积(ml):甲醇和丙酮提取物浸膏质量(g)=2~4:1 ; (3)萃取:向步骤(2)所述甲醇和丙酮提取物水溶液中加入环己烷，所加环己烷的体积:甲醇和丙酮提取物水溶液的体积=2~4:1，搅拌5~10分钟，然后静置萃取2~4小时后分层，取上层溶剂相进行减压蒸馏回收环己烷，收集下层水相，反复萃取3~5次，合并每次萃取的下层水相； (4)二次萃取:向步骤(3)所得下层水相合并液中加入四氯化碳，所加四氯化碳的体积:下层水相合并液的体积=2~4:1,搅拌5~10分钟,然后静置萃取2~4小时后分层，取下层溶剂相进行减压蒸馏回收四氯化碳，得下层浓缩液，反复萃取3~5次，合并每次萃取的下层浓缩液后，进行减压蒸馏去除残余的四氯化碳，得到油茶叶提取物浸膏，烘干，即得油茶叶提取物。
5.根据权利要求4所述的油茶叶提取物与金龟子绿僵菌复配杀虫剂，其特征在于，所述步骤(1)，将油茶叶晒干后，用粉碎机粉碎，过200目筛，在过筛物中加入甲醇和丙酮混合提取液，所述甲醇和丙酮混合提取液中，甲醇和丙酮的体积比为2:1，加热至75°C回流提取3次，每次加入甲醇和丙酮混合提取液的体积(ml):过筛物的质量(g)=8:l，每次提取时间为3小时，合并每次的提取液后，用旋转蒸发仪进行减压蒸馏去除甲醇和丙酮，直至甲醇和丙酮全部挥发，得甲醇和丙酮提取物浸膏。
6.根据权利要求4或5所述的油茶叶提取物与金龟子绿僵菌复配杀虫剂，其特征在于，所述步骤(2)，向步骤(1)所述甲醇和丙酮提取物浸膏中加水混匀，所加入水的体积(ml):甲醇和丙酮提取物浸膏质量(g)=3:l。
7.根据权利要求4~6之一所述的油茶叶提取物与金龟子绿僵菌复配杀虫剂，其特征在于，所述步骤(3)，向步骤(2)所述甲醇和丙酮提取物水溶液中加入环己烷，所加环己烷的体积:甲醇和丙酮提取物水溶液的体积=3:1，搅拌10分钟，然后静置萃取3小时后分层，取上层溶剂相进行减压蒸馏回收环己烷，收集下层水相，反复萃取3次，合并每次萃取的下层水相。
8.根据权利要求4~7之一所述的油茶叶提取物与金龟子绿僵菌复配杀虫剂，其特征在于，所述步骤(4)，向步骤(3)所得下层水相合并液中加入四氯化碳，所加入四氯化碳的体积:下层水相合并液的体积=3:1，搅拌10分钟，然后静置萃取3小时后分层，取下层溶剂相进行减压蒸馏回收四氯化碳，得下层浓缩液，反复萃取3次，合并每次萃取的下层浓缩液后，进行减压蒸馏去除残余的四氯化碳，得到油茶叶提取物浸膏。
9.根据权利要求1~8之一所述的油茶叶提取物与金龟子绿僵菌复配杀虫剂，其特征在于，所述金龟子绿僵菌是活孢子的浓度为101°个/g~IO12个/g的孢子粉； 所述表面活性剂为十二烷基苯磺酸钠、十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钙、壬基酚聚氧乙烯醚和山梨醇聚氧乙烯醚中的一种或几种的混合物；所述助剂为聚乙烯醇、MorwetD-400、羧甲基纤维素、分散剂Z、木质素磺酸钙中的一种或几种的混合物；所述填料为硅藻土、膨润土、凹凸棒土、淀粉、白炭黑和高岭土中的一种或几种的混合物。
10.一种如权利要求1~9之一所述的油茶叶提取物与金龟子绿僵菌复配杀虫剂的制备方法，其特征在于，将油茶叶提取物浸膏干燥后，经粉碎机粉碎，过200目筛，再将过筛物与金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopIiae)、表面活性剂、助剂、填料按预定质量百分比混匀，即成。
【文档编号】A01N65/08GK103828842SQ201410076112
【公开日】2014年6月4日 申请日期:2014年3月4日 优先权日:2014年3月4日
【发明者】毛绍名, 章怀云, 刘高强 申请人:中南林业科技大学