一种添加猪血球蛋白粉的甲鱼饲料的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种饲料生产【技术领域】，尤其涉及一种添加猪血球蛋白粉的甲鱼饲料。饲料配方按重量份计，包括下列组分：鱼粉0.5-0.8份、玉米粉35-42份、猪血红蛋白粉6-9份、豆粕18-22份、麦麸5-8份、蝇蛆粉4-8份、骨粉2-3份、贝壳粉3-5份、鱼油2-3份、螺旋藻粉3-5份、碳酸氯钙0.2-0.3份、复合多维0.02-0.03份；猪血球蛋白粉的制备包括猪血血红蛋白溶液制备，第一次超声波处理；前处理：物理脱氧，调节pH值，第二次超声波处理；分段酶解脱色；活性炭脱色：加入占其重量为1-2%的活性炭在温度为25-35℃进行脱色处理5-10min；后处理；喷雾干燥。本发明方法脱色效果好，能制备蛋白含量高的低灰分的血球蛋白粉，所制备的甲鱼饲料安全性高、营养价值高、不影响水体颜色和质量。
【专利说明】一种添加猪血球蛋白粉的甲鱼饲料
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种饲料生产【技术领域】，尤其涉及一种添加猪血球蛋白粉的甲鱼饲 料。
【背景技术】
[0002] 猪血中红细胞的蛋白含量高达38%，占全血蛋白总量的75%以上，其中92% 以上是血红蛋白，因此猪血球是一种优良的动物蛋白源，长期以来猪血加工者直接将其制 成血球粉销售。但由于血球粉中含有血红素，使得血球粉为黑红色，并且带有很重的血腥 味，感官不好难以接受，其经济附加值不高。
[0003] 血红素是以卟啉铁的形式与四个珠蛋白结合形成血红蛋白，存在于红细胞中。在 食品工业中，血红素可替代肉制品中的发色剂硝酸盐及人工合成色素，使用血红素可减少 亚硝酸盐的致癌作用。在制药工业中，血红素可作为半合成胆红素原料，而且是抗癌的特 效药。血红素在临床上作为补铁剂，可治疗由缺铁引起的贫血症，这种血红素补铁剂可以 直接被人体吸收，吸收率高达10%?20%，具有无体内铁蓄积中毒及胃肠刺激等不良反 应等优点。
[0004] CN100581377C(2010-1-20)公开了一种脱血红素猪血血红蛋白酶解物和血红素肽 的制备方法；该方法以猪血红细胞为原料，通过溶血、复合蛋白酶酶解、等电离心分离制备 脱血红素猪血血红蛋白酶解物及血红素肽。然而该方法制备产物的灰分较大，且脱色效果 仍然有待改进。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种安全性高、营养价值高、不影响水体颜色和质量的添加 猪血球蛋白粉的甲鱼饲料。
[0006] 本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的： 一种添加猪血球蛋白粉的甲鱼饲料，其所述饲料配方按重量份计，包括下列组分：鱼粉 0. 5-0. 8份、玉米粉35-42份、猪血红蛋白粉6-9份、豆柏18-22份、麦麸5-8份、蝇蛆粉4-8 份、骨粉2-3份、贝壳粉3-5份、鱼油2-3份、螺旋藻粉3-5份、碳酸氯钙0. 2-0. 3份、复合多 维 0· 02-0. 03 份； 所述的复合多维各组分含量如下（/l〇〇g):维生素 A 800-900万IU、维生素 BI 1-2. 5g、 维生素 B2 3. 5-4g、维生素 B6 0. 5-2g、维生素 B12 l-3g、维生素 D3 350-500万IU、维生素 E0·l-0·5万IU、维生素 K3 0·5-2g、生物素0·05-0·lg、叶酸0·l-0·3g、烟酸l-3g、赖氨酸 l_3g、泛氨酸0. 5-lg、蛋氨酸l-3g、色氨酸l-3g、精氨酸l-3g、缬氨酸l-3g、组氨酸l-3g、苏 氨酸l_3g、钾钠锌2-3g、葡萄糖10-50g、黄氏多糖3-5g ; 所述猪血球蛋白粉依次通过以下步骤制备而成： (1)猪血血红蛋白溶液制备：将检验合格的生猪采血后，加入按照质量比I :2-5 : 0. 01-0. 03混合的柠檬酸二钠、碳酸氢钠和从天然植物中提取的植物酚，其中柠檬酸二钠与 猪血的重量比为1-2 :1000,混合均匀后在15-25°C第一次碟式离心分离3-6min，获得第一 上清层和第一沉淀层，分离获得第一沉淀物，往第一沉淀物中加入去离子水，在1800-2500W 的超声波功率下第一次超声波处理30-60s获得猪血血红蛋白溶液； 所述从天然植物中提取的植物酚为茶多酚或苹果多酚； (2) 前处理：使用氮气鼓泡脱氧对所述猪血血红蛋白溶液进行第一次物理脱氧和初步 脱色，然后将脱氧后的所述猪血血红蛋白溶液调节PH值至6-7,然后在600-800W的超声波 功率下第二次超声波处理50-90S获得前处理液； (3) 分段酶解脱色：将所述前处理液升温至28-35°C，加入第一复合酶并保温1-1. 5h， 所述第一复合酶由动物蛋白水解酶、枯草菌蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰酶按质量比I :1-2 : 0. 5-0. 8 :0. 2-0. 4混合而成，所述动物蛋白水解酶与所述猪血血红蛋白溶液的浓度比为 10000-20000U/g ;然后再升温至45-50°C，加入第二复合酶并保温I. 5-2h后终止酶解反应 获得酶解脱色液；所述第二复合酶由枯草菌蛋白酶和碱性蛋白酶按质量比I :2_3混合而 成；所述第一复合酶与所述第二复合酶的质量比为3-5 :1 ; (4) 活性炭脱色：向所述酶解脱色液中加入占其重量为1-2%的活性炭在温度为 25-35 °C进行脱色处理5-10min获得活性炭脱色液； (5) 后处理：将所述活性炭脱色液调节pH值至4-5,水浴15-25min，在15-25°C第二次 碟式离心分离2-5min，获得第二上清层和第二沉淀层；取第二上清层在压力为0. 5-0. SMPa 下超滤膜过滤浓缩分离获得第二浓缩液； 所述超滤膜为聚偏氟乙烯超滤膜，截留分子量为6000-8000Da ; (6) 喷雾干燥：将所述第二浓缩液进行喷雾干燥获得乳白色的猪血球蛋白多肽粉；所 述喷雾干燥的进风温度为190_240°C，出风温度为60-70°C，最大水分蒸发量为3-5kg/h。
[0007] 本发明猪血血红蛋白溶液制备时加入的柠檬酸二钠、碳酸氢钠和从天然植物中提 取的植物酚混合物可以使猪血抗凝和防变性，提高其热稳定性，保证营养成分不流失；获得 沉淀物后进行超声波处理是为了对沉淀物中的猪血球细胞进行预破碎，利于后续的脱色； 脱色采用前处理初步脱色、分段酶解二次脱色、活性炭脱色和后处理多级脱色处理和提纯 工艺，可充分脱除其中的颜色和血腥味，使最终制得的血球蛋白多肽粉颜色接近乳白色，蛋 白含量高达96%以上，灰分低至1%以下；溶解度彡98%，挥发性盐基氮< 130mg/kg ;沙门 氏菌、猪瘟病毒、口蹄疫及圆环病毒均不检出。
[0008] 本发明使得血球蛋白多肽粉脱除了颜色和血腥味，接近乳白色，并具有乳香味，其 感官性状大幅提升；血球蛋白多肽粉灰分含量低，溶解度好，蛋白含量高，尤其富含大量的 小分子多肽，并且提高了多种氨基酸的含量。加工的饲料营养有改进，安全性高、营养价值 高、不影响水体颜色和质量。
[0009] 作为优选，所述饲料中包括含有芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌、维生素、有机酸、促生 长因子的复合菌类添加剂；所述复合菌类添加剂按重量份包括3-5份。
[0010] 通过实施此项技术方案，可维持甲鱼肠道生态平衡，抑制有害菌生长。作为优选， 取所述后处理步骤中获得的第二沉淀层物质，在-l〇-15°C冷冻l-2h，自然解冻后添加1-2 倍去离子水洗涤，然后进行离心分离，取离心分离获得的沉淀物，添加〇. 1-0. 2倍去离子水 洗涤后，进行第二次物理脱氧，接着再离心分离，最后冷冻干燥得到血红素肽。
[0011] 以原始猪血为原料，经生物酶解配合多级处理技术和该方法制得血红素粗品副 产物。采用本发明方法制备的血红素回收率达95%以上，血红素肽中的血红素含量达到 40%-45%，颜色为紫红色，并且无腥味，发明人发现，这与冷冻分离后又进行第二次物理脱氧 有关。
[0012] 作为优选，所述喷雾干燥的进风温度为190-240°c，出风温度为60-70°C，最大水 分蒸发量为3-5kg/h。
[0013] 作为优选，所述猪血血红蛋白溶液制备具体是将检验合格的生猪采血后，加入按 照质量比1 :3 :0. 03混合的柠檬酸二钠、碳酸氢钠和从天然植物中提取的植物酚，其中柠檬 酸二钠与猪血的重量比为1. 5 :1000,混合均匀后在20°C第一次碟式离心分离4min，获得第 一上清层和第一沉淀层，分离获得第一沉淀物，往第一沉淀物中加入1. 8-2倍体积的去离 子水，在2000W的超声波功率下第一次超声波处理50s获得猪血血红蛋白溶液。
[0014] 作为优选，所述后处理是将所述酶解脱色液调节pH值至4-5,在温度为10-18°c的 水浴中处理15-25min，在18°C第二次碟式离心分离3min，获得第二上清层和第二沉淀层； 取第二上清层在压力为0. 6MPa下超滤膜过滤浓缩分离获得第二浓缩液。
[0015] 作为优选，所述第一次碟式分离采用的碟式分离机，包括机体，其所述机体内设置 有转鼓，所述机体顶部设置有进出口装置，所述进出口装置包括平行布置的原料进口管、重 相出口管和轻相出口管，所述原料进口管、重相出口管和轻相出口管与所述转鼓相通，所述 机体侧面设置有与所述转鼓相通的排渣部和废水出口，所述废水出口位于所述排渣部的下 方，所述机体的侧面设置有清洗水进口，所述排渣部内设置有PLC装置； 所述进出口装置包括进出口座以及固定在所述进出口座上的原料进口管，所述原料进 口管的侧壁上设置有用于分离重相的上向心泵和用于分离轻相的下向心泵，所述上向心泵 位于所述下向心泵的上方，所述原料进口管的一侧连接有在所述原料进口管径向延伸的重 相出口管的一端，所述原料进口管的另一侧连接有在所述原料进口管径向延伸的轻相出口 管的一端，所述重相出口管与所述轻相出口管的另一端分别设置有流量调节装置。
[0016] 本发明的优点是： (1) 采用可编程逻辑控制器（PLC)装置设置在所述排渣部，可以在连续进料生产的情况 下实行定期定量排渣，也可以在停止进料时进行全排渣，以便自动清洗转鼓中的污垢，具有 自动化程度高、对工艺调整的适应性强、调节方便、分离效果好的优点； (2) 通过所述原料进口管、重相出口管和轻相出口管的布置，同时配合转鼓和排渣部的 设置，可以使密度相对较大的重料血球通过下向心泵室流出，使密度相对较小的轻料血浆 从下向心泵室流出，对猪血血浆和血球分离的分离性能高、效果好； (3) 过所述原料进口管与所述上向心泵和下向心泵的布置，同时配合重相出口管、轻相 出口管以及流量调节装置，可以使密度相对较大的重料血球通过下向心泵流出，使密度相 对较小的轻料血浆从下向心泵流出，对猪血血浆和血球分离的分离性能高、效果好。
[0017] 作为优选，所述转鼓包括主轴、固定所述主轴的基座以及与所述基座相邻的转鼓 体，其还包括压紧在所述转鼓体上的且分布于所述主轴两侧的碟片压盖和转鼓盖，所述主 轴侧壁固设有与所述主轴呈30-60°夹角的进料分配管，所述转鼓体内设置有不均匀布置 的碟片，所述碟片与所述主轴的夹角为30-60°，所述主轴顶部设置有用于分离不同密度物 料的比重环，所述比重环上方设置有用于分离重相的上向心泵室，所述比重环下方设置有 用于分离轻相的下向心泵室。
[0018] 本发明通过所述进料分配管与所述碟片的角度布置，同时配合比重环以及上向心 泵室与下向心泵室的设置，可以使密度相对较大的重料血球通过下向心泵室流出，使密度 相对较小的轻料血浆从下向心泵室流出，对猪血血浆和血球分离的分离性能高、效果好。
[0019] 更优选，所述碟片压盖与所述主轴的夹角为30-60°，所述转鼓盖与所述主轴的夹 角为 30-60°。
[0020] 更优选，所述进料分配管下方且位于所述基座与所述转鼓体的相邻处设置有0型 密封圈；所述0型密封圈的周向对称设置有用于卡紧密封槽的两道切口，所述两道切口与 所述0型密封圈圆心的连线夹角为90°。
[0021] 0型密封圈可使转鼓密封性更好，从而提高血浆和血球的分离效果。
[0022] 更优选，所述流量调节装置包括与所述重相出口管或所述轻相出口管的另一端相 通的流量调节室，所述流量调节室连接有压力装置。
[0023] 通过流量调节室中的压力调节，可以控制重相料和轻相料的进出口压力，从而提 高分离效果。
[0024] 综上所述，本发明具有以下有益效果： 1、 本发明制备的猪血球蛋白多肽粉脱除了颜色和血腥味，接近乳白色，并具有乳香味， 其感官性状大幅提升； 2、 本发明制备的甲鱼饲料安全性高、营养价值高、不影响水体颜色和质量。
【专利附图】
【附图说明】
[0025] 图1是本发明碟式分离机的正视图； 图2是本发明碟式分离机的俯视图； 图3是本发明碟式分离机的侧视图； 图4是本发明碟式分离机的工作示意图； 图5是本发明碟式分离机转鼓剖视图； 图6是本发明0型密封圈放大示意图； 图7是本发明进出口装置的示意图； 图中，1-转鼓；2-进出口装置；3-排渣部；4-废水出口；5-清洗水进口； 11-主轴；12-基座；13-转鼓体；14-碟片压盖；15-转鼓盖；16-进料分配管；17-碟片； 18-比重环；19-上向心泵室；110-下向心泵室；111-异形锁紧圈；112-定位块；113-内六 角锥端紧定螺钉；114-水室；115-0型密封圈；116-切口； 21-进出口座；22-原料进口管；23-上向心泵；24-下向心泵；25-重相出口管；26-轻 相出口管；27-流量调节装置；271-流量调节室；272-压力装置；273-第一视镜玻璃； 28-进料接头；281-第二视镜玻璃。
[0026]
【具体实施方式】
[0027] 以下结合附图对本发明作进一步详细说明。
[0028] 实施例一 饲料配方按重量份计，包括下列组分：鱼粉0. 8份、玉米粉42份、猪血红蛋白粉9份、豆 柏22份、麦麸8份、蝇蛆粉8份、骨粉3份、贝壳粉5份、鱼油3份、螺旋藻粉5份、碳酸氯钙 0.3份、复合多维0.02份； 复合多维含下列各重量组分（/IOOg):维生素 A 800万IU、维生素 BI lg、维生素 B2 3. 5g、维生素 B6 2g、维生素 B12 lg、维生素 D3 350万IU、维生素 E 0. 35万IU、维生素 K3 0. 8g、生物素0. lg、叶酸0. 2g、烟酸I. 5g、赖氨酸I. 5g、泛氨酸0. 5g、蛋氨酸2g、色氨酸2g、 精氨酸2g、缬氨酸2g、组氨酸2g、苏氨酸2g、钾钠锌2. 5g、葡萄糖30g、黄氏多糖3g。
[0029] 猪血血红蛋白溶液制备：将检验合格的生猪米血后，加入按照质量比I :5 :0. 03 混合的柠檬酸二钠、碳酸氢钠和茶多酚或苹果多酚，其中柠檬酸二钠与猪血的重量比为2 : 1000,混合均匀后在25°C第一次碟式离心分离6min，获得第一上清层和第一沉淀层，分离 获得第一沉淀物，往第一沉淀物中加入去离子水，在2500W的超声波功率下第一次超声波 处理60s获得猪血血红蛋白溶液； 前处理：使用氮气鼓泡脱氧对猪血血红蛋白溶液进行第一次物理脱氧和初步脱色，然 后将脱氧后的猪血血红蛋白溶液调节PH值至7,然后在800W的超声波功率下第二次超声波 处理90s获得前处理液； 分段酶解脱色：将前处理液升温至35°C，加入第一复合酶并保温I. 5h，第一复合酶由 动物蛋白水解酶、枯草菌蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰酶按质量比1 : 2 : 0. 8 : 0. 4混合而成， 动物蛋白水解酶与猪血血红蛋白溶液的浓度比为20000U/g ;然后再升温至50°C，加入第二 复合酶并保温2h后终止酶解反应获得酶解脱色液；第二复合酶由枯草菌蛋白酶和碱性蛋 白酶按质量比1 : 3混合而成；第一复合酶与第二复合酶的质量比为5 :1 ; 活性炭脱色：向酶解脱色液中加入占重量为1-2%的活性炭在温度为25-35°C进行脱色 处理5-10min获得活性炭脱色液； 后处理：将活性炭脱色液调节pH值至5,水浴25min，在25 °C第二次碟式离心分离 5min，获得第二上清层和第二沉淀层；取第二上清层在压力为0. SMPa下用截留分子量为 8000Da的PVDF超滤膜过滤浓缩分离获得第二浓缩液； 喷雾干燥：将第二浓缩液进行喷雾干燥获得乳白色的猪血球蛋白多肽粉，喷雾干燥的 进风温度为240°C，出风温度为70°C，最大水分蒸发量为5kg/h。血球蛋白多肽粉颜色接近 乳白色，蛋白含量高达96%以上，灰分低至1%以下；溶解度>98%，挥发性盐基氮< 130mg/ kg ;沙门氏菌、猪瘟病毒、口蹄疫及圆环病毒均不检出。
[0030] 取后处理步骤中获得的第二沉淀层物质，在-15°C冷冻2h，自然解冻后添加2倍去 离子水洗涤，然后进行离心分离，取离心分离获得的沉淀物，添加0.2倍去离子水洗涤后， 进行第二次物理脱氧，接着再离心分离，最后冷冻干燥得到血红素肽。血红素回收率达96% 以上，血红素肽中的血红素含量达到40%，颜色为紫红色，并且无腥味。
[0031] 如图1-图7所示，第一次碟式分离采用的碟式分离机包括机体，机体内设置有转 鼓1，机体顶部设置有进出口装置2,进出口装置2包括平行布置的原料进口管22、重相出口 管25和轻相出口管26,原料进口管22、重相出口管25和轻相出口管26与转鼓1相通，机体 侧面设置有与转鼓1相通的排渣部3和废水出口 4,废水出口 4位于排渣部3的下方，机体 的侧面设置有清洗水进口 5,排渣部3内设置有PLC装置。转鼓1包括主轴11、固定主轴11 的基座12以及与基座12相邻的转鼓体13,其还包括压紧在转鼓体13上的且分布于主轴11 两侧的碟片压盖14和转鼓盖15,主轴11侧壁固设有与主轴11呈30-60°夹角的进料分配 管16,转鼓体13内设置有不均匀布置的碟片17,碟片17与主轴11的夹角为30-60°，主轴 11顶部设置有用于分离不同密度物料的比重环，比重环上方设置有用于分离重相的上向心 泵室19,比重环下方设置有用于分离轻相的下向心泵室110。碟片压盖14与主轴11的夹 角为30-60°，优选50° ;转鼓盖15与主轴11的夹角为30-60°，优选50°。碟片压盖14 和转鼓盖15的垂直距离为4cm。转鼓盖15上设置有异形锁紧圈111和定位块112。基座 12下方设置有用于反洗的水室114,清洗水进口 5与水室114相通。进料分配管16下方且 位于基座12与转鼓体13的相邻处设置有O型密封圈115。O型密封圈115的周向对称设 置有用于卡紧密封槽的两道切口 116,两道切口 116与O型密封圈115圆心的连线夹角为 90°。进出口装置2包括进出口座21以及固定在进出口座21上的原料进口管22,原料进 口管22的侧壁上设置有用于分离重相的上向心泵23和用于分离轻相的下向心泵24,上向 心泵23位于下向心泵24的上方，原料进口管22的一侧连接有在原料进口管22径向延伸 的重相出口管25的一端，原料进口管22的另一侧连接有在原料进口管22径向延伸的轻相 出口管26的一端，重相出口管25与轻相出口管26的另一端分别设置有流量调节装置27。 流量调节装置27包括与重相出口管25或轻相出口管26的另一端相通的流量调节室271， 流量调节室271连接有压力装置272。转鼓体13上设置有将进料分配管16进一步固定的 内六角锥端紧定螺钉113,流量调节室271上设置有第一视镜玻璃273。
[0032] 原料进口管的顶端上方设置有进料接头28,进料接头28上设置有第二视镜玻璃 281。通过第一视镜玻璃和第二视镜玻璃的安装，可以更准确地观察重相料和轻相料的分离 情况。
[0033] 实施例二 饲料配方按重量份计，包括下列组分：鱼粉〇. 5份、玉米粉35份、猪血红蛋白粉6份、豆 柏18份、麦麸5份、蝇蛆粉4份、骨粉2份、贝壳粉3份、鱼油2份、螺旋藻粉3份、碳酸氯钙 0.2份、复合多维0.03份； 复合多维含下列各重量组分（/IOOg):维生素 A 800万IU、维生素 BI 1.6g、维生素 B2 3. 5g、维生素 B6 1.5g、维生素 B12 1.5g、维生素 D3 450万IU、维生素 E 0. 3万IU、维生素 K3 lg、生物素0. 08g、叶酸0. 15g、烟酸3g、赖氨酸3g、泛氨酸0. 5g、蛋氨酸3g、色氨酸2. 2g、 精氨酸2g、缬氨酸I. 5g、组氨酸I. 5g、苏氨酸lg、钾钠锌2g、葡萄糖50g、黄氏多糖3. 3g。
[0034] 猪血血红蛋白溶液制备：将检验合格的生猪米血后，加入按照质量比I :2 :0. 01 混合的柠檬酸二钠、碳酸氢钠和茶多酚或苹果多酚，其中柠檬酸二钠与猪血的重量比为1 : 1000,混合均匀后在15°c第一次碟式离心分离3min，获得第一上清层和第一沉淀层，分离 获得第一沉淀物，往第一沉淀物中加入去离子水，在1800W的超声波功率下第一次超声波 处理30s获得猪血血红蛋白溶液； 前处理：使用氮气鼓泡脱氧对猪血血红蛋白溶液进行第一次物理脱氧和初步脱色，然 后将脱氧后的猪血血红蛋白溶液调节PH值至6，然后在600W的超声波功率下第二次超声波 处理50s获得前处理液； 分段酶解脱色：将前处理液升温至28°C，加入第一复合酶并保温lh，第一复合酶由动 物蛋白水解酶、枯草菌蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰酶按质量比1 :1 :〇. 5 :0. 2混合而成，动物蛋 白水解酶与猪血血红蛋白溶液的浓度比为l〇〇〇〇U/g ;然后再升温至45°C，加入第二复合酶 并保温I. 5h后终止酶解反应获得酶解脱色液；第二复合酶由枯草菌蛋白酶和碱性蛋白酶 按质量比I :2混合而成；第一复合酶与第二复合酶的质量比为3 :1 ; 活性炭脱色：向酶解脱色液中加入占酶解脱色液重量为1%的活性炭在温度为25°C进 行脱色处理5min获得活性炭脱色液； 后处理：将活性炭脱色液调节pH值至4,水浴15min，在15-25°C第二次碟式离心分离 2min，获得第二上清层和第二沉淀层；取第二上清层在压力为0.5MPa下用截留分子量为 6000Da的PVDF超滤膜过滤浓缩分离获得第二浓缩液； 喷雾干燥：将第二浓缩液进行喷雾干燥获得乳白色的猪血球蛋白多肽粉，喷雾干燥的 进风温度为190°C，出风温度为60°C，最大水分蒸发量为3kg/h。血球蛋白多肽粉颜色接近 乳白色，蛋白含量高达97%以上，灰分低至1%以下；溶解度>98%，挥发性盐基氮< 130mg/ kg;沙门氏菌、猪瘟病毒、口蹄疫及圆环病毒均不检出。
[0035] 取后处理步骤中获得的第二沉淀层物质，在-KTC冷冻lh，自然解冻后添加1-2 倍去离子水洗涤，然后进行离心分离，取离心分离获得的沉淀物，添加〇. 1倍去离子水洗涤 后，进行第二次物理脱氧，接着再离心分离，最后冷冻干燥得到血红素肽。血红素回收率达 96%以上，血红素肽中的血红素含量达到45%，颜色为紫红色，并且无腥味。
[0036] 实施例三 饲料配方按重量份计，包括下列组分：鱼粉0. 6份、玉米粉38份、猪血红蛋白粉7份、豆 柏19份、麦麸7份、蝇蛆粉6份、骨粉2. 6份、贝壳粉4份、鱼油2. 7份、螺旋藻粉4份、碳酸 氯钙0. 25份、复合多维0. 026份； 复合多维含下列各重量组分（/IOOg):维生素 A 850万IU、维生素 BI 1.5g、维生素 B2 3. 6g、维生素 B6 lg、维生素 B12 2g、维生素 D3 400万IU、维生素 E 0. 3万IU、维生素 K3 lg、 生物素0. 08g、叶酸0. 15g、烟酸3g、赖氨酸3g、泛氨酸0. 5g、蛋氨酸3g、色氨酸2g、精氨酸 2. 2g、缬氨酸I. 5g、组氨酸2g、苏氨酸0. 5、钾钠锌I. 8g、葡萄糖10g、黄氏多糖3. 5g。
[0037] 猪血血红蛋白溶液制备具体是将检验合格的生猪采血后，加入按照质量比I :3 : 〇. 03混合的柠檬酸二钠、碳酸氢钠和从天然植物中提取的植物酚，其中柠檬酸二钠与猪血 的重量比为1. 5 :1000,混合均匀后在20°C第一次碟式离心分离4min，获得第一上清层和第 一沉淀层，分离获得第一沉淀物，往第一沉淀物中加入1. 8-2倍体积的去离子水，在2000W 的超声波功率下第一次超声波处理50s获得猪血血红蛋白溶液。
[0038] 前处理：使用氮气鼓泡脱氧对猪血血红蛋白溶液进行第一次物理脱氧和初步脱 色，然后将脱氧后的猪血血红蛋白溶液调节PH值至6. 5,然后在700W的超声波功率下第二 次超声波处理70s获得前处理液； 分段酶解脱色：将前处理液升温至30°C，加入第一复合酶并保温I. 2h，第一复合酶由 动物蛋白水解酶、枯草菌蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰酶按质量比I :1. 2 :0. 6 :0. 3混合而成，动 物蛋白水解酶与猪血血红蛋白溶液的浓度比为12000U/g ;然后再升温至48°C，加入第二复 合酶并保温I. 8h后终止酶解反应获得酶解脱色液；第二复合酶由枯草菌蛋白酶和碱性蛋 白酶按质量比I :2. 5混合而成；第一复合酶与第二复合酶的质量比为4 :1 ; 活性炭脱色：向酶解脱色液中加入占重量为1. 6%的活性炭在温度为28°C进行脱色处 理7min获得活性炭脱色液； 后处理：将活性炭脱色液调节pH值至4,在温度为15°C的水浴中处理18min，在18°C第 二次碟式离心分离3min，获得第二上清层和第二沉淀层；取第二上清层在压力为0. 6MPa下 超滤膜过滤浓缩分离获得第二浓缩液。
[0039] 喷雾干燥：将第二浓缩液进行喷雾干燥获得乳白色的猪血球蛋白多肽粉，喷雾干 燥的进风温度为200°C，出风温度为65°C，最大水分蒸发量为4kg/h。
[0040] 血球蛋白多肽粉颜色接近乳白色，蛋白含量高达98%以上，灰分低至1%以下；溶解 度彡98%，挥发性盐基氮< 130mg/kg ;沙门氏菌、猪瘟病毒、口蹄疫及圆环病毒均不检出。
[0041] 取后处理步骤中获得的第二沉淀层物质，在-12°C冷冻I. 5h，自然解冻后添加1. 5 倍去离子水洗涤，然后进行离心分离，取离心分离获得的沉淀物，添加〇. 15倍去离子水洗 涤后，进行第二次物理脱氧，接着再离心分离，最后冷冻干燥得到血红素肽。血红素回收率 达96%以上，血红素肽中的血红素含量达到45%，颜色为紫红色，并且无腥味。
[0042] 实施例四 同实施例一，不同的是饲料中还包括3-5份复合菌类添加剂；复合菌类添加剂含有芽 孢杆菌、乳酸菌、酵母菌、维生素、有机酸和促生长因子。
[0043] 对比实施例一 同实施例一，不同的是猪血血红蛋白溶液制备是将检验合格的生猪采血后，加入柠 檬酸二钠，柠檬酸二钠与猪血的重量比为1-2 :1000,混合均匀后在15°C滚筒式离心分离 3-6min，获得第一上清层和第一沉淀层，分离获得第一沉淀物，往第一沉淀物中加入去离子 水。最后制得的血球蛋白多肽粉颜色为灰白色，蛋白含量为92%，灰分为4%。
[0044] 对比实施例二 同实施例二，不同的是猪血血红蛋白溶液制备后未进行前处理，而是直接进行酶解脱 色和后处理。
[0045] 最后制得的血球蛋白多肽粉颜色为灰白色，蛋白含量为90%，灰分为5%。
[0046] 对比实施例三 同实施例三，不同的是酶解脱色是加入按质量比1 :3混合的动物蛋白水解酶和枯草菌 蛋白酶，动物蛋白水解酶与猪血血红蛋白溶液的浓度比为15000U/g，酶解l-2h后终止酶解 反应获得酶解脱色液；后处理是将酶解脱色液调节PH值至6-7,水浴15min，在15°C第二次 碟式离心分离5min，获得第二上清层和第二沉淀层；取第二上清层在压力为0. 4MPa下超滤 膜过滤浓缩分离获得第二浓缩液。
[0047] 最后制得的血球蛋白多肤粉颜色为灰白色，蛋白含量为89%，灰分为6%。
[0048] 表1采用本发明实施例与对比例不同饲料喂养甲鱼的测定结果
【权利要求】
1. 一种添加猪血球蛋白粉的甲鱼饲料，其特征在于所述饲料配方按重量份计，包括下 列组分：鱼粉0. 5-0. 8份、玉米粉35-42份、猪血红蛋白粉6-9份、豆柏18-22份、麦麸5-8 份、蝇蛆粉4-8份、骨粉2-3份、贝壳粉3-5份、鱼油2-3份、螺旋藻粉3-5份、碳酸氯钙 0. 2-0. 3份、复合多维0. 02-0. 03份； 所述的复合多维各组分含量如下（/l〇〇g):维生素 A 800-900万IU、维生素 Bl 1-2. 5g、 维生素 B2 3. 5-4g、维生素 B6 0. 5-2g、维生素 B12 l-3g、维生素 D3 350-500万IU、维生素 E 0.1-0. 5 万 IU、维生素 K3 0.5-2g、生物素 0.05-0. lg、叶酸 0.1-0. 3g、烟酸 l-3g、赖氨酸 l_3g、泛氨酸0. 5-lg、蛋氨酸l-3g、色氨酸l-3g、精氨酸l-3g、缬氨酸l-3g、组氨酸l-3g、苏 氨酸l_3g、钾钠锌2-3g、葡萄糖10-50g、黄氏多糖3-5g ; 所述猪血球蛋白粉依次通过以下步骤制备而成： (1) 猪血血红蛋白溶液制备：将检验合格的生猪采血后，加入按照质量比1 :2-5 : 0. 01-0. 03混合的柠檬酸二钠、碳酸氢钠和从天然植物中提取的植物酚，其中柠檬酸二钠与 猪血的重量比为1-2 :1000,混合均匀后在15-25°C第一次碟式离心分离3-6min，获得第一 上清层和第一沉淀层，分离获得第一沉淀物，往第一沉淀物中加入去离子水，在1800-2500W 的超声波功率下第一次超声波处理30-60s获得猪血血红蛋白溶液； 所述从天然植物中提取的植物酚为茶多酚或苹果多酚； (2) 前处理：使用氮气鼓泡脱氧对所述猪血血红蛋白溶液进行第一次物理脱氧和初步 脱色，然后将脱氧后的所述猪血血红蛋白溶液调节pH值至6-7,然后在600-800W的超声波 功率下第二次超声波处理50-90S获得前处理液； (3) 分段酶解脱色：将所述前处理液升温至28-35°C，加入第一复合酶并保温1-1. 5h， 所述第一复合酶由动物蛋白水解酶、枯草菌蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰酶按质量比1 :1-2 : 0. 5-0. 8 :0. 2-0. 4混合而成，所述动物蛋白水解酶与所述猪血血红蛋白溶液的浓度比为 10000-20000U/g ;然后再升温至45-50°C，加入第二复合酶并保温1. 5-2h后终止酶解反应 获得酶解脱色液；所述第二复合酶由枯草菌蛋白酶和碱性蛋白酶按质量比1 :2_3混合而 成；所述第一复合酶与所述第二复合酶的质量比为3-5 :1 ; (4) 活性炭脱色：向所述酶解脱色液中加入占其重量为1-2%的活性炭在温度为 25-35 °C进行脱色处理5-10min获得活性炭脱色液； (5) 后处理：将所述活性炭脱色液调节pH值至4-5,水浴15-25min，在15-25°C第二次 碟式离心分离2-5min，获得第二上清层和第二沉淀层；取第二上清层在压力为0. 5-0. 8MPa 下超滤膜过滤浓缩分离获得第二浓缩液； 所述超滤膜为聚偏氟乙烯超滤膜，截留分子量为6000-8000Da ; (6) 喷雾干燥：将所述第二浓缩液进行喷雾干燥获得乳白色的猪血球蛋白多肽粉；所 述喷雾干燥的进风温度为190_240°C，出风温度为60-70°C，最大水分蒸发量为3-5kg/h。
2. 根据权利要求1所述的一种添加猪血球蛋白粉的甲鱼饲料，其特征在于：所述饲料 中包括含有芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌、维生素、有机酸、促生长因子的复合菌类添加剂；所 述复合菌类添加剂按重量份包括3-5份。
3. 根据权利要求2所述的一种添加猪血球蛋白粉的甲鱼饲料，其特征在于：取所述后 处理步骤中获得的第二沉淀层物质，在-10-15°C冷冻l_2h，自然解冻后添加1-2倍去离子 水洗涤，然后进行离心分离，取离心分离获得的沉淀物，添加〇. 1-0. 2倍去离子水洗涤后， 进行第二次物理脱氧，接着再离心分离，最后冷冻干燥得到血红素肽。
4. 根据权利要求3所述的一种添加猪血球蛋白粉的甲鱼饲料，其特征在于：所述猪 血血红蛋白溶液制备具体是将检验合格的生猪采血后，加入按照质量比1 :3 :0. 03混合的 柠檬酸二钠、碳酸氢钠和从天然植物中提取的植物酚，其中柠檬酸二钠与猪血的重量比为 1. 5 :1000,混合均匀后在20°C第一次碟式离心分离4min，获得第一上清层和第一沉淀层， 分离获得第一沉淀物，往第一沉淀物中加入1. 8-2倍体积的去离子水，在2000W的超声波功 率下第一次超声波处理50s获得猪血血红蛋白溶液。
5. 根据权利要求4所述的一种添加猪血球蛋白粉的甲鱼饲料，其特征在于：所述后 处理是将所述酶解脱色液调节pH值至4-5,在温度为10-18°C的水浴中处理15-25min，在 18°C第二次碟式离心分离3min，获得第二上清层和第二沉淀层；取第二上清层在压力为 0. 6MPa下超滤膜过滤浓缩分离获得第二浓缩液。
6. 根据权利要求1-5任一项所述的一种添加猪血球蛋白粉的甲鱼饲料，其特征在于： 所述第一次碟式分离采用的碟式分离机，包括机体，所述机体内设置有转鼓（1)，所述机体 顶部设置有进出口装置（2)，所述进出口装置（2)包括平行布置的原料进口管（22)、重相出 口管（25)和轻相出口管（26)，所述原料进口管（22)、重相出口管（25)和轻相出口管（26)与 所述转鼓（1)相通，所述机体侧面设置有与所述转鼓（1)相通的排渣部（3)和废水出口（4)， 所述废水出口（4)位于所述排渣部（3)的下方，所述机体的侧面设置有清洗水进口（5)，所 述排渣部（3 )内设置有PLC装置； 所述进出口装置（2)包括进出口座（21)以及固定在所述进出口座（21)上的原料进口 管（22)，所述原料进口管（22)的侧壁上设置有用于分离重相的上向心泵（23)和用于分离 轻相的下向心泵（24)，所述上向心泵（23)位于所述下向心泵（24)的上方，所述原料进口管 (22)的一侧连接有在所述原料进口管（22)径向延伸的重相出口管（25)的一端，所述原料 进口管（22)的另一侧连接有在所述原料进口管（22)径向延伸的轻相出口管（26)的一端， 所述重相出口管（25 )与所述轻相出口管（26 )的另一端分别设置有流量调节装置（27 )。
7. 根据权利要求6所述的一种添加猪血球蛋白粉的甲鱼饲料，其特征在于：所述转鼓 (1)包括主轴（11)、固定所述主轴（11)的基座（12)以及与所述基座（12)相邻的转鼓体 (13)，其还包括压紧在所述转鼓体（13)上的且分布于所述主轴（11)两侧的碟片压盖（14) 和转鼓盖（15)，所述主轴（11)侧壁固设有与所述主轴（11)呈30-60°夹角的进料分配管 (16)，所述转鼓体（13)内设置有不均匀布置的碟片（17)，所述碟片（17)与所述主轴（11)的 夹角为30-60°，所述主轴（11)顶部设置有用于分离不同密度物料的比重环，所述比重环 上方设置有用于分离重相的上向心泵室（19)，所述比重环下方设置有用于分离轻相的下向 心泵室（110)。
8. 根据权利要求7所述的一种添加猪血球蛋白粉的甲鱼饲料，其特征在于：所述碟片 压盖（14 )与所述主轴（11)的夹角为30-60 °，所述转鼓盖（15 )与所述主轴（11)的夹角为 30-60。。
9. 根据权利要求8所述的一种添加猪血球蛋白粉的甲鱼饲料，其特征在于：所述进 料分配管（16)下方且位于所述基座（12)与所述转鼓体（13)的相邻处设置有0型密封圈 (115)； 所述0型密封圈（115)的周向对称设置有用于卡紧密封槽的两道切口（ 116)，所述两道 切口（116)与所述0型密封圈（115)圆心的连线夹角为90°。
10.根据权利要求9所述的一种添加猪血球蛋白粉的甲鱼饲料，其特征在于：所述流量 调节装置（27)包括与所述重相出口管（25)或所述轻相出口管（26)的另一端相通的流量调 节室（271)，所述流量调节室（271)连接有压力装置（272)。
【文档编号】A23K1/16GK104256198SQ201410547825
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年10月16日 优先权日:2014年10月16日
【发明者】刘观洲, 邓自伟, 沙欢, 李宁丰 申请人:浙江索纳克生物科技有限公司