一种快速获得洋桔梗品种间杂交种的方法
【专利摘要】本发明公开了一种快速获得洋桔梗品种间杂交种的方法，通过将不同的洋桔梗品种将父、母本之间进行杂交后取其胚作为外植体；置于接种培养基中进行培养，每瓶接种胚胎10-15个；35d后转入继代培养基中进行继代培养，得到幼苗后转到分化培养基中扩繁，扩繁得到幼苗后，将幼苗转移到生根培养基中进行生根培养，筛选获得单体植株；经过移栽成活的洋桔梗苗正常管理，得到杂交一代洋桔梗新品种。本发明采用胚培养技术结合组织培养方法，只需要0.5～1年的时间就可以获得优良的杂交种，大大缩短了育种时间。
【专利说明】一种快速获得洋桔梗品种间杂交种的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于组织培养【技术领域】，涉及杂交育种方法，具体涉及一种快速获得洋桔 梗品种间杂交种的方法。
【背景技术】
[0002] 洋桔梗，株态轻盈滞洒，花色典雅明快，花形别致可爱，一致都是国际上十分流行 的盆花和切花种类之一。
[0003] 洋桔梗原产美国内布拉斯加州和得克萨斯州，性喜温暖、湿润和阳光充足。较 耐寒，不耐水湿。引种到欧洲和日本通过杂交改良，现已成为一个妖媚动人、异常新奇 的花丼。其中荷兰的克?萨欣?扎登（K. SahinZaden)公司和基夫特?布洛迈扎登 (KieftBloemzaden)公司为洋桔梗的育种和新品种的推广做了大量工作。在欧洲各国的花 店和家庭的窗台上到处可见。在日本，世界著名的花丼种子公司坂田公司在洋桔梗育种方 面取得了卓越成就。
[0004] 目前，品种间杂交育种依然是花丼新品种的选育的主要方法之一。国外洋桔梗的 杂交选育已经开展了 100多年，已选育大批新品种，而国内现在还处于引种阶段，许多通过 杂交手段获得杂交种技术还未能突破，如，洋桔梗部分品种间杂交存在受精后障碍，致使杂 交得不到种子，严重影响了桔梗花色、叶色等优异基因的再组合，因此解决这一难题对桔梗 新品种选育具有重要的意义。
[0005] 而利用胚培养技术来克服洋桔梗品种间受精后障碍，可以直接获得杂交新品种。 对加速洋桔梗特异遗资源应用于生产提供技术支持。
[0006] 洋桔梗扦插繁殖系数比较低，另外因种子繁殖多采用的是Fl代种子，后代分离比 较大，使品种混杂相当严重，因此提倡采用组培繁殖法，使后代保持良好的性状。因此利用 组织培养快速繁殖，批量生产优质种苗具有重要的实用价值。
[0007] 许多科研院所和生产单位采用洋桔梗的茎段和叶片作为外植体用组培繁殖法进 行种苗的快速繁殖。"洋桔梗的组培快繁"（周俊英，农业科技通讯，2004, 5) -文中公开了 将洋桔梗种子作为外植体对其进行快繁的技术；"植物激素在洋桔梗组培快繁中的应用效 果"（詹革胜，安徽农业通报，AnhuiAgri. Sci. Bull. 2004, 10 (6) : 52-53, 59) -文中选取的 是洋桔梗幼嫩叶片为外植体，采用不同的激素对其进行处理来研宄激素在洋桔梗组培快繁 中的作用，可见，洋桔梗的茎段、叶片和种子都可以作为组织培养过程中的外植体，目前还 没有利用桔梗胚作为外植体对其进行组织培养来获得品种间杂交种的研宄。
【发明内容】
[0008] 针对现状，本发明将提供一种将经过受精的胚作为外植体通过组织培养技术来快 速获得桔梗品种间杂交种的方法，不仅提供了一种全新的获得洋桔梗新品种的方法，还能 解决其继代培养变异的问题，成活率较高，不受季节的影响，大幅度降低增殖成本，满足规 模化生产需要。
[0009] 为了解决上述问题，本发明提供了一个技术方案如下：
[0010] 一种快速获得洋桔梗品种间杂交种的方法，包括以下步骤：
[0011] (1)将父、母本在开花前一天进行套袋隔离，第二天上午，取新鲜的父本花粉对母 本进行授粉，授粉后进行套袋隔离；
[0012] (2)摘取授粉后瘦果授粉，在超净工作台上取出子房，后将子房用流水冲洗5? lOmin，再用70?75%的乙醇消毒30?50s后，置于0. 1%的升采溶液中4?5min，然后用 无菌水冲洗5-6次，冲洗后用无菌的刀片划开种皮，取其胚作为外植体；
[0013] (3)将外植体置于接种培养基中进行培养，每瓶接种胚胎10-15个；35d后转入继 代培养基中进行继代培养，得到幼苗后转到分化培养基中扩繁，扩繁得到幼苗后，将幼苗转 移到生根培养基中进行生根培养，筛选获得单体植株；
[0014] (4)炼苗移栽：先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗4d，待洋桔梗苗健壮且有 5-7片真叶、6-8cm高时，然后解开封口膜，炼苗6d，移栽到经消毒的基质中，温度控制在 24-26°C，前7d湿度控制在70%左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下；
[0015] (5)大田管理：将移栽成活的洋桔梗苗正常管理，得到杂交一代洋桔梗新品种。
[0016] 上述步骤二中，取子房的时间为授粉后8?12d。
[0017] 所述步骤三中接种培养基为：MS+2,4-D 2mg/L+6-BA I. 5mg/L ;
[0018] 上述继代培养的培养基为MS+6-BA I. Omg/L+NAA 0· lmg/L ;
[0019] 上述的分化培养基组成为MS+6-BA 0· 2mg/L ;
[0020] 上述生根培养基组成为1/2MS+NAA0. 1?0. 2mg/L+IBA0. 1?0. 2mg/L+蔗糖或白 砂糖20?30g/L+琼脂7?8g/L。
[0021] 上述接种培养的培养条件为温度24-26°C，pH为6. 3,光周期为14h光照/IOh黑 暗，光强为1200Lx ;
[0022] 上述继代培养和分化培养的培养条件为温度为23 ± 1°C，pH为6. 3,12h/d的光周 期，光照强度1600Lx ;
[0023] 上述生根培养的培养条件为培养温度为23±1°C，pH为6,14-18h/d的光周期，光 照强度1400Lx。
[0024] 本发明有益效果：
[0025] 利用胚培养技术来克服洋桔梗品种间受精后障碍，可以直接获得杂交新品种，对 加速洋桔梗特异遗资源应用于生产提供了技术支持。
[0026] 传统种植需要1年左右的时间才能有所收成，而利用组织培养技术能使洋桔梗在 半年左右的时间就能收获，大大缩短了育种周期，利用连续的继代增殖，具有快速有效的效 果。传统育种方法要想获得优良的杂交品种，需要经过连续4?5代杂交，大约需要3?5 年的时间才能获得性状稳定的杂交种，而本发明通过胚培养技术直接获得杂交新品种，大 大缩短了育种时间。
[0027] 本发明在获得杂交种的同时，还可以获得脱毒的植株，具有较好的抗逆性、不易受 病毒感染，减少病虫害防治所花的费用，种苗的成活率也很高，因此起到一举两得的效果。
【具体实施方式】
[0028] 实施例1 一种快速获得洋桔梗品种间杂交种的方法，包括以下步骤：
[0029] (1)分别选择栽培品种"路西塔"作为父本A、牡丹型大花紫色品种"神话"作为母 本B，选择生长旺盛，花荀大的植株，在开花前
[0030] 一天进行套袋隔离，第二天上午，取新鲜的父本花粉对母本进行授粉，授粉后进行 套袋隔离；
[0031] (2授粉后12d摘取授粉后瘦果，在超净工作台上取出子房，后将子房用流水冲洗 l〇min，再用70%的乙醇消毒50s后，置于0. 1 %的升采溶液中4?5min，然后用无菌水冲洗 5-6次，冲洗后用无菌的刀片划开种皮，取其胚作为外植体；
[0032] (3)将外植体置于接种培养基中进行培养，每瓶接种胚胎10个；接种培养基为： MS+2,4-D 2mg/L+，6-BA I. 5mg/L ;培养条件为温度 24-26°C，pH 为 6. 3,光周期为 14h 光照 /IOh黑暗，光强为1200Lx ;
[0033] (4)在接种培养基中培养35d后，转入继代培养基中进行继代培养。培养基为 MS+6-BA l.Omg/L+NAA 0· lmg/L;培养条件为温度为 23±l°C，pH 为 6.3，12h/d 的光周期，光 照强度1600Lx ;
[0034] (5)分化培养：接种后得到幼苗后转到分化培养基中扩繁。分化培养基组成 为MS+6-BA 0· 2mg/L ;培养条件为温度为23± 1°C，pH为6. 3,12h/d的光周期，光照强度 1600Lx ；
[0035] (6)生根培养：扩繁得到幼苗后，将幼苗转移到生根培养基中进行生根培养，筛选 获得单体植株；生根培养基组成为1/2MS+NAA0. lmg/L+IBAO. 2mg/L+白砂糖30g/L+琼脂 7g/L。培养温度为23±1°C，pH为6,14-18h/d的光周期，光照强度1400Lx。
[0036] (7)炼苗移栽：先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗4d，待洋桔梗苗健壮且有 5-7片真叶、6-8cm高时，然后解开封口膜，炼苗6d，移栽到经消毒的基质中，温度控制在 24-26°C，前7d湿度控制在70%左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下。
[0037] (8)大田管理：将移栽成活的洋桔梗苗定植15d后，缓苗期结束，此时撤掉遮阳网， 结合浇水，施薄肥1次，因洋桔梗比较喜欢温暖湿润的环境，因此每天用细雾喷壶叶面喷水 2次。
[0038] 肥水管理：每7d施铵态氮肥1次，每667m2施肥量为4?5kg。5月初，光照强度逐 渐增强，在温室棚膜外覆盖50%的遮阳网以减少光照对苗的灼伤，温室内要加强通风管理， 以利于苗茎的伸长生长。待苗长至20cm时，用尼龙绳编成的菱形网进行拉网处理，防止花 苗倒伏，以后每隔20cm拉1层网，共拉3层。
[0039] 花期管理：从4月15日开始，各品种陆续现蕾，洋桔梗进入营养生长和生殖生长并 进期。此时期的洋桔梗，除施氮肥外，应增加磷钾肥的施用量，每周叶面喷施1%。的KH 2PO4I 次，逐渐减少叶面喷水次数，水分管理间干间湿，畦内勿积水。当有花蕾开放时，停止叶面喷 水，防止花心积水腐烂。
[0040] 病虫害的防治：洋桔梗抗病虫能力较强，在整个生长期，部分品种有灰斑病发生， 可喷施50 %的多菌灵可湿性粉剂800倍液和代森锰锌1000倍液，每3d喷1次，2种药剂交 替使用效果更佳。2周后，灰斑病得到控制，20d后，病害完全消失。
[0041] 另外，危害洋桔梗的主要害虫是潜叶蝇和小地老虎，潜叶蝇钻食洋桔梗叶片，小地 老虎咬食洋桔梗的根部，防治潜叶蝇可叶面喷施500?800倍的蝇螨净乳液，毒杀小地老虎 可用800?1000倍的锌硫磷乳液灌根，每周1次，杀虫效果比较显著。
[0042] (9)将得到的洋桔梗新品种与亲本栽培性状进行比较见表1。
[0043] 表 1
[0044]
【权利要求】
1. 一种快速获得洋桔梗品种间杂交种的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 将父、母本在开花前一天进行套袋隔离，第二天上午，取新鲜的父本花粉对母本进 行授粉，授粉后进行套袋隔离； (2) 摘取授粉后瘦果授粉，在超净工作台上取出子房，后将子房用流水冲洗5?lOmin， 再用70?75%的乙醇消毒30?50s后，置于0. 1%的升采溶液中4?5min，然后用无菌水 冲洗5-6次，冲洗后用无菌的刀片划开种皮，取其胚作为外植体； (3) 将外植体置于接种培养基中进行培养，每瓶接种胚胎10-15个；35d后转入继代培 养基中进行继代培养，得到幼苗后转到分化培养基中扩繁，扩繁得到幼苗后，将幼苗转移到 生根培养基中进行生根培养，筛选获得单体植株； (4) 炼苗移栽：先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗4d，待洋桔梗苗健壮且有5-7片 真叶、6-8cm高时，然后解开封口膜，炼苗6d，移栽到经消毒的基质中，温度控制在24-26°C， 前7d湿度控制在70 %左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下； (5) 大田管理：将移栽成活的洋桔梗苗正常管理，得到杂交一代洋桔梗新品种。
2. 根据权利要求1所述一种快速获得洋桔梗品种间杂交种的方法，其特征在于，所述 步骤二中，取子房的时间为授粉后8?12d。
3. 根据权利要求1或2所述的快速获得洋桔梗品种间杂交种的方法，其特征在于， 所述步骤三中接种培养基为：MS+2,4-D 2mg/L+6-BA 1.5mg/L;所述继代培养的培养基为 MS+6-BA 1. Omg/L+NAAO. lmg/L ;所述的分化培养基组成为MS+6-BA 0? 2mg/L ;所述生根培 养基组成为1/2MS+NAA0. 1?0? 2mg/L+IBA0. 1?0? 2mg/L+蔗糖或白砂糖20?30g/L+琼 脂7?8g/L。
4. 根据权利要求1或2所述的快速获得洋桔梗品种间杂交种的方法，其特征在于，所 述接种培养的培养条件为温度24-26°C，pH为6. 3,光周期为14h光照/10h黑暗，光强为 1200Lx ;继代培养和分化培养的培养条件为温度为23±1°C，pH为6. 3,12h/d的光周期，光 照强度1600Lx ;生根培养的培养条件为培养温度为23±1°C，pH为6,14-18h/d的光周期， 光照强度1400Lx。
【文档编号】A01H4/00GK104488711SQ201410745960
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月8日 优先权日:2014年12月8日
【发明者】邱林 申请人:邱林