一种紫香兰组培快繁方法
【专利摘要】本发明公开了一种紫香兰组培快繁方法，其特征在于，主要步骤包括：人工授粉、无菌播种、原球茎继代增殖、原球茎分化、组培苗生根和炼苗；本发明通过逐步诱导种子萌发和培养，能够培育出大量紫香兰幼苗上市；本发明采用同株异花授粉得到的种子，提高了种子在特定条件下的发芽率；并且种子萌发培养基配方简单并且原料易得，通过实验证明可以提高紫香兰种子的萌发率；本发明的组培快繁方法具有极高的推广价值。
【专利说明】-种紫香兰组培快繁方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物栽培及育苗【技术领域】，尤其涉及一种紫香兰组培快繁方法。
【背景技术】
[0002] 紫香兰，拉丁学名Zygopetalums，原产美国加州一带。又名轭瓣兰或接瓣兰，因花 瓣以紫色为基调色，偶有香味，故得名。紫香兰花期长，花姿美，又伴有芳香，其唇瓣大而成 扇形，紫色斑纹点缀其上，整朵花显得高贵典雅。由于紫香兰株型较小，适合做成小盆栽排 放于办公桌上，更是受到都市白领的喜爱，市场销量也在逐步提升。
[0003] 但是由于紫香兰为国外引进种，国内生产种植紫香兰盆栽的公司还很少，量也不 大，紫香兰种苗主要还是依靠进口，国内鲜有生产紫香兰种苗的公司。主要原因是紫香兰 种子发育不完全，自然条件下难以萌发，种苗稀缺，目前国内对紫香兰种苗繁殖方法掌握 较少，中国科学院华南植物园在2009年申请了"接瓣兰种苗的试管繁殖方法"，专利号： CN200910039928.X，但该方法操作复杂，选用种子较为随意，对后续的播种成功率产生影 响；尤其是对培养基的配制配方较复杂，而且需要用试管苗移栽，移栽仍需专用的基质，生 产成本高，不利于大规模生产。
[0004] 本课题组经过两年研究，总结出一套成熟的紫香兰组培快繁方法，能够操作相对 简单并且成萌发以及生根、成苗功率较高，所繁殖的组培苗健壮耐性强，可满足市场的需 要。
【发明内容】
[0005] 本发明旨在提供一种操作简单，产生经济价值高的紫香兰组培快繁方法。
[0006] 本发明目的通过以下技术方案来予以实现： 一种紫香兰组培快繁方法，其特征在于，步骤包括a、同株异花授粉：取同一植株上 开花2-4天的紫香兰花粉小心剥下，接到另一朵花的花柱上，并将该花上本身的花粉剥 掉；b、无菌播种：授粉成功后80-120天，取成熟果荚中的种子拨到配好的诱导种子萌发 培养基上，放置于培养室内诱导种子萌发；c、原球茎继代增殖：无菌播种1.5-3个月，种 子萌发出绿色的原球茎；将原球茎转到增殖培养基上继代增殖，原球茎增殖培养基为： 1/2MS+NAA0. 5-1. 0 mg/L+ 蔗糖 2%+ 卡拉胶 0? 7%，pH 为 5. 6-5. 8 ;继代周期为 40-50d ;d、原 球茎分化：原球茎经过几次继代增殖后，数量已达到生产所需要的量；此时将原球茎转到 分化培养基上诱导原球茎分化成苗；e、组培苗生根：原球茎分化成苗后，生长到3-5cm高， 叶片3-4片时，从基部切下转到生根培养基上生根；生根培养20-40天，组培苗长出3-4条 根，根长3cm左右时，从组培室转到炼苗室炼苗5-9天，然后移植到土壤里即得到紫香兰组 培苗。
[0007] 所述无菌播种的方法为：先用饱和洗衣粉溶液擦洗表面，流水冲洗一遍后转到超 净工作台上；将果荚尾部花蒂残留切去，然后放在70%酒精中浸泡3-8S，立即用无菌水洗一 遍；将果荚浸泡于〇. 01%升汞溶液中消毒5-10min，最后用无菌水洗4-5次；用无菌滤纸吸 干果荚表面水分，用解剖刀将果荚从中间纵切，将里面的种子用镊子小心拨到配好的诱导 种子萌发培养基上。
[0008] 所述种子萌发培养基为：1/2MS+NAA0. 2-0. 5mg/L+椰汁5%-10%+蔗糖2%+卡拉胶 0. 7%，pH5. 6-5. 8。培养室温度 25-26°C，光照时间 12h/d，光照强度 50-90 ii mol
[0009] 所述原球茎增殖培养基为：1/2MS+NAA0. 5-1. 0 mg/L+蔗糖2%+卡拉胶0. 7%， pH5. 6-5. 8 ； 所述分化培养基为：l/2MS+6-BAl. 0-2. 0 mg/L+蔗糖2%+卡拉胶0. 7%，pH5. 6-5. 8。培 养温度 25-261：，光照时间1411/(1，光照强度 80-12011111〇1111-28-1。
[0010]所述生根培养基为：1/3MS+NAA0. 2-0. 5mg/L+IBA0. 5-1. 0mg/L+ 香蕉泥 6%+ 活性炭 2g/L+ 鹿糖 15mg/L+ 卡拉胶 0? 7%，pH5. 6-5. 8。
[0011] 所述生根培养的温度为20-29°C，光照时间8-14h/d，光照强度50-90 y mol n^s-1。
[0012] 本发明的有益效果：1、本发明采用同株异花授粉得到的种子，提高了种子在特定 条件下的发芽率；2、本发明的种子萌发培养基配方简单并且原料易得，通过实验证明可以 提高紫香兰种子的萌发率；3、原球茎增殖培养基和种子萌发培养基配方相同，无需更换配 方，仅需更换培养皿即可，降低了材料和人工操作成本；4、分化培养基配方简单易得，降低 了材料成本；5、生根培养基中加入了香蕉泥，不仅因为香蕉泥中含有乙烯利的催熟化合物， 香蕉泥的其他成分也对生根产生了非常重要的作用。
【具体实施方式】
[0013] 下面结合具体实施例来进一步说明本发明。
[0014] 实施例1 一种紫香兰组培快繁方法，其特征在于，步骤包括a、同株异花授粉：取同一植株 上开花4天的紫香兰花粉小心剥下，接到另一朵花的花柱上，并将该花上本身的花粉剥 掉；b、无菌播种：授粉成功后100天，取成熟果荚；先用饱和洗衣粉溶液擦洗表面，流水冲 洗一遍后转到超净工作台上；将果荚尾部花蒂残留切去，然后放在70%酒精中浸泡5S， 立即用无菌水洗一遍；将果荚浸泡于〇. 01%升汞溶液中消毒8min，最后用无菌水洗4-5 次；用无菌滤纸吸干果荚表面水分，用解剖刀将果荚从中间纵切，将里面的种子用镊子 小心拨到配好的种子萌发培养基上，放置于培养室内诱导种子萌发，种子萌发培养基为： 1/2MS+NAA0. 2-0. 5mg/L+ 椰汁 5%-10%+ 蔗糖 2%+ 卡拉胶 0. 7%，pH5. 6-5. 8。培养室温度 25-261：，光照时间1211/(1，光照强度50-9011111〇1111_ 28_1。（3、原球茎继代增殖：无菌播种2个 月，种子基本均萌发出绿色的原球茎；此时将原球茎转到增殖培养基上继代增殖，继代周期 为40-50d ;d、原球茎分化：原球茎经过几次继代增殖后，数量已达到生产所需要的量；此 时将原球茎转到分化培养基上诱导原球茎分化成苗；分化培养基为：l/2MS+6-BAl. 0-2. 0 mg/L+蔗糖2%+卡拉胶0? 7%，pH5. 6-5. 8 ;培养温度25-26°C，光照时间14h/d，光照强度 80-120 ii mol nrS' e、组培苗生根：原球茎分化成苗后，生长到3-5cm高，叶片3-4片 时，从基部切下转到生根培养基上生根。培养温度25-26°C，光照时间12h/d，光照强度 50-90 ii mol nT2s_1;经过1个月，组培苗长出3-4条根，根长3cm左右时，从组培室转到 炼苗室炼苗1周左右即可种植到合适的基质上；生根培养基为：1/3MS+NAA0. 2-0. 5mg/ L+IBAO. 5-1. 0mg/L+ 香蕉泥 6%+ 活性炭 2g/L+ 鹿糖 15mg/L+ 卡拉胶 0? 7%，pH5. 6-5. 8。生根 培养的温度为20-29°C，光照时间8-14h/d，光照强度50-90 y mol n^s-1。
[0015] 实施例2 一种紫香兰组培快繁方法，其特征在于，步骤包括a、同株异花授粉：取同一植株上开 花4天的紫香兰花粉小心剥下，接到另一朵花的花柱上，并将该花上本身的花粉剥掉；b、无 菌播种：授粉成功后90天，取成熟果荚；先用饱和洗衣粉溶液擦洗表面，流水冲洗一遍后转 到超净工作台上；将果荚尾部花蒂残留切去，然后放在70%酒精中浸泡7S，立即用无菌水洗 一遍；将果荚浸泡于0. 01%升汞溶液中消毒8min，最后用无菌水洗4-5次；用无菌滤纸吸干 果荚表面水分，用解剖刀将果荚从中间纵切，将里面的种子用镊子小心拨到配好的种子萌 发培养基上，放置于培养室内诱导种子萌发，种子萌发培养基为：1/2MS+NAA0. 2-0. 5mg/L+ 椰汁5%-10%+蔗糖2%+卡拉胶0. 7%，pH5. 6-5. 8。培养室温度25-26°C，光照时间12h/d，光 照强度50-90 y mol nT2s' c、原球茎继代增殖：无菌播种1.5个月，种子基本均萌发出绿色 的原球茎；此时将原球茎转到增殖培养基上继代增殖，继代周期为40-50d ;d、原球茎分化： 原球茎经过几次继代增殖后，数量已达到生产所需要的量；此时将原球茎转到分化培养基 上诱导原球茎分化成苗；分化培养基为：l/2MS+6-BAl. 0-2. 0 mg/L+蔗糖2%+卡拉胶0. 7%， 口册.6-5.8;培养温度25-261：，光照时间1411/(1，光照强度80-12011111〇1111- 28-1。6、组培苗生 根：原球茎分化成苗后，生长到3-5cm高，叶片3-4片时，从基部切下转到生根培养基上生 根。培养温度25-26°C，光照时间12h/d，光照强度50-90 ii mol n^s-1;经过1个月，组培苗 长出3-4条根，根长3cm左右时，从组培室转到炼苗室炼苗1周左右即可种植到合适的基质 上；生根培养基为：1/3MS+NAA0. 2-0. 5mg/L+IBA0. 5-1. 0mg/L+ 香蕉泥 6%+ 活性炭 2g/L+ 蔗 糖15mg/L+卡拉胶0. 7%，pH5. 6-5. 8。生根培养的温度为20-29°C，光照时间8-14h/d，光照 强度 50-90 u mol m 2s、
[0016] 对比例1 一种紫香兰组培快繁方法，其特征在于，步骤包括a、同株异花授粉：取同一植株上开 花4天的紫香兰花粉小心剥下，接到另一朵花的花柱上，并将该花上本身的花粉剥掉；b、无 菌播种：授粉成功后90天，取成熟果荚；先用饱和洗衣粉溶液擦洗表面，流水冲洗一遍后转 到超净工作台上；将果荚尾部花蒂残留切去，然后放在70%酒精中浸泡7S，立即用无菌水洗 一遍；将果荚浸泡于0. 01%升汞溶液中消毒8min，最后用无菌水洗4-5次；用无菌滤纸吸干 果荚表面水分，用解剖刀将果荚从中间纵切，将里面的种子用镊子小心拨到配好的种子萌 发培养基上，放置于培养室内诱导种子萌发，种子萌发培养基为：1/2MS+NAA0. 2-0. 5mg/L+ 椰汁5%-10%+蔗糖2%+卡拉胶0. 7%，pH5. 6-5. 8。培养室温度25-26°C，光照时间12h/d，光 照强度50-90 y mol nT2s' c、原球茎继代增殖：无菌播种2个月，种子基本均萌发出绿色 的原球茎；此时将原球茎转到增殖培养基上继代增殖，继代周期为40-50d ;d、原球茎分化： 原球茎经过几次继代增殖后，数量已达到生产所需要的量；此时将原球茎转到分化培养基 上诱导原球茎分化成苗；分化培养基为：l/2MS+6-BAl. 0-2. 0 mg/L+蔗糖2%+卡拉胶0. 7%， pH5. 6-5. 8 ;培养温度25-26°C，光照时间14h/d，光照强度80-120 ii mol n^s-1。e、组培苗 生根：原球茎分化成苗后，生长到3-5cm高，叶片3-4片时，从基部切下转到生根培养基上 生根。培养温度25-26°C，光照时间12h/d，光照强度50-90 y mol n^s-1;经过1个月，组培 苗长出3-4条根，根长3cm左右时，从组培室转到炼苗室炼苗1周左右即可种植到合适的基 质上；生根培养基为：1/3MS+NAA0. 2-0. 5mg/L+IBA0. 5-1. 0mg/L+ 乙烯利 0? 001g/L+ 活性炭 2g/L+蔗糖15mg/L+卡拉胶0? 7%，pH5. 6-5. 8。生根培养的温度为20-29°C，光照时间8-14h/ d，光照强度 50-90 y mol nr2s'
[0017] 对比例2 一种紫香兰组培快繁方法，其特征在于，步骤包括a、同株同花授粉：取同一植株上开 花4天的紫香兰花粉小心剥下，接到同一朵花的花柱上；b、无菌播种：授粉成功后90天，取 成熟果荚；先用饱和洗衣粉溶液擦洗表面，流水冲洗一遍后转到超净工作台上；将果荚尾 部花蒂残留切去，然后放在70%酒精中浸泡7S，立即用无菌水洗一遍；将果荚浸泡于0. 01% 升汞溶液中消毒8min，最后用无菌水洗4-5次；用无菌滤纸吸干果荚表面水分，用解剖刀 将果荚从中间纵切，将里面的种子用镊子小心拨到配好的种子萌发培养基上，放置于培养 室内诱导种子萌发，种子萌发培养基为：1/2MS+NAA0. 2-0. 5mg/L+椰汁5%-10%+蔗糖2%+ 卡拉胶0.7%，pH5. 6-5. 8。培养室温度25-26 °C，光照时间12h/d，光照强度50-90ii mol nT2S' c、原球茎继代增殖：无菌播种2个月，种子基本均萌发出绿色的原球茎；此时将原 球茎转到增殖培养基上继代增殖，继代周期为40-50d ;d、原球茎分化：原球茎经过几次继 代增殖后，数量已达到生产所需要的量；此时将原球茎转到分化培养基上诱导原球茎分化 成苗；分化培养基为：l/2MS+6-BAl. 0-2. 0 mg/L+蔗糖2%+卡拉胶0? 7%，pH5. 6-5. 8 ;培养 温度25-26°C，光照时间14h/d，光照强度80-120iimol n^s-1。e、组培苗生根：原球茎分 化成苗后，生长到3-5cm高，叶片3-4片时，从基部切下转到生根培养基上生根。培养温度 25-26°C，光照时间12h/d，光照强度50-90 y mol m-Y1;经过1个月，组培苗长出3-4条根， 根长3cm左右时，从组培室转到炼苗室炼苗1周左右即可种植到合适的基质上；生根培养基 为：1/3MS+NAA0. 2-0. 5mg/L+IBA0. 5-1. 0mg/L+ 香蕉泥 6%+ 活性炭 2g/L+ 蔗糖 15mg/L+ 卡拉 胶0. 7%，pH5. 6-5. 8。生根培养的温度为20-29°C，光照时间8-14h/d，光照强度50-90 ii mol m 2s、
[0018] 将以上实施例培养的秧苗炼苗1周后移至花盆栽培，通过以下表格对实施例中的 结果进行统计和对比如下：
【权利要求】
1. 一种紫香兰组培快繁方法，其特征在于，步骤包括a、同株异花授粉：取同一植株上 开花2-4天的紫香兰花粉剥下，接到另一朵花的花柱上，并将该花上本身的花粉剥掉；b、无 菌播种：授粉成功后80-120天，取成熟果荚中的种子拨到配好的诱导种子萌发培养基上， 放置于培养室内诱导种子萌发；c、原球茎继代增殖：无菌播种1. 5-3个月，种子萌发出绿色 的原球茎；将原球茎转到增殖培养基上继代增殖，继代周期为40-50d ;d、原球茎分化：原球 茎经过几次继代增殖后，数量已达到生产所需要的量；此时将原球茎转到分化培养基上诱 导原球茎分化成苗；e、组培苗生根：原球茎分化成苗后，生长到3-5cm高，叶片3-4片时，从 基部切下转到生根培养基上生根；生根培养20-40天，组培苗长出3-4条根，根长3cm左右 时，从组培室转到炼苗室炼苗5-9天，然后移植到土壤里即得到紫香兰组培苗； 所述无菌播种的方法为：先用饱和洗衣粉溶液擦洗表面，流水冲洗一遍后转到超净工 作台上；将果荚尾部花蒂残留切去，然后放在70%酒精中浸泡3-8S，用无菌水洗；将果荚浸 泡于0. 01%升汞溶液中消毒5-10min，最后用无菌水洗4-5次；用无菌滤纸吸干果荚表面水 分，用解剖刀将果荚从中间纵切，将里面的种子用镊子拨到配好的诱导种子萌发培养基上。
2. 根据权利要求1所述的紫香兰组培快繁方法，所述诱导种子萌发培养基为： 1/2MS+NAA0. 2-0. 5mg/L+ 椰汁 5%-10%+ 蔗糖 2%+ 卡拉胶 0? 7%，pH 为 5. 6-5. 8 ;培养室温度 25-26°C，光照时间 12h/d，光照强度 50-90 ii mol
3. 根据权利要求1所述的紫香兰组培快繁方法，所述原球茎增殖培养基为： 1/2MS+NAA0. 5-1. 0 mg/L+ 蔗糖 2%+ 卡拉胶 0? 7%，pH 为 5. 6-5. 8。
4. 根据权利要求1所述的紫香兰组培快繁方法，所述分化培养基为： 1/2MS+6-BA1. 0-2. 0 mg/L+ 蔗糖 2%+ 卡拉胶 0. 7%，pH5. 6-5. 8 ;培养温度 25-26°C，光照时间 14h/d，光照强度 80-120 nmol m S1。
5. 根据权利要求1所述的紫香兰组培快繁方法，所述生根培养基为： 1/3MS+NAA0. 2-0. 5mg/L+IBA0. 5-1. 0mg/L+ 香蕉泥 6%+ 活性炭 2g/L+ 鹿糖 15mg/L+ 卡拉胶 0? 7%，pH 为 5. 6-5. 8。
6. 根据权利要求1所述的紫香兰组培快繁方法，所述生根培养的温度为20-29°C，光照 时间 8_14h/d，光照强度 50-90 y mol m 2s、
【文档编号】A01H4/00GK104429964SQ201410757483
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月12日 优先权日:2014年12月12日
【发明者】范俊强, 张善信, 郑贵朝 申请人:东莞市生物技术研究所