本发明涉及生物农药技术领域，尤其涉及一种展膜油悬浮剂及其在防治农作物病虫害方面的应用。
背景技术：
展膜油剂是施于水面形成薄膜的油剂，具有防治效果显著的特点，省工节本防治费用低，与其他农药相比，用量及成本都较低。而且在使用过程中，操作简便，不用植保器械，直接把药滴入水中，比常规施药提高工效20倍，极大减轻施药劳动强度，有利于劳力转化，改变了现有传统繁重施药方法。另外该剂型不受气候的影响，在防治时期无论下雨或阴天均可直接滴药。该剂型属于低毒剂型，由于特殊的施药方式，使其在使用过程中不产生药液飘移，不污染环境，不产生药害，对天敌杀伤力小，对人畜安全。
而且展膜油剂的剂型产品不需要兑水稀释，直接撒滴在作物水面后会迅速铺展开，形成一层均匀的药膜，同时在助剂的作用下，药膜会沿着作物茎秆向上铺展，集中于水生植物茎秆基部，从而实现常规施药方式难以实现的水生作物病虫草害的有效防治。
然而，现有展膜油剂的种类在水面铺展性能欠佳，形成的药膜性能对产品的防治效果有较大的起伏。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明的目的在于针对现有技术的不足，而提供了一种含蝗虫绿僵菌的展膜油悬浮剂。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种展膜油悬浮剂，包括以下质量百分含量的组分：有效成分0.1～60％，所述的有效成分包括蝗虫绿僵菌；表面活性剂3～25％；成膜剂2～30％；余量的油性分散介质。
优选的，所述绿僵菌中芽孢有效含量为50～500亿个/克。
优选的，所述的有效成分还包括有机杀虫剂，所述的有机杀虫剂为甲氨基阿维菌素、呋虫胺、噻虫嗪、阿维菌素、噻虫啉、多杀菌素、氟啶虫酰胺、灭幼脲、氯虫苯甲酰胺、除虫脲、高效氯氰菊酯、溴氰菊酯和茚虫威中的一种或几种。
优选的，所述蝗虫绿僵菌与有机杀虫剂的重量比为(2～50)：(8～55)。
优选的，所述成膜剂包括十二碳醇酯、十八醇、丙二醇苯醚和丁醚醋酸酯中的一种或几种。
优选的，所述成膜剂在展膜油悬浮剂中的质量百分含量为8～25％。
优选的，所述表面活性剂包括脂肪醇聚氧乙烯醚和壬基酚氧乙烯醚中的一种或两种。
优选的，包括8～20％的表面活性剂。
优选的，所述油性分散介质为溶剂油、二甲苯、白油、甲基萘和乙醇中的一种或几种。
进一步的，本发明提供了所述的展膜油悬浮剂在防治农作物虫害方面的应用。
本发明提供的一种含蝗虫绿僵菌的展膜油悬浮剂，包括以下重量百分含量的组分：有效成分0.1～60％，所述有效成分包括蝗虫绿僵菌；表面活性剂3～25％；成膜剂2～30％；余量为油性分散介质。在本发明中，提供的蝗虫绿僵菌的展膜油悬浮剂对昆虫害的防治效果显著，防治效果可达84～85％。本发明提供的蝗虫绿僵菌的展膜油悬浮剂相比传统展膜油悬浮剂效果良好，展膜油悬浮剂在液面的展布性能佳。
生物保藏证明
蝗虫绿僵菌(Metarhizium acridum)，于2013年08月13日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，生物保藏编号为CGMCC NO.7992。
具体实施方式
本发明提供了一种展膜油悬浮剂，包括以下质量百分含量的组分：有效成分0.1～60％，所述的有效成分包括蝗虫绿僵菌；表面活性剂3～25％；成膜剂2～30％；余量的油性分散介质。
在本发明中所述的有效成分的质量含量优选为0.1～60％，更优选为10～50％，最优选为15～40％。本发明中所述的有效成分包括蝗虫绿僵菌，所述的蝗虫绿僵菌中有效孢子含量优选的为50～500亿个/克，更优选的为100～300亿个/克，最优选的为200亿个/克。
在本发明中，所述蝗虫绿僵菌优选为选自生物保藏编号为CGMCC NO.7992的菌种活化培养得到。在实施例中，可具体采用经过固体发酵后并烘干粉碎得到的固体粉状蝗虫绿僵菌。
在本发明中，所述的蝗虫绿僵菌的制备方法包括以下步骤：
1)将蝗虫绿僵菌菌种活化；
2)将所述活化后的蝗虫绿僵菌接种于蝗虫绿僵菌液体培养基中进行液体培养，培养30～50h停止培养，得到蝗虫绿僵菌培养液；
3)将所述步骤2)得到的蝗虫绿僵菌培养液接种于蝗虫绿僵菌固体培养基中，进行固体发酵，得到蝗虫绿僵菌。
在本发明中，将保藏的蝗虫绿僵菌菌种接种于装有营养琼脂培养基的茄型瓶中，22-30℃培养10～14h进行活化培养。
在本发明中，所述活化后的蝗虫绿僵菌接种于液体培养基的接种量优选为15～25％，更优选为18～22％，最优选为20％。
在本发明中，所述蝗虫绿僵菌液体培养基优选包括以下组分：黄豆粉20～40g/L，蔗糖20～40g/L，面粉0.03～0.07g/L，甘薯粉0.03～0.07g/L，磷酸氢二钠0.0002g/L；更优选为：黄豆粉25～35g/L，蔗糖25～35g/L，面粉0.04～0.06g/L，甘薯粉0.04～0.06g/L，磷酸氢二钠0.0002g/L；最优选为：黄豆粉30g/L，蔗糖30g/L，面粉0.05g/L，甘薯粉0.05g/L，磷酸氢二钠0.0002g/L。
在本发明中，所述液体培养基优选经120～130℃灭菌30～45min后使用。本发明对培养基灭菌的设备没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的灭菌设备即可。本发明对所述培养设备没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的培养设备即可，如发酵罐。
在本发明中，所述蝗虫绿僵菌液体培养的温度优选为22～30℃，更优选为24～28℃，最优选为26℃；所述蝗虫绿僵菌液体培养的pH值优选为6.6～7.2，更优选为6.8～7.0，最优选为6.9；罐内压力优选为0.05～0.1MPa，更优选为0.07～0.08MpPa；所述液体培养的通气量优选为0.8～1.2V/V·min，更优选为1V/V·min；所述液体培养的时间优选为25～45h，更优选为30～40h，最优选为35h。
完成所述蝗虫绿僵菌液体培养后，本发明将得到的蝗虫绿僵菌培养液接种于固体培养基中，进行固体发酵，得到固体发酵蝗虫绿僵菌。在本发明中，所述蝗虫绿僵菌培养液接种于固体培养基的接种量优选为15～25％，更优选为18～22％，最优选为20％。
在本发明中，所述蝗虫绿僵菌固体培养基优选包括以下重量份的组分：麦麸40～80份，玉米粉15～35份，豆粕5～15份；更优选为麦麸50～70份，玉米粉20～30份，豆粕7～13份；最优选为麦麸60份，玉米粉25份，豆粕10份。本发明在所述白僵菌固体培养基中添加蒸馏水，使固体培养基含水量优选为45％～55％，更优选为47％～52％，最优选为50％，然后进行固体发酵。
在本发明中，所述固体培养基的厚度优选为2～5cm，更优选为2.5～3.5cm，最优选为3cm。
在本发明中，所述蝗虫绿僵菌固体发酵的温度优选为22～30℃，更优选为24～28℃，最优选为26℃；所述蝗虫绿僵菌固体发酵的湿度优选为40％～95％，更优选为55％～75％，最优选为65％；所述蝗虫绿僵菌固体发酵的时间优选为40～90h，更优选为50～75h，最优选为65h。
完成所述蝗虫绿僵菌固体发酵后，本发明优选对得到孢子粉的进行收集，得到蝗虫绿僵菌。在本发明中，所述蝗虫绿僵菌孢子的收集具体采用微生物固态发酵真菌孢子分离设备的仪器进行。所述微生物固态发酵真菌孢子分离设备的仪器购自江西天人生态股份有限公司。
在本发明中，所述固体发酵得到的蝗虫绿僵菌的有效孢子量为50～500亿个/克，更优选为100～300亿个/克，最优选为200亿个/克。
在本发明中，所述有效成分优选还包括有机杀虫剂；具体的所述的有机杀虫剂优选为甲氨基阿维菌素、呋虫胺、噻虫嗪、阿维菌素、噻虫啉、多杀菌素、氟啶虫酰胺、灭幼脲、氯虫苯甲酰胺、除虫脲、高效氯氰菊酯、溴氰菊酯和茚虫威中的一种或几种。本发明对上述有机杀虫剂的来源没有特殊限定，采用市售商品即可。
在本发明中，当所述有效成分同时包括蝗虫绿僵菌和有机杀虫剂时，蝗虫绿僵菌与有机杀虫剂的质量比优选为(2～50)：(8～55)，更优选为(4～45)：(10～52)，最优选为(12～30)：(15～40)。
本发明提供的展膜油悬浮剂包括质量含量为3～25％的表面活性剂，优选为8～20％，更优选为12～15％。在本发明中，对所述的表面活性剂没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的市售商品即可。具体的可优选为脂肪醇聚氧乙烯醚和壬基酚氧乙烯醚中的一种或两种，更优选为脂肪醇聚氧乙烯醚和壬基酚氧乙烯醚。当所述表面活性剂为上述两种试剂时，所述脂肪醇聚氧乙烯醚和壬基酚氧乙烯醚的质量比优选为(4～16)：(2～15)，更优选为(6～14)：(4～12)，最优选为(8～10)：(8～10)。在本发明中，所述表面活性剂吸附于农药微粒表面，形成不同的分散体系，起到乳化、润湿、增溶、消泡、稳定的作用。在农药使用过程中，表面活性剂可以改善药液在植物叶面或防治对象表面上的分布、附着、渗透等，提高农药剂量的有效转移，直接或间接地提高农药的有效利用率。
本发明提供的展膜油悬浮剂包括质量含量为2～30％的成膜剂，优选为8～25％，更优选为10～20％。在本发明中，对所述成膜剂的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员常规选用的市售商品即可。具体的可优选为十二碳醇酯、十八醇、丙二醇苯醚和丁醚醋酸酯中的一种或几种，更优选为2～3种，最优选为4种。当所述成膜剂为上述试剂的2～3种时，可任意比例混合。当所述成膜剂为上述试剂的4种时，所述十二碳醇酯与十八醇、丙二醇苯醚、丁醚醋酸酯的质量比优选为(1～10)：(2～12)：(1～9)：(0.5～9)，更优选为(2～8)：(4～10)：(2～8)：((1～8)，最有选为(4～6)：(6～8)：(4～6)：(4～6)。在本发明中，所述的成膜剂的作用为促进展膜油悬浮剂塑性流动和弹性变形，可以使展膜油悬浮剂具有更好的铺展性能。
本发明提供的蝗虫绿僵菌的展膜油悬浮剂余量为油性分散介质。在本发明中，对所述油性分散介质的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的常规市售商品即可。具体的可优选为溶剂油、二甲苯、白油、甲基萘和乙醇中的一种或几种。油性分散介质具体的可为上述试剂中的任意几种，可任意比例混合。在本发明中，所述油性分散介质能够将有效成分分散均匀，使展膜油悬浮剂质地均匀、分散性能好。
本发明对所述蝗虫绿僵菌的展膜油悬浮剂的制备方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的展膜油悬浮剂的制备方法即可。具体的可将所述的有效成分、表面活性剂、成膜剂和油性分散介质混合后制备得到。
本发明还提供了蝗虫绿僵菌展膜油悬浮剂在防治农作物昆虫虫害方面的应用。具体的，可应用的农作物种类包括粮食作物、经济作物、蔬菜作物、果类作物、饲料作物等。本发明所述的蝗虫绿僵菌展膜油悬浮剂可以防治水稻螟虫、松毛虫、蛴螬、蝗虫、松褐天牛、白蚁、食心虫、稻飞虱、二化螟、白禾螟、菜青虫、小菜蛾、棉玉米螟、白粉虱、蚜虫、绿叶蝉、白背飞虱等虫害。
本发明对所述含蝗虫绿僵菌的展膜油悬浮剂的施药方法没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的展膜油悬浮剂的施药方法即可。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
以下实施例有效成分含量均按折百公斤计算后加入，其中蝗虫绿僵菌如无特别指出含孢子量，有效孢子含量为200亿个/克。
实施例1
蝗虫绿僵菌的制备:将保藏的蝗虫绿僵菌菌种接种于装有营养琼脂培养基的茄型瓶中，26℃培养12h进行活化培养；活化培养后的蝗虫绿僵菌以20％的接种量接种于121℃灭菌35min后的液体培养基中，在发酵罐中进行液体培养，具体的培养条件为：温度为26℃；pH值为6.9；罐内压力为0.08MPa，培养通气量为1V/V·min；培养35h后停止培养，得到蝗虫绿僵菌培养液；将得到的蝗虫绿僵菌培养液以20％的接种量接种于固体培养基中，在固体培养基中加入蒸馏水，使固体培养基含水量为50％，然后进行固体发酵，发酵条件为：发酵温度为26℃，发酵湿度为65％，发酵时间为65h；固体发酵结束后将得到的固体发酵的蝗虫绿僵菌在40℃条件下干燥35h，烘干至固体发酵的蝗虫绿僵菌的水分含量为30％，将固体发酵后的菌料采用微生物固态发酵真菌孢子分离设备收集蝗虫绿僵菌孢子，经检测，蝗虫绿僵菌的有效孢子量为(50～500)亿个/克。
实施例2
以重量百分比计，将实施例1制备的蝗虫绿僵菌40％，脂肪醇聚氧乙烯醚和10％，壬基酚氧乙烯醚12％，十二碳醇酯2％，十八醇10％，丙二醇苯醚6％，丁醚醋酸酯4％，溶剂油补足至100％。
制备方法：在带搅拌器的混合釜中，先将蝗虫绿僵菌、脂肪醇聚氧乙烯醚、壬基酚氧乙烯醚、十二碳醇酯、十八醇、丙二醇苯醚、丁醚醋酸酯、溶剂油，充分搅拌混合后，再泵入砂磨机中沙磨，沙磨至颗粒大小D90≤5μm后，即得含孢蝗虫绿僵菌展膜油悬浮剂。
按照与实施例2相同的制备工艺，制备以下实施例。
实施例3
以重量百分比计，将实施例1制备的蝗虫绿僵菌15％，甲氨基阿维菌素20％，脂肪醇聚氧乙烯醚14％，壬基酚氧乙烯醚6％，十二碳醇酯5％，十八醇5％，丙二醇苯醚8％，丁醚醋酸酯5％，乙醇28％，白油补足至100％；得到含有甲氨基阿维菌素和蝗虫绿僵菌的展膜油悬浮剂。
实施例4
以重量百分比计，将实施例1制备的蝗虫绿僵菌40％，呋虫胺20％，脂肪醇聚氧乙烯醚8％，壬基酚氧乙烯醚12％，十二碳醇酯5％，十八醇4％，丙二醇苯醚8％，丁醚醋酸酯3％，乙醇15％，甲基萘补足至100％，得到含有呋虫胺和蝗虫绿僵菌的展膜油悬浮剂。。
实施例5
以重量百分比计，将实施例1制备的蝗虫绿僵菌10％，噻虫嗪40％，脂肪醇聚氧乙烯醚12％，壬基酚氧乙烯醚4％，十八醇10％，二甲苯补足至100％，得到含有噻虫嗪和蝗虫绿僵菌的展膜油悬浮剂。
实施例6
以重量百分比计，将实施例1制备的蝗虫绿僵菌32％，阿维菌素18％，脂肪醇聚氧乙烯醚12％，壬基酚氧乙烯醚7.5％，丁醚醋酸酯6％，十八醇5％，二甲苯补足至100％。得到含有阿维菌素和蝗虫绿僵菌的展膜油悬浮剂。
实施例7
以重量百分比计，将实施例1制备的蝗虫绿僵菌45％，噻虫啉10％，脂肪醇聚氧乙烯醚8％，壬基酚氧乙烯醚8％，丙二醇苯醚5％，十二碳醇酯8％，乙醇补足至100％，得到含有噻虫啉和蝗虫绿僵菌的展膜油悬浮剂。
实施例8
以重量百分比计，将实施例1制备的蝗虫绿僵菌5％，氟啶虫酰胺30％，脂肪醇聚氧乙烯醚8％，壬基酚氧乙烯醚9％，十二碳醇酯6％，丙二醇苯醚4％，丁醚醋酸酯5％，白油补足至100％，得到含有氟啶虫酰胺和蝗虫绿僵菌的展膜油悬浮剂。
实施例9
以重量百分比计，将实施例1制备的蝗虫绿僵菌4％，灭虫脲45％，脂肪醇聚氧乙烯醚6％，壬基酚氧乙烯醚6％，十八醇4％，丙二醇苯醚2％，丁醚醋酸酯8％，二甲苯补足至100％，得到含有灭幼脲和蝗虫绿僵菌的展膜油悬浮剂。
实施例10
以重量百分比计，将实施例1制备的蝗虫绿僵菌10％，氯虫苯甲酰胺30％，脂肪醇聚氧乙烯醚14％，壬基酚氧乙烯醚6％，十二碳醇酯4％，十八醇8％，丙二醇苯醚4％，丁醚醋酸酯2％，白油补足至100％，得到含有氯虫苯甲酰胺和蝗虫绿僵菌的展膜油悬浮剂。
实施例11
以重量百分比计，将实施例1制备的蝗虫绿僵菌8％，除虫脲52％，脂肪醇聚氧乙烯醚12％，十二碳醇酯4％，十八醇8％，丙二醇苯醚2％，丁醚醋酸酯1％，二甲苯补足至100％，得到含有除虫脲和蝗虫绿僵菌的展膜油悬浮剂。
实施例12
以重量百分比计，将实施例1制备的蝗虫绿僵菌10％，茚虫威30％，脂壬基酚氧乙烯醚15％，十二碳醇酯4％，十八醇6％，丙二醇苯醚4％，丁醚醋酸酯1％，甲基萘补足至100％，得到含有茚虫威和蝗虫绿僵菌的展膜油悬浮剂。
实施例13
以重量百分比计，将实施例1制备的蝗虫绿僵菌35％，甲氨基阿维菌素4％，噻虫啉15％，脂肪醇聚氧乙烯醚10％，十二碳醇酯4％，丙二醇苯醚2％，丁醚醋酸酯1％，乙醇补足至100％，得到含有甲氨基阿维菌素、噻虫啉和蝗虫绿僵菌的展膜油悬浮剂。
实施例14
以重量百分比计，将实施例1制备的蝗虫绿僵菌10％，灭幼脲20％，茚虫威10％，壬基酚氧乙烯醚10％，十二碳醇酯4％，十八醇10％，丙二醇苯醚2％，丁醚醋酸酯3％，甲基萘补足至100％，得到含有甲氨基阿维菌素、噻虫啉和蝗虫绿僵菌的展膜油悬浮剂。
对实施例2～14获得的含蝗虫绿僵菌的展膜油悬浮剂进行水面性能以及对防治水稻螟虫效果的测试，以5％醚菊酯展膜油剂为对照，结果见表1：
表1含蝗虫绿僵菌的展膜油悬浮剂水面性能及对水稻螟虫防治效果测试结果
从表2可以得出，采用本发明提供的蝗虫绿僵菌展膜油悬浮剂的铺展时间为2.2～2.5s，铺展速度为63～66cm/s，铺展面积为5.3～5.6m2，杀虫效果在84％～85％。与对照组相比，蝗虫绿僵菌的展膜油悬浮剂的铺展性能佳，达到的杀虫效果稳定且要高于5％醚菊酯展膜油剂。
由以上实施例可知，本发明所述的展膜油悬浮剂与传统的展膜油剂相比，本发明提供的展膜油悬浮剂的铺展性能良好，达到的防治病虫害的效果稳定。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。