本发明涉及一种生物制剂，具体的说是一种防治番茄立枯病的生物制剂及其制备方法。
背景技术：
番茄别名西红柿、洋柿子，古名六月柿、喜报三元。在秘鲁和墨西哥，最初称之为“狼桃”。果实营养丰富，具特殊风味。可以生食、煮食、加工制成番茄酱、汁或整果罐藏。番茄是全世界栽培最为普遍的果菜之一。 美国、苏联、意大利和中国为主要生产国。在欧、美洲的国家、中国和日本有大面积温室、塑料大棚及其他保护地设施栽培。中国各地普遍种植。栽培面积仍在继续扩大。
番茄立枯病多发生于真叶展开后的育苗中后期，死苗较慢。幼苗基部先出现椭圆形褐色病斑，地上叶片白天中午萎蔫，早晨和晚上可以恢复正常，随着病斑逐渐扩大、凹陷、绕茎一周，茎基部变色干缩，病苗萎蔫后不再恢复，直至枯死。此时幼苗茎部已经开始木质化，病苗可以直立不倒，称为立枯病。潮湿时，病苗附近可见到稀疏的淡褐色蜘蛛网状霉层，后期形成菌核。此病识别特征是幼苗茎基部干缩、直立枯死。
立枯病菌病原属于半知菌亚门的立枯丝核菌，主要以菌丝体和菌核等形式在土壤中越冬。立枯菌核一般在土壤中可存活2－3年。病菌主要通过雨水、流水、施肥及耕作等方式传播蔓延。在土温15—21℃，土壤粘重、酸性土、重茬等条件下易诱发该病。
技术实现要素：
本发明目的是为解决上述技术问题的不足，提供一种防治番茄立枯病的生物制剂及其制备方法，其对番茄立枯病具有较好的防治效果。
一种防治番茄立枯病的生物制剂的制备方法，包括以下制备步骤：
步骤一、金银花提取物的制备：取金银花280g，除去杂质，洗净，干燥后，加入1L水，加热至沸腾后，文火熬制30分钟停火，过滤后，所得上清液即为金银花提取物，将其冷却至室温备用；
步骤二、蒲公英提取物的制备：取蒲公英全株120g，进行清洗、晾干，粉碎，然后加入1L的石油醚浸泡48小时进行萃取，布氏漏斗抽滤，收集滤液；55～65℃减压蒸馏回收石油醚，滤渣中加入回收的石油醚浸泡进行萃取，重复萃取4～5次并回收滤液；将多次提取后抽滤得到的滤液减压蒸馏浓缩，得到混合物，即为蒲公英提取物，备用；
步骤三、艾叶提取物的制备：取艾叶150g，除去杂质，洗净，加入1L水，加热至沸腾后5分钟，加入5g新鲜的姜片，再调制文火熬制30分钟停火，过滤后，所得上清液即为艾叶提取物，将其冷却至室温，备用；
步骤四、八角莲提取液的制备：取新鲜八角莲500克捣烂，加入1L水浸泡6小时后，过滤，所得上清液即为八角莲提取液，置于4℃冰箱中保存备用；
步骤五、大蒜提取物的制备：选取新鲜的大蒜，洗净、晾干后称取300g，放于体积浓度75％的乙醇中进行表面消毒5 min，用无菌水冲洗3次后置于组织匀浆机中，加入100 mL无菌水，以5000r/min的转速匀浆5 min将其制成糊状，然后在离心机中温度4℃、转速10000r/min的条件下离心10min，所得上清液即得到大蒜提取物，置于4℃冰箱中保存备用；
步骤六、按照金银花提取物的质量百分比为23-32%，蒲公英提取物的质量百分比为18-25%，艾叶提取物的质量百分比为8-15%，八角莲提取液的质量百分比为10-20%，大蒜提取物的质量百分比为8-15%，硫磺粉的质量百分比为15-23%， 取上述步骤所制备的金银花提取物、蒲公英提取物、艾叶提取物、八角莲提取液、大蒜提取物和另外准备的硫磺粉，备用；
步骤七、将所取的金银花提取物、蒲公英提取物、艾叶提取物和大蒜提取物混合后加热至45-60℃保温17-19小时，得到混合物Ⅰ；然后在混合物Ⅰ中加入所取的硫磺粉搅拌均匀，最后加入所取八角莲提取液混合均匀后即制备出防治番茄立枯病的生物制剂。
所取金银花提取物、蒲公英提取物、艾叶提取物、八角莲提取液、大蒜提取物和硫磺粉的质量百分比优选为：金银花提取物25%，蒲公英提取物25%，艾叶提取液10%，八角莲提取液7%，大蒜提取物13%，硫磺粉20%。
所取的金银花提取物、蒲公英提取物、艾叶提取物和大蒜提取物混合后加热温度和时间优选为：55℃、18小时。
有益效果是：
1、本发明用于防治番茄立枯病的生物制剂，其组成成分金银花、八角莲和硫磺粉本身具有杀菌作用，结合艾叶提取液的驱菌及其杀菌效果，达到较好的杀菌及其防治效果， 在组成中的蒲公英提取物的辅助作用下，使防治效果达到最优；大蒜提取物作为渗透剂，可使药液快速渗透到番茄植株中；且艾叶提取物中含有生姜的成份，杀菌效果更佳；本发明用于防治番茄立枯病的生物制剂的各组份完美结合，对番茄植株的番茄立枯病有较好的防治效果。
2、本发明用于防治番茄立枯病的生物制剂其制备方法简单，成本低廉，各组成成分均为无害物质，除硫磺粉外，其他组分均从植物中提取，所制备出的用于防治番茄立枯病的生物制剂，绿色无污染，对人畜无毒无害作用，对番茄立枯病具有较高的防治率，达到90%以上，且药效较长，长达30~36天。
具体实施方式
一种防治番茄立枯病的生物制剂的制备方法，包括以下制备步骤：
步骤一、金银花提取物的制备：取金银花280g，除去杂质，洗净，干燥后，加入1L水，加热至沸腾后，文火熬制30分钟停火，过滤后，所得上清液即为金银花提取物，将其冷却至室温备用；
步骤二、蒲公英提取物的制备：取蒲公英全株120g，进行清洗、晾干，粉碎，然后加入1L的石油醚浸泡48小时进行萃取，布氏漏斗抽滤，收集滤液；55～65℃减压蒸馏回收石油醚，滤渣中加入回收的石油醚浸泡进行萃取，重复萃取4～5次并回收滤液；将多次提取后抽滤得到的滤液减压蒸馏浓缩，得到混合物，即为蒲公英提取物，备用；
步骤三、艾叶提取物的制备：取艾叶150g，除去杂质，洗净，加入1L水，加热至沸腾后5分钟，加入5g新鲜的姜片，再调制文火熬制30分钟停火，过滤后，所得上清液即为艾叶提取物，将其冷却至室温，备用；
步骤四、八角莲提取液的制备：取新鲜八角莲500克捣烂，加入1L水浸泡6小时后，过滤，所得上清液即为八角莲提取液，置于4℃冰箱中保存备用；
步骤五、大蒜提取物的制备：选取新鲜的大蒜，洗净、晾干后称取300g，放于体积浓度75％的乙醇中进行表面消毒5 min，用无菌水冲洗3次后置于组织匀浆机中，加入100 mL无菌水，以5000r/min的转速匀浆5 min将其制成糊状，然后在离心机中温度4℃、转速10000r/min的条件下离心10min，所得上清液即得到大蒜提取物，置于4℃冰箱中保存备用；
步骤六、按照金银花提取物的质量百分比为23-32%，蒲公英提取物的质量百分比为18-25%，艾叶提取物的质量百分比为8-15%，八角莲提取液的质量百分比为10-20%，大蒜提取物的质量百分比为8-15%，硫磺粉的质量百分比为15-23%， 取上述步骤所制备的金银花提取物、蒲公英提取物、艾叶提取物、八角莲提取液、大蒜提取物和另外准备的硫磺粉，备用；
步骤七、将所取的金银花提取物、蒲公英提取物、艾叶提取物和大蒜提取物混合后加热至45-60℃保温17-19小时，得到混合物Ⅰ；然后在混合物Ⅰ中加入所取的硫磺粉搅拌均匀，最后加入所取八角莲提取液混合均匀后即制备出防治番茄立枯病的生物制剂。
所取金银花提取物、蒲公英提取物、艾叶提取物、八角莲提取液、大蒜提取物和硫磺粉的质量百分比优选为：金银花提取物25%，蒲公英提取物25%，艾叶提取液10%，八角莲提取液7%，大蒜提取物13%，硫磺粉20%。
所取的金银花提取物、蒲公英提取物、艾叶提取物和大蒜提取物混合后加热温度和时间优选为：55℃、18小时。
步骤八、毎50株番茄植株，使用本发明防治番茄立枯病的生物制剂为100ml，加水20-30L，充分摇匀，对番茄植株进行全株喷细雾至滴珠。
实施例1
一种防治番茄立枯病的生物制剂的制备方法，包括以下制备步骤：
步骤一、金银花提取物的制备：取金银花280g，除去杂质，洗净，干燥后，加入1L水，加热至沸腾后，文火熬制30分钟停火，过滤后，所得上清液即为金银花提取物，将其冷却至室温备用；
步骤二、蒲公英提取物的制备：取蒲公英全株120g，进行清洗、晾干，粉碎，然后加入1L的石油醚浸泡48小时进行萃取，布氏漏斗抽滤，收集滤液；55～65℃减压蒸馏回收石油醚，滤渣中加入回收的石油醚浸泡进行萃取，重复萃取4～5次并回收滤液；将多次提取后抽滤得到的滤液减压蒸馏浓缩，得到混合物，即为蒲公英提取物，备用；
步骤三、艾叶提取物的制备：取艾叶150g，除去杂质，洗净，加入1L水，加热至沸腾后5分钟，加入5g新鲜的姜片，再调制文火熬制30分钟停火，过滤后，所得上清液即为艾叶提取物，将其冷却至室温，备用；
步骤四、八角莲提取液的制备：取新鲜八角莲500克捣烂，加入1L水浸泡6小时后，过滤，所得上清液即为八角莲提取液，置于4℃冰箱中保存备用；
步骤五、大蒜提取物的制备：选取新鲜的大蒜，洗净、晾干后称取300g，放于体积浓度75％的乙醇中进行表面消毒5 min，用无菌水冲洗3次后置于组织匀浆机中，加入100 mL无菌水，以5000r/min的转速匀浆5 min将其制成糊状，然后在离心机中温度4℃、转速10000r/min的条件下离心10min，所得上清液即得到大蒜提取物，置于4℃冰箱中保存备用；
步骤六、按照金银花提取物的质量百分比为25%，蒲公英提取物的质量百分比为25%，艾叶提取物的质量百分比为10%，八角莲提取液的质量百分比为10%，大蒜提取物的质量百分比为12%，硫磺粉的质量百分比为18%， 取上述步骤所制备的金银花提取物、蒲公英提取物、艾叶提取物、八角莲提取液、大蒜提取物和另外准备的硫磺粉，备用；
步骤七、将所取的金银花提取物、蒲公英提取物、艾叶提取物和大蒜提取物混合后加热至45-60℃保温17-19小时，得到混合物Ⅰ；然后在混合物Ⅰ中加入所取的硫磺粉搅拌均匀，最后加入所取八角莲提取液混合均匀后即制备出防治番茄立枯病的生物制剂。
步骤八、毎50株番茄植株，使用本发明防治番茄立枯病的生物制剂为100ml，加水20L，充分摇匀，对番茄植株进行全株喷细雾至滴珠。
结果显示：本发明防治番茄立枯病的生物制剂对番茄植株进行喷洒后其对番茄立枯病的防治率达到90%，药效长达32天。
实施例2
一种防治番茄立枯病的生物制剂的制备方法，包括以下制备步骤：
步骤一、金银花提取物的制备：取金银花280g，除去杂质，洗净，干燥后，加入1L水，加热至沸腾后，文火熬制30分钟停火，过滤后，所得上清液即为金银花提取物，将其冷却至室温备用；
步骤二、蒲公英提取物的制备：取蒲公英全株120g，进行清洗、晾干，粉碎，然后加入1L的石油醚浸泡48小时进行萃取，布氏漏斗抽滤，收集滤液；55～65℃减压蒸馏回收石油醚，滤渣中加入回收的石油醚浸泡进行萃取，重复萃取4～5次并回收滤液；将多次提取后抽滤得到的滤液减压蒸馏浓缩，得到混合物，即为蒲公英提取物，备用；
步骤三、艾叶提取物的制备：取艾叶150g，除去杂质，洗净，加入1L水，加热至沸腾后5分钟，加入5g新鲜的姜片，再调制文火熬制30分钟停火，过滤后，所得上清液即为艾叶提取物，将其冷却至室温，备用；
步骤四、八角莲提取液的制备：取新鲜八角莲500克捣烂，加入1L水浸泡6小时后，过滤，所得上清液即为八角莲提取液，置于4℃冰箱中保存备用；
步骤五、大蒜提取物的制备：选取新鲜的大蒜，洗净、晾干后称取300g，放于体积浓度75％的乙醇中进行表面消毒5 min，用无菌水冲洗3次后置于组织匀浆机中，加入100 mL无菌水，以5000r/min的转速匀浆5 min将其制成糊状，然后在离心机中温度4℃、转速10000r/min的条件下离心10min，所得上清液即得到大蒜提取物，置于4℃冰箱中保存备用；
步骤六、按照金银花提取物的质量百分比为32%，蒲公英提取物的质量百分比为18%，艾叶提取物的质量百分比为15%，八角莲提取液的质量百分比为15%，大蒜提取物的质量百分比为15%，硫磺粉的质量百分比为15%， 取上述步骤所制备的金银花提取物、蒲公英提取物、艾叶提取物、八角莲提取液、大蒜提取物和另外准备的硫磺粉，备用；
步骤七、将所取的金银花提取物、蒲公英提取物、艾叶提取物和大蒜提取物混合后加热至45-60℃保温17-19小时，得到混合物Ⅰ；然后在混合物Ⅰ中加入所取的硫磺粉搅拌均匀，最后加入所取八角莲提取液混合均匀后即制备出防治番茄立枯病的生物制剂。
步骤八、毎50株番茄植株，使用本发明防治番茄立枯病的生物制剂为100ml，加水20-30L，充分摇匀，对番茄植株进行全株喷细雾至滴珠。
结果显示：本发明防治番茄立枯病的生物制剂对番茄植株进行喷洒后其对番茄立枯病的防治率达到92%，药效长达36天。
实施例3
一种防治番茄立枯病的生物制剂的制备方法，包括以下制备步骤：
步骤一、金银花提取物的制备：取金银花280g，除去杂质，洗净，干燥后，加入1L水，加热至沸腾后，文火熬制30分钟停火，过滤后，所得上清液即为金银花提取物，将其冷却至室温备用；
步骤二、蒲公英提取物的制备：取蒲公英全株120g，进行清洗、晾干，粉碎，然后加入1L的石油醚浸泡48小时进行萃取，布氏漏斗抽滤，收集滤液；55～65℃减压蒸馏回收石油醚，滤渣中加入回收的石油醚浸泡进行萃取，重复萃取4～5次并回收滤液；将多次提取后抽滤得到的滤液减压蒸馏浓缩，得到混合物，即为蒲公英提取物，备用；
步骤三、艾叶提取物的制备：取艾叶150g，除去杂质，洗净，加入1L水，加热至沸腾后5分钟，加入5g新鲜的姜片，再调制文火熬制30分钟停火，过滤后，所得上清液即为艾叶提取物，将其冷却至室温，备用；
步骤四、八角莲提取液的制备：取新鲜八角莲500克捣烂，加入1L水浸泡6小时后，过滤，所得上清液即为八角莲提取液，置于4℃冰箱中保存备用；
步骤五、大蒜提取物的制备：选取新鲜的大蒜，洗净、晾干后称取300g，放于体积浓度75％的乙醇中进行表面消毒5 min，用无菌水冲洗3次后置于组织匀浆机中，加入100 mL无菌水，以5000r/min的转速匀浆5 min将其制成糊状，然后在离心机中温度4℃、转速10000r/min的条件下离心10min，所得上清液即得到大蒜提取物，置于4℃冰箱中保存备用；
步骤六、按照金银花提取物的质量百分比为23%，蒲公英提取物的质量百分比为18%，艾叶提取物的质量百分比为12%，八角莲提取液的质量百分比为17%，大蒜提取物的质量百分比为14%，硫磺粉的质量百分比为16%， 取上述步骤所制备的金银花提取物、蒲公英提取物、艾叶提取物、八角莲提取液、大蒜提取物和另外准备的硫磺粉，备用；
步骤七、将所取的金银花提取物、蒲公英提取物、艾叶提取物和大蒜提取物混合后加热至45-60℃保温17-19小时，得到混合物Ⅰ；然后在混合物Ⅰ中加入所取的硫磺粉搅拌均匀，最后加入所取八角莲提取液混合均匀后即制备出防治番茄立枯病的生物制剂。
步骤八、毎50株番茄植株，使用本发明防治番茄立枯病的生物制剂为100ml，加水20-30L，充分摇匀，对番茄植株进行全株喷细雾至滴珠。
结果显示：本发明防治番茄立枯病的生物制剂对番茄植株进行喷洒后其对番茄立枯病的防治率达到94%，药效长达32天。
实施例4
一种防治番茄立枯病的生物制剂的制备方法，包括以下制备步骤：
步骤一、金银花提取物的制备：取金银花280g，除去杂质，洗净，干燥后，加入1L水，加热至沸腾后，文火熬制30分钟停火，过滤后，所得上清液即为金银花提取物，将其冷却至室温备用；
步骤二、蒲公英提取物的制备：取蒲公英全株120g，进行清洗、晾干，粉碎，然后加入1L的石油醚浸泡48小时进行萃取，布氏漏斗抽滤，收集滤液；55～65℃减压蒸馏回收石油醚，滤渣中加入回收的石油醚浸泡进行萃取，重复萃取4～5次并回收滤液；将多次提取后抽滤得到的滤液减压蒸馏浓缩，得到混合物，即为蒲公英提取物，备用；
步骤三、艾叶提取物的制备：取艾叶150g，除去杂质，洗净，加入1L水，加热至沸腾后5分钟，加入5g新鲜的姜片，再调制文火熬制30分钟停火，过滤后，所得上清液即为艾叶提取物，将其冷却至室温，备用；
步骤四、八角莲提取液的制备：取新鲜八角莲500克捣烂，加入1L水浸泡6小时后，过滤，所得上清液即为八角莲提取液，置于4℃冰箱中保存备用；
步骤五、大蒜提取物的制备：选取新鲜的大蒜，洗净、晾干后称取300g，放于体积浓度75％的乙醇中进行表面消毒5 min，用无菌水冲洗3次后置于组织匀浆机中，加入100 mL无菌水，以5000r/min的转速匀浆5 min将其制成糊状，然后在离心机中温度4℃、转速10000r/min的条件下离心10min，所得上清液即得到大蒜提取物，置于4℃冰箱中保存备用；
步骤六、按照金银花提取物的质量百分比为25%，蒲公英提取物的质量百分比为25%，艾叶提取物的质量百分比为10%，八角莲提取液的质量百分比为7%，大蒜提取物的质量百分比为13%，硫磺粉的质量百分比为20%， 取上述步骤所制备的金银花提取物、蒲公英提取物、艾叶提取物、八角莲提取液、大蒜提取物和另外准备的硫磺粉，备用；
步骤七、将所取的金银花提取物、蒲公英提取物、艾叶提取物和大蒜提取物混合后加热至45-60℃保温17-19小时，得到混合物Ⅰ；然后在混合物Ⅰ中加入所取的硫磺粉搅拌均匀，最后加入所取八角莲提取液混合均匀后即制备出防治番茄立枯病的生物制剂。
步骤八、毎50株番茄植株，使用本发明防治番茄立枯病的生物制剂为100ml，加水20-30L，充分摇匀，对番茄植株进行全株喷细雾至滴珠。
结果显示：本发明防治番茄立枯病的生物制剂对番茄植株进行喷洒后其对番茄立枯病的防治率达到94%，药效长达32天。
用药注意事项：宜选择暖湿天气的傍晚或阴天施药，并严禁与杀菌剂、碱性农药同期或复配使用。本发明用于防治番茄立枯病不宜久置搁放、应现配现用，以免降低药效。