石蒜花提取物在制备治疗或预防真菌病的药物中的应用的制作方法

本发明涉及治疗或预防真菌的药物中的应用，具体地指一种石蒜花提取物在制备治疗或预防真菌病的药物中的应用。

背景技术：

玛咖(Lepidium meyenii)是原产于南美洲安第斯山脉的十字花科独行菜属的草本植物，玛咖根营养及生物活性成分丰富，具有抗压力、抗疲劳、抗抑郁、提高生育力等多种保健功效，请见(余龙江，金文闻，吴元喜，等.玛咖的植物学及其药理作用研究概况[J].天然产物研究与开发，2002(5)：71-74.)。近年来，国内加大了对玛咖药用成分挖掘，被被广泛应用于食品和药保健品领域，有着广阔的国内外市场需求。

然而，玛咖根腐病在我国玛咖种植区普遍发生，每年因病害造成了巨大的经济损失，引起当地玛咖种植技术人员及相关研究人员的高度重视，请见(余龙江，金文闻.玛咖的种植加工与营养保健[M].北京：化学工业出版社，2015：68-69.)。目前对玛咖根腐病的防治普遍通过化学防治来控制，过多使用化学杀菌剂有危害人类身体健康、药物残留破坏生态环境、引发病原物产生抗药性等诸多缺点，不利于玛咖产业可持续发展。因此，寻求安全、高效和经济的生物源农药尤为重要。

国内外已有植物提取物抑制植物病害的相关报道，如汪晓娟等研究了百部碱等5种植物提取物对水霉菌的抑制作用，结果表明苦楝提取物对水霉菌抑制作用最为明显，请见(汪晓娟，胡青，林岗.百部碱等5种植物提取物对水霉菌的抑制作用[J].安徽农学通报(上半月刊)，2012(23)：38-42.)；周建宏等采用生长速率法初步筛选了20种植物的水提取物对油茶软腐病菌、炭疽病菌的生物活性，不同植物提取物的林间防治效果表明：当丁香、黄芩提取物及茶皂素的质量比为1:1:1时，对油茶主要病害的防治效果最好，可达80％，同时可以将油茶的病果率降低约60％，请见(周建宏，刘君昂，邓小军，等.植物提取物对油茶主要病害的抑菌作用[J].中南林业科技大学学报，2011(04)：42-45.)。郑培伟等报道了利用石蒜鳞茎提取物和农药助剂组合而成的杀虫剂对朱砂叶螨、小菜蛾，菜蚜虫等防治效果，请见(郑培伟，陈安良，匡君根，石蒜鳞茎提取物杀虫剂及提取物制备方法，201210054345.6)；葛喜珍等公开了一种防治马铃薯干腐病的可湿性粉剂及其制备方法，该可湿性粉剂的有效成分为青皮、枳实、穿心莲、白头翁和驱虫斑鸠菊的药材乙醇提取物与小檗碱的混合物，对马铃薯干腐病的防治效果达到80％以上，请见(葛喜珍，裴庆慧，李可意，等.一种防治马铃薯干腐病的可湿性粉剂及其制备方法，20151079627.7)。

目前还未见利用石蒜植物的花这一部位作为原料提取有效成分防治玛咖根腐病、马铃薯干腐病及睡莲黑斑病的相关报道。石蒜花现人工种植越来越多，花期过后，花瓣枯萎凋谢，不被人们利用。

技术实现要素：

本发明目的是在于提供了一种石蒜花提取物在制备治疗或预防真菌病的药物中的应用。该石蒜花提取物作为高效、安全、制备简便的生物源杀菌剂，其原料来自于凋谢的石蒜花瓣，生产成本极低，变废为宝。石蒜花提取物在制备治疗或预防玛咖根腐病、马铃薯干腐病及睡莲黑斑病药物中的应用，提取物抑菌率实验表明，该石蒜花提取物对玛咖根腐病的抑菌率达到80％以上，对马铃薯干腐病和睡莲黑斑病原菌的抑菌率达到70％以上。

为实现上述目的，本发明提供的一种石蒜花提取物在制备治疗或预防真菌病的药物中的应用，所述真菌病为玛咖根腐病、马铃薯干腐病或睡莲黑斑病。

进一步地，所述石蒜花提取物的制备方法，包括以下步骤：

1)采集已经枯萎或者凋谢的石蒜花瓣，清洗干净后晾干，

2)将清洗晾干后的花瓣样品匀浆粉碎，

3)将花瓣与乙醇溶液按质量体积比1:10～30g/L混合，浸提24～72h，过滤花瓣杂质后即可得到石蒜花提取物，其中，乙醇溶液质量分数为60～90％。

再进一步地，所述步骤3)中，乙醇溶液的质量分数为70～85％。

再进一步地，所述花瓣与乙醇质量体积比1:15～25g/L。

上述石蒜花提取物在制备治疗或预防真菌病的药物中的应用，其应用基本过程是：

A.采用滤纸片平板对峙培养法研究石蒜花提取物对油茶主要病害的拮抗作用。准备好直径为7mm的滤纸片并灭菌处理，并在石蒜花提取物中浸润2min；将打好的直径为7mm的病原菌饼和浸润后的滤纸片放置在平板中心线上，病原菌饼置于平板中央，浸润有石蒜花提取物的滤纸片分别距离平板中心1.5cm，置于28℃恒温培养箱培养，并每隔24h在超净工作台中无菌吸取5μL石蒜花提取物浸润1个滤纸片，5-7天后观察抑菌带有无及大小，每个处理重复3次。

抑菌率＝(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-7)×100％。

B.采用培养法研究石蒜花提取物对油茶主要病害的拮抗作用。将石蒜花提取物与约50℃的PDA固体培养基按照1:19混匀后倒入培养皿，冷却后在平板中央放入直径为7mm的油茶主要病原菌菌饼，以无菌水为对照，每个处理重复3次。5天后测量病原菌菌落直径。

抑菌率＝(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-7)×100％。

本发明的有益效果在于：

1)首次发现了石蒜花提取物对玛咖根腐病，马铃薯干腐病及睡莲黑斑病均具有较强的抑制和灭杀活性。抗菌谱广泛，可有效降低防治成本。

2)培养法实验抑菌率表明：该石蒜花提取物对玛咖根腐病的抑菌率达到80％以上，对马铃薯干腐病和睡莲黑斑病原菌的抑菌率达到70％以上。

附图说明

图1为石蒜花提取物对玛咖根腐病原菌的拮抗效果示意图；

图2为石蒜花提取物对马铃薯干腐病原菌的拮抗效果示意图；

图3为石蒜花提取物对睡莲黑斑病原菌的拮抗效果示意图；

附图说明：其中图1-3中A分别为玛咖根腐病原菌，马铃薯干腐病原菌及睡莲黑斑病原菌在未添加石蒜花提取物的培养基上的生长状态，B为以上三种病原菌在添加了石蒜花提取物的培养基上的生长状态，结果显示该石蒜花提取物对这三种病原真菌均有很好的拮抗作用，尤其是对玛咖根腐病抑菌效果显著。

具体实施方式

为了更好地解释本发明，以下结合具体实施例进一步阐明本发明的主要内容，但本发明的内容不仅仅局限于以下实施例。

菌株来源：玛咖根腐病Fusarium avenaceum同文献报道菌株(Logrieco A,Rizzo A,Ferracane R,et al.Occurrence ofbeauvericin and enniatins in wheat affected by Fusariumavenaceumhead blight[J].Applied and EnvironmentalMicrobiology,2002,68(1):82-85.)；马铃薯干腐病Fusarium equiseti同文献报道菌株(牛秀群,李金花,张俊莲,等.甘肃省干旱灌区连作马铃薯根际土壤中镰刀菌的变化[J].草业学报,2011,20(4):236-243.)；睡莲黑斑病Phoma herbarum，同文献报道菌株(赵丹丹,王云,付晓萍,等.台湾青枣致腐微生物的分离鉴定及其抑制研究[J].西南农业学报,2016,29(2):379-384.)。

实施例1

石蒜花提取物1的制备方法，其步骤是：

1)采集已经枯萎或者凋谢的石蒜花瓣，自来水清洗干净后晾干，

2)利用匀浆机将清洗晾干后的花瓣样品匀浆粉碎，按照质量体积比1：10g/L将花瓣和质量分数为90％的乙醇混合，浸提24h，过滤花瓣杂质后即得到石蒜花提取物1，4℃短期保藏。

实施例2

石蒜花提取物2的制备方法，其步骤是：

1)采集已经枯萎或者凋谢的石蒜花瓣，自来水清洗干净后晾干，

2)利用匀浆机将清洗晾干后的花瓣样品粉碎，按照质量体积比1：20g/L将花瓣和质量分数为60％的乙醇混合，浸提72h，过滤花瓣杂质后即得到石蒜花提取物2，4℃短期保藏。

实施例3

石蒜花提取物3的制备方法，其步骤是：

1)采集已经枯萎或者凋谢的石蒜花瓣，自来水清洗干净后晾干，

2)利用匀浆机将清洗晾干后的花瓣样品粉碎，按照质量体积比1：15g/L将花瓣和质量分数为80％的乙醇混合，浸提48h，过滤花瓣杂质后即得到石蒜花提取物3，4℃短期保藏。

实施例4

上述石蒜花提取物在制备治疗或预防玛咖根腐病、马铃薯干腐病及睡莲黑斑病病原菌药物中的应用，其平板对峙培养法步骤是：

准备好直径为7mm的滤纸片并灭菌处理，并在石蒜花提取物中浸润2min；将打好的直径为7mm的病原菌饼和浸润后的滤纸片放置在平板中心线上，病原菌饼置于平板中央，浸润有石蒜花提取物的滤纸片分别距离平板中心1.5cm，置于28℃恒温培养箱培养，并每隔24h在超净工作台中无菌吸取5μL石蒜花提取物浸润1个滤纸片，5-7天后观察抑菌带有无及大小，每个处理重复3次。结果见表1。结果表明石蒜花提取物对玛咖根腐病，马铃薯干腐病及睡莲黑斑病均有很好的拮抗作用，其中对玛咖根腐病的抑菌率最佳，达到80％以上。

表1石蒜花提取物对几种真菌病害的抑菌率

表中数据为平均值±标准差(下同)，

抑菌率＝(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-7)×100％。

实施例5

上述石蒜花提取物在制备治疗或预防玛咖根腐病、马铃薯干腐病及睡莲黑斑病病原菌药物中的应用，其培养法步骤是：

将石蒜花提取物与约50℃的PDA固体培养基按照1:19混匀后倒入培养皿，冷却后在平板中央分别放入直径为7mm的玛咖根腐病、马铃薯干腐病及睡莲黑斑病菌饼，以无菌水为对照，每个处理重复3次。7天后测量病原菌菌落直径。

抑菌率＝(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-7)×100％。

表2显示石蒜花提取物对玛咖根腐病的抑菌率达到80％以上，对马铃薯干腐病和睡莲黑斑病原菌的抑菌率达到70％以上，说明该提取物的抑菌谱较广。

表2石蒜花提取物对几种真菌病原菌的抑菌率

其它未详细说明的部分均为现有技术。尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。