本发明属于杀虫剂技术领域，具体涉及一种防治害虫的生物源杀虫复配剂、制备方法及应用。
背景技术：
蔬菜是人们生活中必不可少的食品之一，其中含有人体所需的多种维生素和矿物质等营养物质，与人们的生活息息相关，蚜虫、粉虱类等是危害蔬菜生长最普遍的病虫害，严重时将影响蔬菜的生长，导致蔬菜大量减产。
现有用于防治蚜虫、粉虱类虫害的多为阿克泰、快杀灵、冲扫净、扫蚜清，但是，这些农药均为化学物质农药，化学农药不容易降解，容易造成蔬菜中农药残留时间较长，存在危害人身健康的风险。
研究发现，微生物或者微生物的代谢产物等具有抑菌杀虫的作用，其借助于微生物之间的拮抗作用，抑制某些微生物的生长。另外，昆虫体内存在着微生物的生态平衡，维持着昆虫的正常生命活动，如果借助微生物代谢产物对昆虫生理代谢活动的影响，阻碍这些虫类的代谢、繁殖，最终起到杀虫的作用，那么将可以有效预防害虫对蔬菜生长的影响。比如，授权公告号为101988043b、名称为《苏云金芽孢杆菌微生物杀虫剂及其制备方法与专用培养基》的专利中，描述了利用苏云金芽孢杆菌微生物制备而成的微生物杀虫剂。
然而，上述专利直接采用的是一种苏云金芽孢杆菌的发酵液，毒力为12530u/mg，仅达到国家农药标准水平，毒力相对较低，杀虫防效不够迅速，有待进一步改善。
技术实现要素：
本发明提供的一种防治害虫的生物源杀虫复配剂及其制备方法，杀虫毒力高，杀虫防效快，并且克服了化学农药残留时间长的问题。
本发明的目的是提供一种防治害虫的生物源杀虫复配剂，制备原料包括以下重量份的组分：苏云金芽孢杆菌发酵液40-60份、乳酸菌发酵液10-20份、新鲜三分三叶10-20份、新鲜樟树叶10-20份、吐温200.05-0.1份；
所述苏云金芽孢杆菌发酵液是将苏云金芽孢杆菌接种于鱼粉、熟黄豆、小麦秸秆粉和水的混合物中，28-32℃发酵35-48h后、静置、收集上层液体而得；
所述乳酸菌发酵液是将乳酸菌接种于小麦秸秆粉、玉米粉、氯化钠和水的混合物中，30-37℃发酵培养1-2d后、静置、收集上层液体而得。
优选的，上述防治害虫的生物源杀虫复配剂，制备原料包括以下重量份的组分：苏云金芽孢杆菌发酵液50份、乳酸菌发酵液15份、新鲜三分三叶15份、新鲜樟树叶15份、吐温200.05份。
本发明的另一个目的是提供一种防治害虫的生物源杀虫复配剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤1，制备苏云金芽孢杆菌发酵液
步骤1.1，活化苏云金芽孢杆菌菌种，并用牛肉膏蛋白胨液体培养基摇瓶培养，得到苏云金芽孢杆菌种子液；
步骤1.2，将黄豆于水中浸泡4-6h，沥干水分，然后蒸熟，冷却至30-40℃，得到熟黄豆；将小麦秸秆磨成粉，过60目筛，得到小麦秸秆粉；然后将鱼粉、熟黄豆、小麦秸秆粉和水按照1:1:2:90的质量比例混合均匀，得到发酵液基质；
步骤1.3，向发酵液基质中接种苏云金芽孢杆菌种子液，其中每千克发酵液基质接种苏云金芽孢杆菌种子液100-200ml，然后于28-32℃、搅拌转速220r/min条件下，发酵培养35-48h后，静置10-20min，收集上层液体得到苏云金芽孢杆菌发酵液；
步骤2，制备乳酸菌发酵液
步骤2.1，活化乳酸菌菌种，并将活化的乳酸菌接种于mrs液体培养基中，30-37℃条件下培养2-3d，得到乳酸菌种子液；
步骤2.2，将小麦秸秆磨成粉，过60目筛，得到小麦秸秆粉；将玉米磨成粉，过60目筛，得到玉米粉；然后将小麦秸秆粉、玉米粉、氯化钠和水按照10:10:3:90的质量比例混合均匀，得到乳酸菌发酵基质；
步骤2.3，向乳酸菌发酵基质中接种乳酸菌种子液，其中每千克乳酸菌发酵基质接种乳酸菌种子液100-200ml，然后于30-37℃、搅拌转速220r/min条件下，发酵培养1-2d后，静置10-20min，收集上层液体得到乳酸菌发酵液；
步骤3，制备复配剂
步骤3.1，按以下重量份称取各组分：苏云金芽孢杆菌发酵液40-60份、乳酸菌发酵液10-20份、新鲜三分三叶10-20份、新鲜樟树叶10-20份、吐温200.05-0.1份；
步骤3.2，将步骤3.1称取的新鲜三分三叶、新鲜樟树叶分别洗净，沥干水分、粉碎，然后混匀，得到原料混合物，将原料混合物和0.02mol/l的nahco3溶液按照1:5的质量比例混匀，浸泡2h，然后煮沸40-60min，过滤，收集得到植物滤液；
步骤3.3，将植物滤液和步骤3.1称取的苏云金芽孢杆菌发酵液、乳酸菌发酵液、吐温20充分混合均匀，得到粗溶液，最后于35-40℃条件下旋转蒸发，直至体积浓缩至粗溶液的1/100，得到防治害虫的生物源杀虫复配剂。
本发明还提供了利用上述生物源杀虫复配剂防治蔬菜蚜虫、粉虱虫害的应用。
与现有技术相比，本发明的防治害虫的生物源杀虫复配剂具有以下有益效果：
(1)选用的苏云金芽孢杆菌的选择性较强，对人畜并无伤害，属于安全性很高的生物杀虫源，乳酸菌属于益生菌，首次将其用于杀虫剂的制备，乳酸菌发酵液与苏云金芽孢杆菌发酵液混合使用，借助二者的协同作用，有效抑制杂菌的生长，使得复配剂贮藏过程中，不需要额外添加防腐剂，减少化学物质的使用，克服了化学农药残留时间长的问题。
(2)制备方法中，苏云金芽孢杆菌发酵时选用的培养基原料黄豆、小麦秸秆、鱼粉；乳酸菌发酵时选用的培养基原料小麦秸秆、玉米；在扩培微生物的同时，使用廉价的小麦秸秆粉，成本低，且做到了农作物废弃物的二次利用。
(3)我们发明的复配剂的毒力效价是普通苏云金芽孢杆菌杀虫悬浮剂制品的毒力效价的2倍左右，毒力较高，杀虫所需时间短。
具体实施方式
下面对发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或者按照各制造商所建议的条件。
当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。
下述实施例中使用的耐盐乳酸菌(tetragenococcushalophilus)(保藏号cgmcc3792)、双歧杆菌、苏云金芽孢杆菌8010(保藏号cgmcc1.1767)等微生物菌购自中国普通微生物菌种保藏管理中心，其中，苏云金芽孢杆菌8010与授权公告号为101988043b、名称为《苏云金芽孢杆菌微生物杀虫剂及其制备方法与专用培养基》记载的苏云金芽孢杆菌8010为相同菌株；鱼粉、玉米、黄豆等材料为市售，小麦秸秆为常规农田中小麦颗粒收获后残留的小麦秸秆。
实施例1
一种防治害虫的生物源杀虫复配剂，制备原料包括以下重量份的组分：苏云金芽孢杆菌发酵液50份、乳酸菌发酵液15份、新鲜三分三叶15份、新鲜樟树叶15份、吐温200.05份。所述苏云金芽孢杆菌为苏云金芽孢杆菌8010，所述乳酸菌为耐盐乳酸菌(tetragenococcushalophilus)，具体按照以下步骤制备：
步骤1，制备苏云金芽孢杆菌发酵液
步骤1.1，活化苏云金芽孢杆菌菌种，并用牛肉膏蛋白胨液体培养基摇瓶培养，得到苏云金芽孢杆菌种子液；摇瓶培养条件为温度30℃、转速220r/min、培养时间12h；
步骤1.2，将黄豆于水中浸泡5h，沥干水分，然后蒸熟，冷却至30-40℃，得到熟黄豆；将小麦秸秆磨成粉，过60目筛，得到小麦秸秆粉；然后将鱼粉、熟黄豆、小麦秸秆粉和水按照1:1:2:90的质量比例混合均匀，得到发酵液基质；
步骤1.3，向发酵液基质中接种苏云金芽孢杆菌种子液，其中每千克发酵液基质接种苏云金芽孢杆菌种子液150ml，然后于30℃、搅拌转速220r/min、通气量1:1l/(l·min)条件下，发酵培养48h后，静置20min，收集上层液体得到苏云金芽孢杆菌发酵液
步骤2，制备乳酸菌发酵液
步骤2.1，活化乳酸菌菌种，并将活化的乳酸菌接种于mrs液体培养基中，30℃条件下培养3d，得到乳酸菌种子液；
步骤2.2，将小麦秸秆磨成粉，过60目筛，得到小麦秸秆粉；将玉米磨成粉，过60目筛，得到玉米粉；然后将小麦秸秆粉、玉米粉、氯化钠和水按照10:10:3:90的质量比例混合均匀，得到乳酸菌发酵基质；
步骤2.3，向乳酸菌发酵基质中接种乳酸菌种子液，其中每千克乳酸菌发酵基质接种乳酸菌种子液150ml，然后于30℃、搅拌转速220r/min条件下，发酵培养1.5d后，静置20min，收集上层液体得到乳酸菌发酵液；
步骤3，制备复配剂
步骤3.1，按以下重量份称取各组分：苏云金芽孢杆菌发酵液50份、乳酸菌发酵液15份、新鲜三分三叶15份、新鲜樟树叶15份、吐温200.05份；
步骤3.2，将步骤3.1称取的新鲜三分三叶、新鲜樟树叶分别洗净，沥干水分、粉碎，然后混匀，得到原料混合物，将原料混合物和0.02mol/l的nahco3溶液按照1:5的质量比例混匀，浸泡2h，然后煮沸50min，过滤，收集得到植物滤液；
步骤3.3，将植物滤液和步骤3.1称取的苏云金芽孢杆菌发酵液、乳酸菌发酵液、吐温20充分混合均匀，得到粗溶液，最后于35℃条件下旋转蒸发，直至体积浓缩至粗溶液的1/100，得到防治害虫的生物源杀虫复配剂，0-4℃保存备，复合菌剂中的有效活菌数为108个/克。使用前将复配剂液稀释1000倍，每亩莴苣田喷施30kg的稀释液，喷药两个月内未见蚜虫、粉虱类病虫害。
实施例2
一种防治害虫的生物源杀虫复配剂，制备原料包括以下重量份的组分：苏云金芽孢杆菌发酵液40份、乳酸菌发酵液10份、新鲜三分三叶20份、新鲜樟树叶20份、吐温200.07份。所述苏云金芽孢杆菌为苏云金芽孢杆菌8010，所述乳酸菌为双歧杆菌，具体按照以下步骤制备：
步骤1，制备苏云金芽孢杆菌发酵液
步骤1.1，活化苏云金芽孢杆菌菌种，并用牛肉膏蛋白胨液体培养基摇瓶培养，得到苏云金芽孢杆菌种子液；
步骤1.2，将黄豆于水中浸泡6h，沥干水分，然后蒸熟，冷却至30-40℃，得到熟黄豆；将小麦秸秆磨成粉，过60目筛，得到小麦秸秆粉；然后将鱼粉、熟黄豆、小麦秸秆粉和水按照1:1:2:90的质量比例混合均匀，得到发酵液基质；
步骤1.3，向发酵液基质中接种苏云金芽孢杆菌种子液，其中每千克发酵液基质接种苏云金芽孢杆菌种子液200ml，然后于32℃、搅拌转速220r/min条件下，发酵培养35h后，静置20min，收集上层液体得到苏云金芽孢杆菌发酵液；
步骤2，制备乳酸菌发酵液
步骤2.1，活化乳酸菌菌种，并将活化的乳酸菌接种于mrs液体培养基中，37℃条件下培养2d，得到乳酸菌种子液；
步骤2.2，将小麦秸秆磨成粉，过60目筛，得到小麦秸秆粉；将玉米磨成粉，过60目筛，得到玉米粉；然后将小麦秸秆粉、玉米粉、氯化钠和水按照10:10:3:90的质量比例混合均匀，得到乳酸菌发酵基质；
步骤2.3，向乳酸菌发酵基质中接种乳酸菌种子液，其中每千克乳酸菌发酵基质接种乳酸菌种子液200ml，然后于37℃、搅拌转速220r/min条件下，发酵培养2d后，静置15min，收集上层液体得到乳酸菌发酵液；
步骤3，制备复配剂
步骤3.1，按以下重量份称取各组分：苏云金芽孢杆菌发酵液40份、乳酸菌发酵液10份、新鲜三分三叶20份、新鲜樟树叶20份、吐温200.07份；
步骤3.2，将步骤3.1称取的新鲜三分三叶、新鲜樟树叶分别洗净，沥干水分、粉碎，然后混匀，得到原料混合物，将原料混合物和0.02mol/l的nahco3溶液按照1:5的质量比例混匀，浸泡2h，然后煮沸50min，过滤，收集得到植物滤液；
步骤3.3，将植物滤液和步骤3.1称取的苏云金芽孢杆菌发酵液、乳酸菌发酵液、吐温20充分混合均匀，得到粗溶液，最后于35℃条件下旋转蒸发，直至体积浓缩至粗溶液的1/100，得到防治害虫的生物源杀虫复配剂，0-4℃保存备，复合菌剂中的有效活菌数为108个/克。
使用前将复配剂液稀释2000倍，每亩花椰菜田喷施50kg的稀释液，喷药两个月内未见蚜虫、小菜蛾等病虫害。
实施例3
一种防治害虫的生物源杀虫复配剂，制备原料包括以下重量份的组分：苏云金芽孢杆菌发酵液60份、乳酸菌发酵液20份、新鲜三分三叶10份、新鲜樟树叶10份、吐温200.1份。所述苏云金芽孢杆菌为苏云金芽孢杆菌8010，所述乳酸菌为耐盐乳酸菌(tetragenococcushalophilus)，制备方法同实施例1，区别仅在于配方不同。使用前将复配剂液稀释2000倍，每亩花椰菜田喷施50kg的稀释液，喷药两个月内未见蚜虫、小菜蛾等病虫害。
实施例4
一种防治害虫的生物源杀虫复配剂，制备原料包括以下重量份的组分：苏云金芽孢杆菌发酵液55份、乳酸菌发酵液13份、新鲜三分三叶13份、新鲜樟树叶13份、吐温200.1份。所述苏云金芽孢杆菌为苏云金芽孢杆菌8010，所述乳酸菌为耐盐乳酸菌(tetragenococcushalophilus)，制备方法同实施例1，区别仅在于配方不同。使用前将复配剂液稀释2000倍，每亩花椰菜田喷施50kg的稀释液，喷药两个月内未见蚜虫、小菜蛾等病虫害。
实施例5
一种防治害虫的生物源杀虫复配剂，制备原料包括以下重量份的组分：苏云金芽孢杆菌发酵液45份、乳酸菌发酵液18份、新鲜三分三叶18份、新鲜樟树叶18份、吐温200.08份。所述苏云金芽孢杆菌为苏云金芽孢杆菌8010，所述乳酸菌为双歧杆菌，制备方法同实施例2，区别仅在于配方不同。使用前将复配剂液稀释2000倍，每亩花椰菜田喷施50kg的稀释液，喷药两个月内未见蚜虫、小菜蛾等病虫害。
实施例6
一种防治害虫的生物源杀虫复配剂，制备原料包括以下重量份的组分：苏云金芽孢杆菌发酵液55份、乳酸菌发酵液16份、新鲜三分三叶16份、新鲜樟树叶12份、吐温200.09份。所述苏云金芽孢杆菌为苏云金芽孢杆菌8010，所述乳酸菌为双歧杆菌，制备方法同实施例2，区别仅在于配方不同。使用前将复配剂液稀释2000倍，每亩花椰菜田喷施50kg的稀释液，喷药两个月内未见蚜虫、小菜蛾等病虫害。
下面我们提供一些数据，以说明本发明生物源杀虫复配剂的效果。
一、毒效检测
根据国家标准gb/t19567.2-2004对实施例1-6生物源杀虫复配剂毒效进行测定，以小菜蛾为标准供试昆虫，以湖北省农业科学院生物农药工程中心提供的cs-1991(h3a3b)标准品对照，标准品对照的毒力效价为55000iu/μl。结果显示，实施例1-6生物源杀虫复配剂效价分别为6235iu/μl、5148iu/μl、61845iu/μl、5863iu/μl、5997iu/μl、5689iu/μl，说明将实施例1-6的生物源杀虫复配剂毒力效价已经达到国家二级标准以上，毒力较高，杀虫所需时间短。而普通苏云金芽孢杆菌杀虫悬浮剂制品的毒力效价仅在3000iu/μl左右。
我们将实施例1的生物源杀虫复配剂别在4℃、15℃、25℃、40℃、50℃条件下贮藏1个月，然后利用上述方法检测毒力效价，4℃、15℃、25℃、40℃、50℃条件贮藏的毒力效价分别为6205iu/μl、5148iu/μl、4845iu/μl、3863iu/μl、24997iu/μl，说明生物源杀虫复配剂在25℃以内仍能保持良好的毒力。
二、降解实验
为了验证本发明生物源杀虫复配剂的容易降解，我们将实施例1的生物源杀虫复配剂，然后于室温下分别放置1个月、2个月、3个月、4个月，然后分别取1ml的放置液喂食蚜虫，观察蚜虫的健康状况，结果发现，喂食放置了1、2个月的生物源杀虫复配剂后，蚜虫的致死时间延长了3h，喂食放置了3、4个月的生物源杀虫复配剂后，蚜虫健康状况下降，但并未致死，室温条件贮藏4个月后，生物源杀虫复配剂的毒力效价从6205iu/μl下降至1000iu/μl，逐渐减弱；说明生物源杀虫复配剂中的有毒物质可以在较短的时间内降解，不会造成蔬菜中农药残留时间较长的问题，保障了人类的生命健康。
然后于4℃下分别放置1个月、2个月、3个月、4个月，然后分别取1ml的放置液喂食蚜虫，观察蚜虫的健康状况，结果发现，喂食放置了1、2、3、4个月的生物源杀虫复配剂后，蚜虫的致死时间均不变，低温条件贮藏4个月后，生物源杀虫复配剂的毒力效价从6205iu/μl下降至5423iu/μl，仍然具有较高的毒力效价。
另外，我们观察室温、4℃下分别放置1个月、2个月、3个月、4个月、5个月的生物源杀虫复配剂，发现其并未腐败、不存在霉菌感染的现象，保藏时不需要额外添加防腐剂，减少化学物质的使用。
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。