本发明涉及植物工程
技术领域：
，尤其是涉及一种杂交种试管苗的炼苗及移栽方法。
背景技术：
：通常将植物分类学上不同种、属或亲缘关系更远的物种间进行的杂交称作远缘杂交。作为一种育种手段，远缘杂交打破了物种间的界限，人为地促进了不同物种间遗传物质的交换和结合，把不同生物类型各自所具有的独特性状，不同程度地结合于共同的杂种个体中，从而创造出新的品种。因此在植物遗传与育种研究中发挥重要作用，受到遗传及育种专家的长期重视。它在育种方面的应用主要包括，新物种的人工创造、提高品种的抗逆性、创造异染色体体系、培育雄性不育系以及研究生物的进化及亲缘关系等。以三叶草属牧草为例，三叶草属牧草具有品质优良、营养丰富、固氮能力强等多种优点，尤以具有强抗逆性的六倍体高加索三叶草品种，和具有强固氮能力的四倍体大兴安岭野生白三叶为例，为了培育出结合双亲优良性状的三叶草新品种，希望以高加索三叶草为母本，以白三叶为父本进行杂交。但是，远缘杂交中物种的亲缘关系较远，雌雄配子不亲和，因此，人工杂交难以成功，杂种易夭亡或败育且分离范围广、耗时长、中间类型不稳定。其中，以高加索三叶草为母本，以白三叶为父本进行杂交，杂种成活率很低，远不能满足育种进程的需求。用组织培养技术进行植物快速无性繁殖的方法简称为试管繁殖(propagationbytissueculture)，也称微体繁殖或微型繁殖。繁殖的植株称试管苗，以此与种子苗(实生苗)、扦插苗、嫁接苗相区别。以三叶草属牧草为例，通过组织培养可以短时间获得大量杂交种三叶草组培苗。试管苗的移植需要从“异养”到“自养”的转变过程，由于培养容器内的环境与外部环境差异较大，移植前试管苗要进行炼苗，使小植株逐渐适应外界环境条件并健壮生长，这种“炼苗”方法可以有效提高移植成活率。移植后的小苗管理，必须注意控制土壤湿度，掌握光照强度。炼苗，适时移栽，保温、保湿以及适度的光照是保证该阶段顺利通过的主要因素。目前，杂交种试管苗的炼苗和移栽方法，使试管苗的成活率还停留在较低水平，浪费时间和劳动力，因此，亟需一种可以提高杂交种试管苗炼苗和移栽成活率的方法。有鉴于此，特提出本发明。技术实现要素：本发明的第一个目的在于提供一种杂交种试管苗的炼苗方法，以缓解现有技术中存在的杂交种试管苗炼苗成活率低的技术问题。本发明的第二个目的在于提供一种杂交种试管苗的移栽方法，以缓解现有技术中存在的杂交种试管苗移栽成活率低的技术问题。本发明提供的一种杂交种试管苗的炼苗方法包括：在无菌培养容器中，培养杂交种试管苗，至所述试管苗生长至4－6cm高且至少具有3条不定根时，打破培养容器的无菌环境，所述试管苗继续生长至所述培养容器内培养基表面出现浑浊，炼苗结束。进一步地，所述培养容器置于培养室中，所述培养室内的温度为25－28℃，湿度为80％－95％，所述培养室内的光周期为10－13h/d，所述培养室内的光照强度为18000－22000μmol/m2·s。进一步地，所述培养室内的温度为：光照期27－28℃，暗期25－26℃，湿度为90％，所述培养室内的光周期为12h/d，所述培养室内的光照强度为20000μmol/m2·s。进一步地，所述杂交种试管苗为高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗。另外，本发明还提供了一种杂交种试管苗的移栽方法，所述移栽方法应用于上述的杂交种试管苗。进一步地，所述移栽方法包括：将杂交种试管苗连同培养基整体从培养容器内取出，用清水将根部的培养基清洗干净，栽种于灭菌后的生长基质中，完成所述移栽。进一步地，所述生长基质为体积比为1：2－2：1的沙土和珍珠岩。进一步地，所述生长基质为体积比为1：1的沙土和珍珠岩。进一步地，所述生长基质置于培养室中，所述培养室内的条件为：移栽后1－10天：温度为光照期26－28℃，暗期25－26℃，湿度为90％－95％，光周期为10－13h/d，光照强度为18000－20000μmol/m2·s；移栽后11－20天：温度为光照期28－30℃，暗期23－25℃，湿度为85％－90％，光周期为10－13h/d，光照强度为20000－22000μmol/m2·s；移栽后21－30天：温度为光照期30－32℃，暗期21－23℃，湿度为80％－85％，光周期为10－13h/d，光照强度为22000－24000μmol/m2·s。进一步地，所述培养室内的条件为：移栽后1－10天：温度为光照期27℃，暗期26℃，湿度为90％－95％，光周期为12h/d，光照强度为19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：温度为光照期29℃，暗期24℃，湿度为85％－90％，光周期为12h/d，光照强度为21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：温度为光照期31℃，暗期22℃，湿度为80％－85％，光周期为12h/d，光照强度为23000μmol/m2·s。本发明提供的杂交种试管苗的炼苗方法和移栽方法，能够有效提高杂交种试管苗的成活率，节约了时间成本和劳动力成本。具体实施方式下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本发明提供了一种杂交种试管苗的炼苗方法，包括：在无菌培养容器中，培养杂交种试管苗，至所述试管苗生长至4－6cm高且至少具有3条不定根时，打破培养容器的无菌环境，所述试管苗继续生长至所述培养容器内培养基表面出现浑浊，炼苗结束。其中，选取的杂交种试管苗例如可以为，但不限于4cm，4.5cm，5cm，5.5cm或6cm高。选取的杂交种试管苗所具有的不定根至少为3条，例如可以为，但不限于3条，4条，5条，6条，7条或8条，且长度大于2cm。培养容器可以为试管或三角瓶。无菌的培养容器，可以在培养容器开口处放置与培养容器口大小相匹配的盖或塞，或者套设封口膜。打破培养容器的无菌环境，是使培养容器内的无菌环境变为有菌环境，可以将培养容器开口处的盖或塞去除，或者将封口膜扎破。在一个优选的实施方式中，无菌的培养容器为在培养容器口套设封口膜，破坏培养容器的无菌性为将封口膜扎破，培养基表面出现浑浊，说明培养基开始染菌，杂交种试管苗在培养容器中，从完全无菌的环境变为有菌环境，逐步加强对外界环境的适应能力。在本发明中，培养容器置于培养室中，培养室内的温度为25－28℃，湿度为80％－95％，所述培养室内的光周期为10－13h/d，所述培养室内的光照强度为18000－22000μmol/m2·s。其中，培养室内的温度可以为，但不限于25℃，25.5℃，26℃，26.5℃，27℃，27.5℃或28℃。在一个优选的实施方式中，培养室内的温度为：光照期27－28℃，暗期25－26℃；其中，光照期的温度可以为，但不限于27℃，27.5℃或28℃；暗期的温度可以为，但不限于25℃，25.5℃或26℃。在光照期和暗期给予不同的温度，能更好地模拟自然环境下昼夜温度的变化，使杂交种试管苗在经过本发明提供的炼苗方法炼苗之后，加强对外界环境的适应能力。湿度可以为，但不限于80％，82％，84％，85％，86％，88％，90％，92％，94％或95％。在一个优选的实施方式中，随着炼苗时间的增加，可以逐渐降低培养室内的湿度，以使杂交种试管苗逐渐适应干燥的内部环境。光周期可以为，但不限于10h/d，11h/d，12h/d或13h/d。光照强度可以为，但不限于18000μmol/m2·s，19000μmol/m2·s，20000μmol/m2·s，21000μmol/m2·s或22000μmol/m2·s。在一个优选的实施方式中，随着炼苗时间的增加，可以逐渐增强培养室内的光照强度，以使杂交种试管苗加强对外界环境的适应能力。在本发明中，杂交种试管苗为高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗。六倍体高加索三叶草品种是新西兰引进种，在内蒙古赤峰市和呼和浩特市成功建植，其抗旱、抗寒能力很强，也有一定的耐盐能力，不论作为栽培品种还是补播种都具有良好的应用前景。但其固氮所需的根瘤菌特化，与其他三叶草种的根瘤菌不能互接，在高加索以外地区不能结瘤固氮。另外，相对于其他三叶草种，高加索三叶草在种植的第一年生长发育非常缓慢，这也是制约其推广种植的因素之一。本发明选用的白三叶来自大兴安岭地区，具有产量高，固氮能力强的特点，但其根系浅，喜湿，在内蒙古其他地区种植时或不能越冬，或由于气候干燥而成片死亡。为了结合二者的优良性状，以高加索三叶草为母本，以白三叶为父本进行杂交。另外，本发明还提供了一种杂交种试管苗的移栽方法，应用于上述的杂交种试管苗。将利用上述炼苗方法进行炼苗之后的杂交种试管苗，应用此杂交种试管苗的移栽方法进行移栽。在本发明中，移栽方法包括：将杂交种试管苗连同培养基整体从培养容器内取出，用清水将根部的培养基清洗干净，栽种于灭菌后的生长基质中，完成移栽。其中，进行移栽的杂交种试管苗为生长状态良好，且无破损的健康试管苗。用于清洗根部培养基的清水的温度为25－28℃，例如可以为，但不限于25℃，26℃，27℃或28℃。对生长基质进行灭菌的方法为物理灭菌法或化学灭菌法，其中，物理灭菌法可以为高温蒸汽灭菌或紫外线照射灭菌，化学灭菌法为应用杀菌剂进行灭菌，如0.2％的高锰酸钾，75％的乙醇等。在本发明中，生长基质为体积比为1：2－2：1的沙土和珍珠岩。沙土和珍珠岩的体积比例如可以为，但不限于1：1，1：2或2：1。以沙土和珍珠岩为基质进行移栽，既能够保持水分，又能够保证基质的透气性，防止杂交种试管苗烂根。在本发明中，生长基质置于培养室中，移栽时培养室内的条件为：移栽后1－10天：温度为光照期26－28℃，暗期25－26℃，湿度为90％－95％，光周期为10－13h/d，光照强度为18000－20000μmol/m2·s；其中，光照期的温度可以为，但不限于26℃，27℃或28℃；暗期的温度可以为，但不限于25℃或26℃；湿度可以为，但不限于90％，91％，92％，93％，94％或95％；光周期可以为，但不限于10h/d，11h/d，12h/d或13h/d；光照强度可以为，但不限于18000μmol/m2·s，19000μmol/m2·s或20000μmol/m2·s；移栽后11－20天：温度为光照期28－30℃，暗期23－25℃，湿度为85％－90％，光周期为10－13h/d，光照强度为20000－22000μmol/m2·s；其中，光照期的温度可以为，但不限于28℃，29℃或30℃；暗期的温度可以为，但不限于23℃，24℃或25℃；湿度可以为，但不限于85％，86％，87％，88％，89％或90％；光周期可以为，但不限于10h/d，11h/d，12h/d或13h/d；光照强度可以为，但不限于20000μmol/m2·s，21000μmol/m2·s或22000μmol/m2·s；移栽后21－30天：温度为光照期30－32℃，暗期21－23℃，湿度为80％－85％，光周期为10－13h/d，光照强度为22000－24000μmol/m2·s；其中，光照期的温度可以为，但不限于30℃，31℃或32℃；暗期的温度可以为，但不限于21℃，22℃或23℃；湿度可以为，但不限于80％，81％，82％，83％，84％或85％；光周期可以为，但不限于10h/d，11h/d，12h/d或13h/d；光照强度可以为，但不限于22000μmol/m2·s，23000μmol/m2·s或24000μmol/m2·s。在光照期和暗期给予不同的温度，能更好地模拟自然环境下昼夜温度的变化，使杂交种试管苗在经过本发明提供的移栽方法移栽之后，加强对外界环境的适应能力。随着移栽后时间的增加，可以逐渐降低培养室内的湿度，以使杂交种试管苗逐渐适应干燥的内部环境。并且，随着移栽后时间的增加，可以逐渐增强培养室内的光照强度，以使杂交种试管苗加强对外界环境的适应能力。本发明提供的杂交种试管苗的炼苗方法和移栽方法，能够有效提高杂交种试管苗的成活率，节约了时间成本和劳动力成本。下面将结合实施例1－18和对比例1－9对本发明的技术方案进行进一步地说明。实施例1杂交种试管苗的炼苗方法选取三角瓶中生长至4－6cm高，且至少具有3条长度在2cm以上的不定根的，高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，将三角瓶的封口膜扎破，在培养室中继续培养，至三角瓶内培养基表面出现浑浊。其中，保持培养室内的温度为：光照期28℃，暗期26℃，湿度为90％，培养室内的光周期为12h/d，培养室内的光照强度为20000μmol/m2·s。实施例2杂交种试管苗的炼苗方法选取三角瓶中生长至4－6cm高，且至少具有3条长度在2cm以上的不定根的，高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，将三角瓶的封口膜扎破，在培养室中继续培养，至三角瓶内培养基表面出现浑浊。其中，保持培养室内的温度为：光照期27℃，暗期25℃，湿度为90％，培养室内的光周期为12h/d，培养室内的光照强度为20000μmol/m2·s。实施例3杂交种试管苗的炼苗方法选取三角瓶中生长至4－6cm高，且至少具有3条长度在2cm以上的不定根的，高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，将三角瓶的封口膜扎破，在培养室中继续培养，至三角瓶内培养基表面出现浑浊。其中，保持培养室内的温度为：光照期28℃，暗期26℃，湿度为80％，培养室内的光周期为12h/d，培养室内的光照强度为20000μmol/m2·s。实施例4杂交种试管苗的炼苗方法选取三角瓶中生长至4－6cm高，且至少具有3条长度在2cm以上的不定根的，高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，将三角瓶的封口膜扎破，在培养室中继续培养，至三角瓶内培养基表面出现浑浊。其中，保持培养室内的温度为：光照期28℃，暗期26℃，湿度为95％，培养室内的光周期为12h/d，培养室内的光照强度为20000μmol/m2·s。实施例5杂交种试管苗的炼苗方法选取三角瓶中生长至4－6cm高，且至少具有3条长度在2cm以上的不定根的，高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，将三角瓶的封口膜扎破，在培养室中继续培养，至三角瓶内培养基表面出现浑浊。其中，保持培养室内的温度为：光照期28℃，暗期26℃，湿度为90％，培养室内的光周期为10h/d，培养室内的光照强度为20000μmol/m2·s。实施例6杂交种试管苗的炼苗方法选取三角瓶中生长至4－6cm高，且至少具有3条长度在2cm以上的不定根的，高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，将三角瓶的封口膜扎破，在培养室中继续培养，至三角瓶内培养基表面出现浑浊。其中，保持培养室内的温度为：光照期28℃，暗期26℃，湿度为90％，培养室内的光周期为11h/d，培养室内的光照强度为20000μmol/m2·s。实施例7杂交种试管苗的炼苗方法选取三角瓶中生长至4－6cm高，且至少具有3条长度在2cm以上的不定根的，高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，将三角瓶的封口膜扎破，在培养室中继续培养，至三角瓶内培养基表面出现浑浊。其中，保持培养室内的温度为：光照期28℃，暗期26℃，湿度为90％，培养室内的光周期为13h/d，培养室内的光照强度为20000μmol/m2·s。实施例8杂交种试管苗的炼苗方法选取三角瓶中生长至4－6cm高，且至少具有3条长度在2cm以上的不定根的，高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，将三角瓶的封口膜扎破，在培养室中继续培养，至三角瓶内培养基表面出现浑浊。其中，保持培养室内的温度为：光照期28℃，暗期26℃，湿度为90％，培养室内的光周期为12h/d，培养室内的光照强度为18000μmol/m2·s。实施例9杂交种试管苗的炼苗方法选取三角瓶中生长至4－6cm高，且至少具有3条长度在2cm以上的不定根的，高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，将三角瓶的封口膜扎破，在培养室中继续培养，至三角瓶内培养基表面出现浑浊。其中，保持培养室内的温度为：光照期28℃，暗期26℃，湿度为90％，培养室内的光周期为12h/d，培养室内的光照强度为22000μmol/m2·s。对比例1杂交种试管苗的炼苗方法选取三角瓶中生长至4－6cm高，且至少具有3条长度在2cm以上的不定根的，高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，将三角瓶的封口膜扎破，在培养室中继续培养，至三角瓶内培养基表面出现浑浊。其中，保持培养室内的温度为：光照期30℃，暗期23℃，湿度为90％，培养室内的光周期为12h/d，培养室内的光照强度为20000μmol/m2·s。对比例2杂交种试管苗的炼苗方法选取三角瓶中生长至4－6cm高，且至少具有3条长度在2cm以上的不定根的，高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，将三角瓶的封口膜扎破，在培养室中继续培养，至三角瓶内培养基表面出现浑浊。其中，保持培养室内的温度为：光照期28℃，暗期26℃，湿度为70％，培养室内的光周期为12h/d，培养室内的光照强度为20000μmol/m2·s。对比例3杂交种试管苗的炼苗方法选取三角瓶中生长至4－6cm高，且至少具有3条长度在2cm以上的不定根的，高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，将三角瓶的封口膜扎破，在培养室中继续培养，至三角瓶内培养基表面出现浑浊。其中，保持培养室内的温度为：光照期28℃，暗期26℃，湿度为90％，培养室内的光周期为15h/d，培养室内的光照强度为20000μmol/m2·s。对比例4杂交种试管苗的炼苗方法选取三角瓶中生长至4－6cm高，且至少具有3条长度在2cm以上的不定根的，高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，将三角瓶的封口膜扎破，在培养室中继续培养，至三角瓶内培养基表面出现浑浊。其中，保持培养室内的温度为：光照期28℃，暗期26℃，湿度为90％，培养室内的光周期为12h/d，培养室内的光照强度为25000μmol/m2·s。实施例10杂交种试管苗的移栽方法将经过炼苗的高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，连同培养基整体从培养容器内取出，用26℃的清水将根部的培养基清洗干净，栽种于高温蒸汽灭菌后的生长基质中，在培养室中继续培养。其中，生长基质为体积比为1：1的沙土和珍珠岩。移栽后1－10天：温度为光照期27℃，暗期26℃，湿度为90％－95％，光周期为12h/d，光照强度为19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：温度为光照期29℃，暗期24℃，湿度为85％－90％，光周期为12h/d，光照强度为21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：温度为光照期31℃，暗期22℃，湿度为80％－85％，光周期为12h/d，光照强度为23000μmol/m2·s。实施例11杂交种试管苗的移栽方法将经过炼苗的高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，连同培养基整体从培养容器内取出，用26℃的清水将根部的培养基清洗干净，栽种于高温蒸汽灭菌后的生长基质中，在培养室中继续培养。其中，生长基质为体积比为1：2的沙土和珍珠岩。移栽后1－10天：温度为光照期27℃，暗期26℃，湿度为90％－95％，光周期为12h/d，光照强度为19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：温度为光照期29℃，暗期24℃，湿度为85％－90％，光周期为12h/d，光照强度为21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：温度为光照期31℃，暗期22℃，湿度为80％－85％，光周期为12h/d，光照强度为23000μmol/m2·s。实施例12杂交种试管苗的移栽方法将经过炼苗的高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，连同培养基整体从培养容器内取出，用26℃的清水将根部的培养基清洗干净，栽种于高温蒸汽灭菌后的生长基质中，在培养室中继续培养。其中，生长基质为体积比为2：1的沙土和珍珠岩。移栽后1－10天：温度为光照期27℃，暗期26℃，湿度为90％－95％，光周期为12h/d，光照强度为19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：温度为光照期29℃，暗期24℃，湿度为85％－90％，光周期为12h/d，光照强度为21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：温度为光照期31℃，暗期22℃，湿度为80％－85％，光周期为12h/d，光照强度为23000μmol/m2·s。实施例13杂交种试管苗的移栽方法将经过炼苗的高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，连同培养基整体从培养容器内取出，用26℃的清水将根部的培养基清洗干净，栽种于高温蒸汽灭菌后的生长基质中，在培养室中继续培养。其中，生长基质为体积比为1：1的沙土和珍珠岩。移栽后1－10天：温度为光照期26℃，暗期25℃，湿度为90％－95％，光周期为12h/d，光照强度为19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：温度为光照期28℃，暗期23℃，湿度为85％－90％，光周期为12h/d，光照强度为21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：温度为光照期30℃，暗期21℃，湿度为80％－85％，光周期为12h/d，光照强度为23000μmol/m2·s。实施例14杂交种试管苗的移栽方法将经过炼苗的高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，连同培养基整体从培养容器内取出，用26℃的清水将根部的培养基清洗干净，栽种于高温蒸汽灭菌后的生长基质中，在培养室中继续培养。其中，生长基质为体积比为1：1的沙土和珍珠岩。移栽后1－10天：温度为光照期28℃，暗期26℃，湿度为90％－95％，光周期为12h/d，光照强度为19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：温度为光照期30℃，暗期25℃，湿度为85％－90％，光周期为12h/d，光照强度为21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：温度为光照期32℃，暗期23℃，湿度为80％－85％，光周期为12h/d，光照强度为23000μmol/m2·s。实施例15杂交种试管苗的移栽方法将经过炼苗的高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，连同培养基整体从培养容器内取出，用26℃的清水将根部的培养基清洗干净，栽种于高温蒸汽灭菌后的生长基质中，在培养室中继续培养。其中，生长基质为体积比为1：1的沙土和珍珠岩。移栽后1－10天：温度为光照期27℃，暗期26℃，湿度为90％－95％，光周期为10h/d，光照强度为19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：温度为光照期29℃，暗期24℃，湿度为85％－90％，光周期为10h/d，光照强度为21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：温度为光照期31℃，暗期22℃，湿度为80％－85％，光周期为10h/d，光照强度为23000μmol/m2·s。实施例16杂交种试管苗的移栽方法将经过炼苗的高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，连同培养基整体从培养容器内取出，用26℃的清水将根部的培养基清洗干净，栽种于高温蒸汽灭菌后的生长基质中，在培养室中继续培养。其中，生长基质为体积比为1：1的沙土和珍珠岩。移栽后1－10天：温度为光照期27℃，暗期26℃，湿度为90％－95％，光周期为13h/d，光照强度为19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：温度为光照期29℃，暗期24℃，湿度为85％－90％，光周期为13h/d，光照强度为21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：温度为光照期31℃，暗期22℃，湿度为80％－85％，光周期为13h/d，光照强度为23000μmol/m2·s。实施例17杂交种试管苗的移栽方法将经过炼苗的高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，连同培养基整体从培养容器内取出，用26℃的清水将根部的培养基清洗干净，栽种于高温蒸汽灭菌后的生长基质中，在培养室中继续培养。其中，生长基质为体积比为1：1的沙土和珍珠岩。移栽后1－10天：温度为光照期27℃，暗期26℃，湿度为90％－95％，光周期为12h/d，光照强度为18000μmol/m2·s；移栽后11－20天：温度为光照期29℃，暗期24℃，湿度为85％－90％，光周期为12h/d，光照强度为20000μmol/m2·s；移栽后21－30天：温度为光照期31℃，暗期22℃，湿度为80％－85％，光周期为12h/d，光照强度为22000μmol/m2·s。实施例18杂交种试管苗的移栽方法将经过炼苗的高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，连同培养基整体从培养容器内取出，用26℃的清水将根部的培养基清洗干净，栽种于高温蒸汽灭菌后的生长基质中，在培养室中继续培养。其中，生长基质为体积比为1：1的沙土和珍珠岩。移栽后1－10天：温度为光照期27℃，暗期26℃，湿度为90％－95％，光周期为12h/d，光照强度为20000μmol/m2·s；移栽后11－20天：温度为光照期29℃，暗期24℃，湿度为85％－90％，光周期为12h/d，光照强度为22000μmol/m2·s；移栽后21－30天：温度为光照期31℃，暗期22℃，湿度为80％－85％，光周期为12h/d，光照强度为24000μmol/m2·s。对比例5杂交种试管苗的移栽方法将经过炼苗的高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，连同培养基整体从培养容器内取出，用26℃的清水将根部的培养基清洗干净，栽种于高温蒸汽灭菌后的生长基质中，在培养室中继续培养。其中，生长基质为体积比为1：3的沙土和珍珠岩。移栽后1－10天：温度为光照期27℃，暗期26℃，湿度为90％－95％，光周期为12h/d，光照强度为19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：温度为光照期29℃，暗期24℃，湿度为85％－90％，光周期为12h/d，光照强度为21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：温度为光照期31℃，暗期22℃，湿度为80％－85％，光周期为12h/d，光照强度为23000μmol/m2·s。对比例6杂交种试管苗的移栽方法将经过炼苗的高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，连同培养基整体从培养容器内取出，用26℃的清水将根部的培养基清洗干净，栽种于高温蒸汽灭菌后的生长基质中，在培养室中继续培养。其中，生长基质为体积比为1：1：1的草炭土，蛭石和珍珠岩。移栽后1－10天：温度为光照期27℃，暗期26℃，湿度为90％－95％，光周期为12h/d，光照强度为19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：温度为光照期29℃，暗期24℃，湿度为85％－90％，光周期为12h/d，光照强度为21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：温度为光照期31℃，暗期22℃，湿度为80％－85％，光周期为12h/d，光照强度为23000μmol/m2·s。对比例7杂交种试管苗的移栽方法将经过炼苗的高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，连同培养基整体从培养容器内取出，用26℃的清水将根部的培养基清洗干净，栽种于高温蒸汽灭菌后的生长基质中，在培养室中继续培养。其中，生长基质为体积比为1：1的沙土和珍珠岩。移栽后1－10天：温度为光照期30℃，暗期23℃，湿度为90％－95％，光周期为12h/d，光照强度为19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：温度为光照期32℃，暗期21℃，湿度为85％－90％，光周期为12h/d，光照强度为21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：温度为光照期34℃，暗期19℃，湿度为80％－85％，光周期为12h/d，光照强度为23000μmol/m2·s。对比例8杂交种试管苗的移栽方法将经过炼苗的高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，连同培养基整体从培养容器内取出，用26℃的清水将根部的培养基清洗干净，栽种于高温蒸汽灭菌后的生长基质中，在培养室中继续培养。其中，生长基质为体积比为1：1的沙土和珍珠岩。移栽后1－10天：温度为光照期27℃，暗期26℃，湿度为90％－95％，光周期为15h/d，光照强度为19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：温度为光照期29℃，暗期24℃，湿度为85％－90％，光周期为15h/d，光照强度为21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：温度为光照期31℃，暗期22℃，湿度为80％－85％，光周期为15h/d，光照强度为23000μmol/m2·s。对比例9杂交种试管苗的移栽方法将经过炼苗的高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，连同培养基整体从培养容器内取出，用26℃的清水将根部的培养基清洗干净，栽种于高温蒸汽灭菌后的生长基质中，在培养室中继续培养。其中，生长基质为体积比为1：1的沙土和珍珠岩。移栽后1－10天：温度为光照期27℃，暗期26℃，湿度为90％－95％，光周期为12h/d，光照强度为22000μmol/m2·s；移栽后11－20天：温度为光照期29℃，暗期24℃，湿度为85％－90％，光周期为12h/d，光照强度为24000μmol/m2·s；移栽后21－30天：温度为光照期31℃，暗期22℃，湿度为80％－85％，光周期为12h/d，光照强度为26000μmol/m2·s。为了筛选能够使杂交种试管苗成活率最高的炼苗及移栽方法的组合，将经过上述实施例1－9和对比例1－4的炼苗方法进行炼苗的杂交种试管苗，应用实施例10－18和对比例5－9的移栽方法进行移栽，进行正交试验，实验分组设计见表1(表1中实施例简称为实，对比例简称为对)。表1实1实2实3实4实5实6实7实8实9对1对2对3对4实1012345678910111213实1114151617181920212223242526实1227282930313233343536373839实1340414243444546474849505152实1453545556575859606162636465实1566676869707172737475767778实1679808182838485868788899091实179293949596979899100101102103104实1810106107108109110111112113114115116117对5118119120121122123124125126127128129130对6131132133134135136137138139140141142143对7144145146147148149150151152153154155156对8157158159160161162163164165166167168169对9170171172173174175176177178179180181182上述各组每组随机选取15株杂交种试管苗，在进行相应的炼苗及移栽之后，统计试管苗成活率。根据实验结果显示，1组杂交种试管苗的成活率最高，为93.33％，即，选取三角瓶中生长至4－6cm高，且至少具有3条长度在2cm以上的不定根的，高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，将三角瓶的封口膜扎破，在培养室中继续培养，至三角瓶内培养基表面出现浑浊。其中，保持培养室内的温度为：光照期28℃，暗期26℃，湿度为90％，培养室内的光周期为12h/d，培养室内的光照强度为20000μmol/m2·s。将经过炼苗的高加索三叶草与白三叶杂交f1代的试管苗，连同培养基整体从培养容器内取出，用26℃的清水将根部的培养基清洗干净，栽种于高温蒸汽灭菌后的生长基质中，在培养室中继续培养。其中，生长基质为体积比为1：1的沙土和珍珠岩。移栽后1－10天：温度为光照期27℃，暗期26℃，湿度为90％－95％，光周期为12h/d，光照强度为19000μmol/m2·s；移栽后11－20天：温度为光照期29℃，暗期24℃，湿度为85％－90％，光周期为12h/d，光照强度为21000μmol/m2·s；移栽后21－30天：温度为光照期31℃，暗期22℃，湿度为80％－85％，光周期为12h/d，光照强度为23000μmol/m2·s。153组杂交种试管苗的成活率最低，仅为26.67％，其余各组杂交种试管苗的平均成活率为73.33％。综上所述，本发明提供的杂交种试管苗的炼苗方法和移栽方法，能够有效提高杂交种试管苗的成活率，节约了时间成本和劳动力成本。最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。当前第1页12